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常规RNA测序(bulk RNA sequencing, bulk RNA-seq)在家养动物研究中广泛用于揭示组织水平的转录组差异,但其反映的是群体细胞的平均基因表达,掩盖了组织内的细胞异质性,限制了对复杂性状在细胞层面调控机制的解析。单细胞RNA测序(single cell RNA sequencing, scRNA-seq)具有高精度和高灵敏度,可表征组织的复杂细胞组成并探究细胞异质性背后的遗传调控机制。然而,由于成本高昂、生物系统复杂以及技术操作门槛较高,该技术在家养动物研究中的规模化应用受限。在此背景下,细胞反卷积(single-cell deconvolution)算法应运而生,根据数据特征差异,该方法基于参考表达谱构建、特征基因筛选或无监督学习等策略,可从bulk RNA-seq中推断细胞组成比例,突破其无法解析细胞异质性的瓶颈;部分算法还能进一步预测细胞类型特异性表达趋势,实现从群体到细胞层面的功能解析。近年来,该方法已逐步应用于猪、牛、鸡等家养动物。本文系统梳理了细胞反卷积算法的基本原理、主流算法和在家养动物中的应用现状,重点分析了参考矩阵构建、数据整合和模型适配等方面的技术瓶颈,并探讨其在多组学融合与细胞功能解析中的拓展潜力,旨在为推动细胞反卷积算法在家养动物研究中的深入应用提供理论框架与方法支持。
品种鉴定是保种工作的基础,在家畜遗传资源管理、品种纯度评估、育种策略实施、产品溯源、供应链管理以及保障食品与生物安全等方面具有重要作用。本文综述了常见畜禽(猪、牛、羊、狗、鸡)品种鉴定的传统与现代方法,系统总结了近年来利用机器学习进行品种鉴定的研究进展。传统鉴定方法(如形态学评估、动物理化指标分析)因准确性有限、操作繁琐且耗时,已难以适应大规模品种鉴定的需求。随着智慧畜牧研究的深入发展及高通量组学技术的不断成熟,基于机器学习的品种鉴定方法应运而生,并逐步获得广泛应用。本文梳理了当前品种鉴定领域的重要研究成果,深入探讨了多种机器学习算法的优势与局限,分析了其在实际应用中存在的问题,为相关技术的进一步发展提供参考,也为农业动物的分子育种与精准管理提供理论支持。
牦牛适应青藏高原低温、强紫外、缺氧和营养胁迫为主要特征的极端环境,是高海拔牧区的优势畜种。牦牛属于多功能型牛种,兼具产肉、产绒、乳用及役用性能,其乳用性能未经过高强度选育。牦牛产奶量低,但乳脂率、乳糖和乳蛋白含量均显著高于普通牛。乳汁由乳腺分泌,泌乳是复杂生物过程,依赖于多种细胞协调维持生理功能。乳腺是哺乳动物特有的器官,其发育和功能转换受复杂基因网络的调控。随着组学技术的发展和功能基因组学研究的深入,人、小鼠和普通牛等物种乳腺发育的核心调控因子得到解析,控制泌乳过程和乳脂分泌等关键过程的调控网络逐渐清晰。虽然产乳性状是牦牛重要的经济性状,但关于牦牛乳腺和泌乳基因调控网络的研究相对较少。本文系统总结了牦牛乳腺在形态、发育、泌乳机制、泌乳性能等方面与其它物种的相似性和异质性,提出了牦牛相关方面亟需解决的关键科学问题,以期为乳腺生物学研究和牦牛产乳性状功能基因的鉴定提供重要的信息。
肠道既是营养物质消化吸收的场所,又是防御病原体的天然屏障,其健康程度与畜禽生长性能和机体免疫能力密切相关。因此,如何提升畜禽肠道健康水平,已成为学者们关注的热点问题。植物精油(plant essential oil,PEO)是从植物中提取的一种低分子量的次生植物代谢物,近年来研究发现,PEO可增强肠道屏障功能、促进肠道有益菌群定植,对于改善肠道健康具有一定积极作用。本文从肠道形态、肠道屏障功能及肠道菌群等方面系统地综述了PEO对畜禽肠道健康的影响及调控作用,并探讨了其潜在的作用机制,以期为PEO的开发利用提供参考。
反刍动物瘤胃发酵以甲烷形式损失2%~12%的饲料能量,同时对环境造成不利影响,寻找经济有效的方法减少反刍动物甲烷排放,成为当前研究的重点。通过合理的饲粮搭配和放牧管理措施,可以调控瘤胃微生物代谢途径,降低产甲烷菌活性,并提高宿主对养分的利用率,从而减少甲烷排放。本文综述了目前关于不同饲粮营养策略(如调整日粮组成、牧草的选择与利用、牧草加工与保存等)和放牧管理措施(如载畜量、放牧方式和放牧强度)对反刍动物肠道甲烷减排的有效性及其缓解机制,并讨论了这些策略的适用性和应用潜力,为反刍动物甲烷减排提供理论依据和实践指导。
β-内酰胺酶是一种能水解β-内酰胺类抗生素的酶,其在牛乳中的残留问题日益受到关注。牛乳中β-内酰胺酶残留的内源性因素与奶牛自身的健康状况有关,而外源性因素主要涉及人为非法添加。β-内酰胺酶残留可能引起多种健康风险,包括细胞毒性分解产物的积累、抗生素失效、人体对药物产生抗性等。目前,牛乳中β-内酰胺酶残留的检测方法包括微生物法、碘量法、酸度计法、仪器检测法和快速检测法等,但这些方法均存在局限性。本文综述了牛乳中β-内酰胺酶的生物学特性、来源以及最新检测方法的研究进展,探讨了检测方法的局限性,并对未来的管理措施以及新兴技术的检测方法进行了展望,以期能够为检测人员和研究工作者提供科学依据与参考,提高奶制品安全水平。
运输应激是影响牛健康和生产性能的重要因素,涉及其代谢、消化、内分泌、免疫等多个生理系统。在运输过程中,多种应激源(如禁食、缺水、温度波动、拥挤、装卸等)会对牛生理机能造成负面影响,引起应激激素大量产生和瘤胃微生物群落丰度改变,进而降低免疫功能和抗氧化能力,造成组织器官损伤,最终影响整体健康和生产性能。本文综述了运输应激引起牛机体生理失衡的变化机制,以期为明确牛运输应激防控靶点和提高牛运输过程中的动物福利提供理论参考。
旨在通过基因组学方法系统评估河套大耳猪的群体遗传特征,为其种质资源保护提供科学依据。本研究基于50K SNP芯片数据,采用plink (v1.90)、GCTA软件(v1.93)、MEGAX (v10.0)等软件进行分析获得PCA、遗传距离、亲缘关系、近交系数以及系统发育树信息,利用多维度分析方法对78头河套大耳猪进行检测。群体结构分析表明,该群体可划分为4个亚群,平均遗传距离为0.793,6个公猪血统构成其家系基础。基因组纯合片段(ROH)分析共检测到2 601个片段,个体平均携带21个ROH,平均长度7.77 Mb,群体近交系数(FROH )为0.13。综合分析显示,该群体具有家系数量有限、公畜血统较少、中等亲缘关系、低近交水平等特点。这些基因组层面的研究结果为河套大耳猪的种群优化和遗传改良提供了重要参考。
旨在探究ZNF697对猪骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells, MuSCs)增殖及分化的影响。本试验以猪MuSCs为研究对象,利用流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光染色等方法检测ZNF697对猪MuSCs增殖及分化的影响。获得以下研究结果:1)ZNF697 mRNA的表达量随猪MuSCs增殖而动态变化,干扰ZNF697抑制Cyclin E(P<0.01)、Cyclin D(P<0.05)mRNA表达和Cyclin B(P<0.05)蛋白表达,促进p21(P<0.01)mRNA表达,过表达ZNF697取得相反的结果。2)ZNF697在猪MuSCs成肌分化过程中表达逐渐升高,干扰ZNF697显著降低成肌分化指数(P<0.05),抑制MyoG(P<0.01)mRNA表达、MyHC(P<0.05)、MyoD(P<0.01)mRNA和蛋白表达,过表达ZNF697取得相反的结果。本研究鉴定了猪MuSCs增殖与成肌分化的促进因子——ZNF697,为培育高瘦肉率的优良猪种提供了育种靶点。
旨在建立高效的猪细胞基因编辑技术体系,为引导编辑(prime editing,PE)系统在猪遗传育种上的应用奠定基础。本研究从VIM基因编码区选取多个候选位点,严格遵循CRISPR/Cas9系统的靶位点设计原则,进行sgRNA设计。通过生物信息学工具对候选sgRNA进行评分,筛选出评分最高的两条sgRNA序列,以上述优选的两条sgRNA为基础,进一步设计对应的pegRNA。利用药物hydroxyurea和nocodazole处理细胞使其停留在G1/S或G2/M时期,并将nCas9-RT融合蛋白编辑器载体和pegRNA表达载体电转染进细胞,48 h后提取混合细胞基因组DNA,PCR扩增靶位点后进行二代测序,利用CRISPResso2分析编辑结果。结果表明,PE2系统在PK15细胞中的编辑效率为0.16%~14.03%。在IPEC-J2细胞中的编辑效率为0.08%~0.58%。PEmax系统在PK15细胞上的编辑效率为0.63%~23.25%。而PE4和PE4max系统在PK15细胞中的编辑效果较差,编辑效率最高分别为0.7%和0.36%。调控细胞周期可以提升PE2系统对猪VIM 基因单碱基替换和单碱基缺失两者编辑类型的编辑效率,前者编辑效率提升了1.4倍,后者编辑效率提升了2.6倍。结果显示,PE技术能够对猪VIM基因进行多种不同类型的精确编辑且通过细胞周期调控能够提升其编辑效率。可以为下一步结合体细胞克隆技术制备生产性能改良较高的猪群体提供技术参考。
旨在探讨大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)和丁酸梭菌(Clostridium butyricum,C. butyricum)及代谢物对猪肠道上皮细胞(IPEC-J2)线粒体功能及相关代谢途径的影响,为调控肠道健康提供理论依据。本试验首先通过筛选确定将培养至3 h时处于对数生长期且活性最好的细菌悬液用于后续试验。然后用不同浓度的大肠杆菌、丁酸梭菌、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)和短链脂肪酸(short-chain fatty acid,SCFAs)去处理IPEC-J2细胞,每组设置3个重复,分析细胞活力和细胞形态结构筛选出最佳的处理时间和浓度,测定三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位、抗氧化及线粒体功能相关基因表达。结果显示:1)筛选出大肠杆菌和丁酸梭菌处理IPEC-J2细胞的浓度分别为108 CFU·mL-1和106 CFU·mL-1,处理时间为1 h,SCFAs和LPS处理时间为1 h;2)丙酸和大肠杆菌处理组显著提高了ROS含量(P<0.05);丁酸梭菌和LPS显著降低了ROS含量(P<0.05);3)丁酸梭菌显著上调了ACC1、NRF1、TFAM、HO-1、APAF-1、PIG3、p53的表达(P<0.05),大肠杆菌处理组下调了TFAM和CtyC的表达(P<0.05),上调了p53的表达(P<0.05),丙酸和乙酸处理对各基因表达均无显著性影响。以上结果表明,SCFAs促进了细胞代谢,大肠杆菌和LPS激活细胞凋亡和生物氧化应激过程,丁酸梭菌可以激活IPEC-J2细胞线粒体脂质代谢、抗氧化系统和细胞凋亡,为靶向线粒体的肠道微生态调控策略提供了新视角。
旨在估计“敏盖”绒山羊绒毛性状的遗传参数和基因组育种值,比较GBLUP和Bayes方法对“敏盖”绒山羊绒毛性状基因组育种值预测准确性的影响,为优化“敏盖”绒山羊遗传选育策略提供参考依据。本研究以847只“敏盖”绒山羊的绒毛性状为研究对象,利用GBLUP、Bayes A、Bayes B、Bayes C和Bayes LASSO五种方法进行绒毛性状(毛长、绒厚、绒细、产绒量)遗传参数及基因组育种值的估计,进一步利用五倍交叉验证方法评价基因组育种值估计准确性。结果显示,5种方法估计的毛长遗传力为0.11~0.32,绒厚遗传力为0.14~0.33,绒细遗传力为0.17~0.49,产绒量遗传力为0.16~0.32。绒厚和毛长之间存在正的强遗传相关,相关系数为0.48~0.84,其它性状间的遗传相关相对较小,为-0.06~0.46;GBLUP、Bayes A、Bayes B、Bayes C和Bayes LASSO方法估计的毛长、绒厚、绒细和产绒量的基因组育种值准确性分别为0.623 4~0.950 9、0.626 2~0.953 0、0.830 8~0.953 1、0.741 8~0.961 4。Bayes方法估计的各性状的基因组预测准确性均显著高于GBLUP方法,Bayes B方法的基因组预测准确性最高,达0.950 9~0.961 4。综上所述,Bayes B方法被推荐用于“敏盖”绒山羊基因组选育,可能会加快种群的遗传进展。
旨在评估当母亲基因型数据缺失的情况下,不同芯片密度和单倍型窗口长度对外祖父识别准确性的影响,为利用基因组信息准确构建系谱关系提供可靠技术手段。本研究基于6 117头奶牛的基因组芯片数据,分别构建低密度芯片(5K、10K)和中等密度芯片(20K、50K)数据集,并设置5、10、35、75和120五种SNP窗口长度,将全基因组划分为连续的单倍型片段并进行单倍型推断。随后,结合子代个体已知的父本基因型信息,剔除与父源完全一致的单倍型片段以推断母源单倍型序列,并与候选公牛单倍型逐片段比对,计算单倍型匹配率,并选取匹配率最高的个体作为候选外祖父。同时,选取345头谱系信息完整可靠的个体用于方法准确性验证。此外,研究还进一步计算了个体的亲缘系数与近交系数,以揭示亲缘关系与近交对鉴定方法的潜在影响。结果表明,基于单倍型分段匹配的识别方法在绝大多数芯片密度与窗口长度的条件下,均可实现90%以上的鉴定准确率,其中20K×35 SNPs的组合表现最优,准确率高达98%,方法整体表现出较高的准确性与稳定性。然而,不同组合条件下的最优判定阈值和准确性存在明显差异,提示芯片密度与窗口长度对方法性能具有重要影响。进一步分析显示,亲缘关系与近交水平同样显著影响匹配效果与准确性,提示在实际应用中需综合考量群体遗传背景的影响。综上所述,该方法在母系信息缺失及大规模实际生产群体背景下展现出较高的鉴定准确性,可作为外祖父识别的有效手段。此外,结合群体遗传背景合理选择芯片密度与窗口长度是提升鉴定效果的关键。
旨在系统鉴定奶牛中与基因表达显著相关的短串联重复序列(expression short tandem repeats,eSTRs),解析其在调控基因表达及复杂经济性状中的作用,为奶牛分子育种提供功能变异资源。本研究选用108头中国荷斯坦牛进行尾静脉血样采集,提取基因组DNA和总RNA,分别进行30×深度全基因组重测序和转录组测序。因部分样本质量较差,最终保留105头样本用于分析。对于遗传变异,利用TRF和HipSTR完成STR群体规模的注释和定量。对于基因表达,以Trimmomatic进行质量控制,STAR比对到参考基因组以及edegR定量。接着,以基因转录起始位点±1 Mb范围为窗口,采用线性模型将基因表达与STR进行关联分析,鉴定得到cis-eSTR。之后结合加权共表达网络分析(weighted correlation network analysis,WGCNA)及Gene Ontology(GO)富集分析,探索其在复杂性状中的潜在功能。共鉴定出25 154对显著的cis-eSTR-基因表达关联,cis-eSTR主要分布于内含子区及转录起始位点附近。加权基因共表达网络分析显示,受cis-eSTR调控的基因被划分为多个功能模块,部分模块与奶牛的产奶及免疫相关性状显著相关。GO富集分析显示,这些模块广泛参与免疫应答、脂质代谢、细胞周期、DNA复制与稳定性等生物过程。多个关键基因(如IRF7、BoLA-DRB、CCT2等)在免疫调控与乳腺功能中具有潜在功能意义。cis-eSTR在调控奶牛基因表达和复杂性状方面具有重要作用。本研究所构建的cis-eSTR资源为奶牛健康等复杂性状的遗传机制研究和分子育种实践提供了功能注释信息标记。
旨在通过对影响乳脂合成相关的DE-circ RNAs进行深入分析,探究其构建的分子网络对奶牛乳脂合成的影响。本研究利用前期构建的高、低乳脂率荷斯坦奶牛circRNA的文库和转录组测序数据,筛选并鉴定出的与乳脂合成相关的DE-circ RNAs(circPRKAA2),进一步使用Targetscan和miRanda软件预测其ceRNA调控网络,并利用实时荧光定量、RNA pull down和双荧光素酶报告试验等分子实验技术进行靶向关系验证,结合油红O和BODIPY染色探索靶miRNA对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)脂滴分泌的影响。结果表明,成功预测并验证了ceRNA(circPRKAA2/miR-22-3p/SLC27A1)网络的调控关系,预测得到9个miRNA及10个候选mRNA,验证了miR-22-3p为其关键枢纽,并探明了circPRKAA2和miR-22-3p主要分布于BMECs的细胞质中。circPRKAA2在BMECs内参与乳脂合成的过程中对miR-22-3p进行负调控。miR-22-3p抑制BMECs中脂滴的分泌、甘油三酯和胆固醇的生成,并对SLC27A1进行负调控。综上所述,本研究分析验证了circPRKAA2/miR-22-3p/SLC27A1的靶向关系及对乳脂合成的调控作用,以期为改善牛奶品质提供新的见解。
旨在探究伊犁马5 000 m竞赛前后血液中基因差异表达及心脏指标与差异表达基因间的关联性。本试验选用参加国家级赛事5 000 m速度赛前8名中的6匹精英伊犁马为研究对象,使用迈瑞M6兽用便携式彩色多普勒超声系统采集马匹5 000 m速度赛前静息状态下超声心动图以及竞赛前后马匹血液,用于转录组测序。结果表明,共筛选出889个差异表达基因,其中有上调基因751个、下调基因138个。GO和KEGG富集分析发现,差异表达基因主要涉及细胞对刺激应答、免疫调控等生物过程,以及参与细胞免疫反应和炎症的MAPK、Jak-STAT信号通路等。筛选出CCL3、CSF1、CSF3、IFNG、IL4、IL10为关键基因,关键基因赛后表达量与心脏结构指标的相关性中,CCL3与PADs极显著正相关(P<0.01)、与LVIDd显著正相关(P<0.05)、与RWTd显著负相关(P<0.05),CSF1与PADd极显著正相关(P<0.01)、与RWTd显著负相关(P<0.05),CSF3与IVSd、EDV显著负相关(P<0.05),IFNG与PADd显著正相关(P<0.05)、与IVSd、MWTd、RWTd显著负相关(P<0.05),IL10与LVLD极显著正相关(P<0.01)、与MVD显著正相关(P<0.05)、与EDV显著负相关(P<0.05);关键基因赛后表达量与心脏功能指标的相关性中,CSF3与SV、SI、CI、VTI呈显著负相关(P<0.05),IFNG与SI呈显著负相关(P<0.05),IL10与CO、CI、VTI呈显著负相关(P<0.05);并且CSF1、IFNG赛后表达量与伊犁马5 000 m运动性能显著负相关(P<0.05)。心脏指标与CCL3、CSF3、IL4、IL10调控机制在伊犁马5 000 m竞赛中发挥重要作用,CSF1、IFNG的表达水平可作为评估伊犁马运动性能的候选基因。
旨在探索梅花鹿鹿茸干细胞(reserve mesenchyme cells,RMCs)对过氧化氢诱导衰老的人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts, HDFs)的抗衰老作用及分子机制。本研究采用200 µmol·L-1 H₂O₂处理构建HDFs衰老模型,并通过SA‑β‑gal染色验证模型成功建立,通过与RMCs共培养后,检测衰老HDFs的细胞增殖与迁移能力、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;进一步利用4D‑DIA蛋白质组学技术,鉴定共培养条件培养基与衰老HDFs条件培养基中的差异蛋白,并进行生物信息学富集分析。细胞功能检测表明,与模型组相比,RMCs共培养组HDFs的增殖与迁移能力显著提高(P<0.01),同时SOD活性显著提高(P<0.05),MDA含量降低(P<0.05)。在共培养条件培养基中鉴定289种差异蛋白,其中ATP1A1、COL7A1、IGF2R及MMP3等关键分子的表达发生显著改变。KEGG富集分析揭示蛋白酶体、PPAR信号通路、细胞外基质–受体相互作用及粘着斑通路为主要调控轴。本研究结果提示,梅花鹿RMCs可通过减轻氧化应激改善衰老细胞功能,推测RMCs可能通过增强蛋白酶体介导的损伤蛋白清除、激活PPARγ抑制炎症与氧化应激,促进COL7A1‑依赖的真皮‑表皮连接重建与抑制MMP3介导的ECM降解,共同维护HDFs的稳态与功能。本研究为鹿茸干细胞分泌产物的皮肤抗衰老策略提供了理论基础。
旨在探讨热应激对猪睾丸支持细胞抗氧化功能的影响,并进一步明确白藜芦醇(RES)缓解氧化应激的作用及其潜在机理。本研究采用猪睾丸支持细胞原代培养体系,设置对照组(NC,34 ℃)、热应激组(HS,43 ℃ 30 min)和热应激+白藜芦醇组(HS+200 nmol·L-1 RES),检测ROS水平、MDA和AGEs含量以及SOD和CAT活性,实时荧光定量PCR技术检测RAGE、NOX4和NF-κB基因的表达水平。结果表明,热应激组的猪睾丸支持细胞内ROS水平(P<0.05)、MDA含量(P<0.05)和AGEs含量(P<0.01)显著增加,同时SOD和CAT活性显著降低(P<0.01),表明热应激诱导了猪睾丸支持细胞发生氧化应激。采用200 nmol·L-1 RES预处理后,猪睾丸支持细胞内ROS水平、MDA含量和AGEs含量显著降低(P<0.05),SOD和CAT活性得到恢复(P<0.05)。此外,RES显著下调了由热应激诱导的RAGE、NOX4和NF-κB基因表达水平(P<0.05)。热应激导致猪睾丸支持细胞氧化还原平衡失衡而诱导氧化应激,白藜芦醇通过抑制AGEs-RAGE/NOX4/NF-κB通路活性以缓解热应激诱导的氧化应激。本研究结果为利用白藜芦醇改善夏季公猪精液品质提供了理论支撑。
旨在研究牛DLK1-DIO3区域的印记状态和DNA差异甲基化区(differentially methylated regions,DMRs)。对3个牛的胎盘、及其亲本进行全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),挖掘单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)信息;联合转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)数据,确定基因的印记状态;联合全基因组亚硫酸盐测序(whole genome bisulfite sequencing,WGBS)数据,确定DNA的差异甲基化区。WGS与RNA-seq测序结果联合分析表明,牛MEG3、MEG8和MEG9基因为母源等位基因表达的印记基因,DLK1、RTL1和DIO3基因为父源等位基因表达的印记基因。WGBS数据分析发现,除与人和小鼠保守的Dlk1-DMR、IG-DMR、Gtl2-DMR和Meg8-DMR外,还发现5个新的DMRs,分别为位于DLK1基因上游的DLK1-DMR0和DLK1-DMR1、MEG9启动子区域的MEG9-DMR及DIO3上游的DIO3-DMR1和DIO3-DMR2。上述结果表明,DLK1-DIO3印记区域的印记状态和差异甲基化区在牛、人和小鼠中高度保守,此外,新发现了5个DMRs,其对DLK1-DIO3区域的调控机制有待于进一步研究。
本研究采用间歇性限饲(IF)的饲喂方法,探究该种饮食方法对小鼠卵巢功能的影响及机制,旨在为家畜繁殖管理提供理论依据。本研究采用8周龄体重相近的C57BL/6J雌鼠,随机分为两组,一组为正常饮食对照组(ND),另一组通过“1天限饲(70%采食量)-1天自由采食”的循环模式建立间歇性轻度限饲(IMF)小鼠模型,检测小鼠生长性能,通过Western blot(WB)及免疫组化试验检测卵巢功能及自噬相关蛋白的表达。结果表明,IMF可显著降低料重比(82.85±2.68 & 93.02±7.40)和腹腔脂肪指数(1.49±0.11 & 1.72±0.19),同时上调自噬标志物LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(1.06±0.12 & 0.89±0.02)和生殖功能蛋白BMP-15(1.05±0.08 & 0.75±0.10)、GDF-9(0.53±0.02 & 0.44±0.02)。研究表明,IMF通过抑制mTOR通路(p-mTOR/mTOR 0.82±0.10 & 0.97±0.05)激活自噬,进而改善卵巢功能。本研究首次揭示了IMF通过自噬途径促进卵巢功能的作用机制,为家畜繁殖调控技术提供了一种潜在的非药物策略。
旨在探讨日粮中添加过瘤胃脂肪(RPF)对育肥牦牛脂肪沉积及相关基因表达的影响。选取体重相近的公牦牛24头(275.63±9.84 kg)随机分为3个处理组,每组8头牛,分别为:1)对照组(CON),饲喂基础日粮;2)1.5%RPF添加组(RPF 1.5),饲喂基础日粮添加1.5% RPF;3)3%RPF添加组(RPF 3.0),饲喂基础日粮添加3.0% RPF。试验期90 d,试验期末统一屠宰后采集背最长肌及腹部脂肪样本分析营养成分、脂肪酸组成、脂肪组织形态学及相关基因表达。结果表明:各组牦牛肌肉能量、蛋白质含量无显著差异,肌内脂肪(IMF)含量差异显著(P<0.05),并随RPF补充剂量增加而显著增加(P<0.05)。RPF3.0组肌肉脂肪酸组成中顺-11,14-二十碳二烯酸显著大于CON组(P<0.05),RPF1.5组中顺,顺,顺-8,11,14-二十碳三烯酸以及顺-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸显著大于CON组(P<0.05),RPF对育肥牦牛肌肉组织中饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸比例无显著影响。在脂肪组织形态学方面,单位面积IMF细胞个数、平均细胞面积及腹部脂肪细胞面积随RPF添加水平增加而逐渐增加。背最长肌中,RPF1.5与RPF3.0组脂肪代谢转录调控因子PPARγ、SREBP-1、FABP4基因表达均显著高于CON组(P<0.05),RPF 3.0组中脂肪从头合成关键酶ACC和FAS基因表达显著低于CON组(P<0.05),同时RPF1.5与RPF3.0组DGAT-1与CPT-1表达显著高于CON组(P<0.05)。腹部脂肪组织中转录调控因子C/EBPα基因表达随RPF补充剂量增加而显著增加(P<0.05),RPF1.5与RPF3.0组中PPARγ、FABP4基因表达显著高于CON组(P<0.05),RPF1.5与RPF3.0组中脂肪从头合成的关键酶ACC基因表达显著低于CON组(P<0.05),DGAT-1基因表达随RPF添加剂量增加而显著升高(P<0.05),RPF1.5与RPF3.0组中LPL基因表达显著高于CON组(P<0.05)。综上,日粮补充RPF能够有效促进育肥牦牛IMF及腹部脂肪沉积,通过调控脂肪组织脂肪代谢相关转录调控因子及关键酶基因表达,减弱脂肪从头合成,直接利用PRF的脂肪酸以脂肪合成,3.0% RPF补充效果优于1.5%。
旨在研究荷斯坦牛和湘西黄牛瘤胃发酵参数及微生物区系的差异,为探索不同遗传背景的动物瘤胃微生物生态系统的组成和和功能特征提供参考,同时也为品种特异性饲养策略的制定提供科学依据。选择状态良好的成年荷斯坦牛(241.3±9.1 kg)和湘西黄牛(206.0±8.4 kg)各12头作为试验对象,所有试验动物均饲喂其常规饲粮。试验采集瘤胃液进行瘤胃发酵参数测定,同时应用16S rRNA测序分析瘤胃微生物群落结构和功能。结果表明:1)湘西黄牛的干物质消化率(DMD)、有机物消化率(OMD)、中性洗涤纤维消化率(NDFD)和酸性洗涤纤维消化率(ADFD)均显著高于荷斯坦牛(P<0.001)。2)湘西黄牛的瘤胃pH显著高于荷斯坦牛(P<0.001);湘西黄牛的瘤胃溶解氢(dH2)、溶解甲烷(dCH4)和氨态氮(NH3-N)浓度显著低于荷斯坦牛(P<0.001),而溶解氢与溶解甲烷比值(dH2/dCH4)显著高于荷斯坦牛(P<0.001);瘤胃发酵产物中,荷斯坦牛的总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度及丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸摩尔比例更高,而湘西黄牛的乙酸摩尔比例和乙丙比更高(P<0.001)。3)α多样性结果显示,湘西黄牛拥有更丰富和多样性的瘤胃微生物群落;荷斯坦牛瘤胃中主要差异富集了有益杆状菌属(Agathobacter)、丁酸弧菌属(Butyrivibrio)和毛螺菌属(Lachnospira)等功能菌(P<0.05),而湘西黄牛瘤胃微生物中主要差异富集了纤维杆菌门(Fibrobacteres)、糖发酵菌属(Saccharofermentans)、慢生微菌属(Lentimicrobium)、解琥珀酸菌属(Succiniclasticum)和醋杆菌属(Acetatifactor)等功能菌(P<0.05)。4)碳水化合物代谢通路(Carbohydrate metabolism)和其他氨基酸的代谢通路(Metabolism of other amino acids)在荷斯坦牛中显著富集(P<0.05),核苷酸代谢通路(Nucleotide metabolism)和其他次级代谢的生物合成通路(Biosynthesis of other secondary metabolites)在湘西黄牛中显著富集(P<0.05)。上述结果表明,荷斯坦牛和湘西黄牛营养物质消化率、瘤胃发酵参数及瘤胃微生物区系存现明显差异;荷斯坦牛瘤胃偏向丙酸型发酵模式,对非纤维植物多糖和蛋白质的消化能力更强;湘西黄牛瘤胃偏向乙酸型发酵模式,对纤维类物质的消化能力更强。
本试验以7日龄断奶的仔猪为对象,探讨以小麦水解蛋白(hydrolyzed wheat gluten, HWG)替代人工乳中不同比例的乳清浓缩蛋白(whey protein concentrate, WPC)对仔猪生长性能、养分代谢、免疫功能和抗氧化能力的影响。试验选取45头健康的7日龄“杜×长×大”阉公猪,按照体重相近的原则随机分为4个处理,即对照组(n=15)、33%HWG组(n=10)、66%HWG组(n=10)和100%HWG组(n=10),分别饲喂4种人工乳,即将不同比例的HWG分别替代对照组人工乳中的WPC,比例分别为0%、33%、66%和100%,试验期为13 d。结果表明,HWG替代人工乳中WPC会影响仔猪的生长性能、氮代谢、脂肪代谢、肾功能、免疫功能和抗氧化能力;与对照组相比,HWG替代WPC比例为66%和100%显著降低仔猪平均日采食量和平均日增重(P<0.05),显著提高了仔猪料重比和腹泻指数(P<0.05),显著减少血清肌酐(P<0.05),显著提升了血清丙二醛水平(P<0.05);此外,HWG替代WPC比例为66%时血清免疫球蛋白A和M水平也显著降低(P<0.05);替代比例为100%时,血清高密度脂蛋白胆固醇水平显著升高(P<0.05)。当HWG替代WPC比例为33%仅表现为显著提高仔猪血清尿素和高密度脂蛋白胆固醇水平(P<0.05)。综上所述,在人工乳中使用HWG替代不同比例WPC,可能不利于超早期断奶仔猪的生长性能、养分代谢、免疫功能和抗氧化功能,但当添加比例为33%时负面影响不显著。
旨在研究戊糖片球菌368菌对杜撒猪粪便中古菌和代谢产物组成的影响。采用单因素实验设计,选用体重约为77 kg的杜撒猪20头,随机分为2组,对照组和试验组每组10头。试验组饮水中添加戊糖片球菌368(1010 CFU·L-1)。试验期为28 d。试验结束当天进行屠宰测定,通过粪便的古菌和代谢产物分析,评价戊糖片球菌368对杜撒猪的影响。结果显示:1)主坐标PCoA(Principal Coordinates Analysis)分析发现,试验组和对照组样品未能完全分开,添加戊糖片球菌368后,试验组的物种相似性趋于一致。2)门水平上,两组相对丰度最高的是暂定种_雷神古菌门,属水平上,两组相对丰度最高的为甲烷短杆菌属;当LDA(Linear Discriminant Analysis)值大于3.0时,两组共获得14个生物标志物。其中试验组获得14个生物标志物,试验FA组内LDA值最大的是未分类的热原体纲。3)KEEG代谢通路分析发现,当LDA值大于3.0时,筛选出4个基因功能:折叠,排序和降解(Folding_sorting_and_degradation),膜转运(Membrane_transport),细胞运动(Cell_motility)和信号转导(Sgnal_transduction)。CAZy(Carbohydrate-Active Enzymes Database,碳水化合物活性酶数据库)水平功能分析发现,当LDA 值大于3.0时,两组共获得21个生物标志物,其中试验组13个,试验组内LDA值最大的是CBM20,对照组内LDA值最大的为GT2。4)粪便短链脂肪酸分析发现,试验组样品中丁酸和异戊酸含量显著下降(P<0.05)。5)差异代谢产物的KEGG通路富集分析发现差异显著的有12条,分别为:类黄酮的降解,亚油酸的代谢,角质,亚蜡和蜡的生成,精氨酸生物合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成,大麻素信号,苯丙素的生物合成,不饱和脂肪酸的生物合成,自噬-动物,脂肪酸的生物合成,疱疹病毒感染;GSEA(Gene Set Enrichment Analysis,基因集富集分析)发现3种显著基因:甘油磷酸酯代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢和不饱和脂肪酸的生物合成。综上所述,杜撒猪饮水中添加戊糖片球菌368,其粪便中古菌的物种趋于一致,提高粪便中与信号转导、细胞运动、氨基酸和脂肪代谢相关功能的微生物功能基因的相对丰度,具有提高氨基酸和脂肪代谢相关菌和酶类的益生功能。
旨在研究日粮中添加酱香型干白酒糟对生长育肥猪生长性能、养分全消化道表观消化率(ATTD)、肉品质、血清免疫及抗氧化功能、肠道健康的影响,明确茅台酱香型干白酒糟在生长育肥猪日粮中的适宜添加比例。本试验采用单因素试验方案,挑选389头体重约97 kg的健康杜×长×大三元杂交育肥猪为研究对象。随机分为3个处理组,每个处理组包含4圈(重复),每圈猪数量在31到34头之间。对照组饲喂以玉米、豆粕为主要成分的基础型日粮,试验组则分别在对照组日粮的基础上添加5%、10%干白酒糟等能等氮替代部分玉米、豆粕和小麦麸皮。试验期为44 d。结果显示:1)与对照组相比,日粮添加10%干白酒糟组平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)分别增加了5.37%和4.61%,死淘率比对照组低0.78百分点,造肉成本下降0.02元·kg-1,但差异均不显著(P>0.05);2)与对照组相比,日粮添加10%干白酒糟显著降低了生长育肥猪粗蛋白质、粗灰分和钙的表观消化率(P<0.05),具有降低磷的表观消化率的趋势(P<0.1),对粗脂肪的表观消化率无显著影响(P>0.05);3)与对照组相比,日粮添加5%或10%干白酒糟显著降低了生长育肥猪血清中内毒素含量、二胺氧化酶和白介素-6的水平(P<0.05),日粮添加10%干白酒糟具有提高血清中过氧化氢酶含量的趋势(P<0.1);4)与对照组相比,日粮添加10%干白酒糟显示出滴水损失降低的趋势(P<0.1),日粮添加5%干白酒糟显著提高了红度a*值(P<0.05);5)日粮添加5%或10%干白酒糟处理组生长育肥猪空肠黏膜、肝和脾未见明显的形态损伤。综上所述,日粮添加10%干白酒糟可提高生长育肥猪的生长性能、增强肠道屏障功能,减轻炎症反应并改善屠宰性状和肌肉品质,提高养猪经济效益。
旨在通过粪菌移植(fecal microbiota transplantation,FMT)改变老年蛋鸡肠道菌群结构,探讨肠道菌群重塑对产蛋后期蛋鸡生产性能的影响。选取28周龄海兰灰蛋鸡40只和68周龄海兰灰蛋鸡250只,观察记录7周产蛋率后,根据产蛋性能分为35周龄高产(YH,产蛋率(LR)>90%,37只),75周龄高产(OH,LR>90%,76只)、75周龄低产(OL,30%<LR<60%,104只)。第8周时进行粪菌移植(FMT),菌群移植周期为4周。将青年高产蛋鸡粪菌悬浊液灌喂给老年高产蛋鸡(OHFMT-YH组),将老年高产蛋鸡粪菌悬浊液灌喂给老年低产蛋鸡(OLFMT-OH组),OH组、OL组为对照组。每组5个重复,每个重复6只鸡。结果表明,与OH组相比,老年高产蛋鸡接受青年高产蛋鸡菌群移植后(OHFMT-YH组),产蛋率、蛋壳强度、蛋壳厚度,血液中sIgA、IL-10水平、空肠绒毛高度、黏膜层厚度、空肠FOXP3、ZO-1 mRNA表达水平、乙酸含量和拟杆菌丰度显著下降(P<0.05),蛋黄重,血液中IL-1β、IL-17A、IL-6水平,盲肠黏膜层、肠壁厚度和厚壁菌丰度显著上升(P<0.05),OTUs数量减少,菌群结构呈明显分离。与OL组相比,老年低产蛋鸡接受老年高产蛋鸡菌群移植后(OLFMT-OH组),产蛋率,蛋壳强度,血液中IL-10水平,空肠绒毛高度、黏膜层厚度,FOXP3、ZO-1mRNA表达水平,杯状细胞数量,盲肠黏膜层厚度,乙酸含量,拟杆菌丰度显著上升(P<0.05),蛋重,鸡蛋长径,蛋黄重,血液中IL-1β水平,盲肠肠壁厚度,空肠STAT3mRNA表达水平和厚壁菌丰度显著下降(P<0.05),β多样性显示菌群结构发生改变。LEfSe分析显示OHFMT-YH组和OL组中对差异性贡献度最大的均为厚壁菌,而OH组和OLFMT-OH组中对差异性贡献度最大的均为拟杆菌。综上所述,老年高产蛋鸡接受青年高产蛋鸡FMT会增加肠道中厚壁菌丰度,降低产蛋率,接受老年高产蛋鸡FMT进而提高老年低产蛋鸡肠道中拟杆菌丰度,可以改善肠道菌群结构及肠道健康,提高产蛋性能。以上发现说明,通过FMT调节肠道菌群组成将会是一项提高老年蛋鸡在产蛋后期生成性能在潜在策略。
旨在研究红象草花青素对白羽肉鸡生长性能、抗氧化能力和盲肠微生物结构的影响。选取210只健康、体重相近的圣泽“901”1日龄白羽肉鸡公雏,随机分为5组,每组6个重复,每个重复7只鸡。各组饲喂相同基础日粮,对照组饮水中不添加花青素,试验1组、2组、3组饮水中分别添加50、100和200 mg·kg-1红象草花青素,试验4组饮水中添加100 mg·kg-1紫薯花青素,试验期42 d。结果显示:1)饮水中添加红象草花青素对白羽肉鸡的生长性能无显著影响(P>0.05)。2)21日龄肉鸡中,试验2组的血清和肝脏丙二醛(MDA)含量均显著低于对照组(P<0.05),血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量及肝脏过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)含量均显著高于对照组(P<0.05);42日龄肉鸡中,试验2组的血清SOD含量及肝脏GSH、GSH-Px含量均显著高于对照组(P<0.05)。3)与对照组相比,21日龄试验组中SOD1、SOD2、GPX1、HO-1的mRNA相对表达量和42日龄试验组中NQO1、GPX1、SOD1、HO-1的mRNA相对表达量显著提高(P<0.05)。4)与对照组相比,21日龄试验3组的厚壁菌门显著减少(P<0.05),拟杆菌门、拟杆菌属显著增加(P<0.05);42日龄试验1组的大肠杆菌属和乳杆菌属及试验3组的大肠杆菌属均显著增加(P<0.05),试验1、2、4组的艾森贝格氏菌属均显著减少(P<0.05)。综上,本试验条件下,饲粮添加红象草花青素可提高白羽肉鸡的血清和肝抗氧化能力,并可调节肠道微生物群落结构,提高抵抗氧化应激的能力。
旨在研究1~21日龄快速型黄羽肉鸡代谢能需要量。选取体重相近、健康的1日龄湘佳黄鸡公雏和母雏各450只,分别按体重将公雏随机分为5组,母雏随机分为5组(每组6个重复,每重复15只),采用单因素完全随机设计,分别饲喂不同代谢能水平日粮(公雏:11.51、11.92、12.34、12.76、13.18 MJ·kg-1;母雏:11.30、11.72、12.13、12.55、12.97 MJ·kg-1),试验期21 d。结果表明:1)生长性能方面,1~21日龄公雏体重(BW)、平均日增重(ADG)随着代谢能水平的提高呈二次变化(P<0.01),母雏体重、平均日增重与代谢能水平呈极显著正相关(P<0.01);平均日采食量、耗料增重比随着代谢能水平的提高极显著线性减少(P<0.01);2)屠宰性能方面,公雏屠宰率、净膛率、腹脂率随着代谢能水平的提高线性增加(P<0.05),母雏腹脂沉积受代谢能的影响更为敏感,腹脂率呈极显著增加(P<0.01);3)血清生化方面,公雏尿酸含量随代谢能水平提高显著增加再降低的二次曲线特征(P<0.05)。综上,通过代谢能摄入量/平均日增重与代谢体重/平均日增重之间的线性关系进行拟合和变式,得到预测方程如下:公雏:代谢能需要量(MEr)=1.653 8BW0.75(g)+12.489ADG(g);母雏:3.360 5BW0.75(g)+ 7.736 4ADG(g)。对应MEr公雏为379.32 kJ·d-1;母雏为351.66 kJ·d-1,相应饲粮代谢能水平公雏为12.50 MJ·kg-1,母雏为12.47 MJ·kg-1。
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种严重危害全球养猪业的重要病原体,其非结构蛋白NSP4作为3C样丝氨酸蛋白酶(3CLSP),在其他保守的结构域间连接处切割病毒多蛋白,在病毒的转录复制过程中发挥着关键作用。本研究旨在解析NSP4蛋白、结构特征及酶活性,为靶向NSP4的抗病毒小分子药物研发提供理论依据。本研究以PRRSV NADC30 like毒株为研究对象,通过克隆PRRSV nsp4基因至pGEX-6p载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达并纯化获得高纯度蛋白。利用悬滴法筛选结晶条件,结合X射线晶体学技术解析了NSP4的1.47 Å高分辨率晶体结构,并通过荧光共振能量转移体外测定其酶活性。结果显示,PRRSV NSP4由三个结构域组成:N端β桶结构域(Ⅰ,残基12-69)、中间β桶结构域(Ⅱ,残基89-153)和C端α/β结构域(Ⅲ,残基159-190)。进一步通过活性位点预测,明确了NSP4的底物结合口袋由Ser-19、Met-20、His-39等关键残基构成,为基于结构的抑制剂设计提供了靶点。体外酶活试验表明,PRRSV NADC30 like毒株NSP4对底物的催化效率Kcat/Km为411.38 L·(mol·s)-1,且底物亲和力Km=23.28 μmol·L-1。本研究报道了PRRSV NADC30 like毒株NSP4的高分辨率结构及酶动力学特征,为基于结构的抗病毒药物设计与筛选奠定了重要基础。
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是对中国养猪业造成重大经济损失的病原之一。目前,PRRSV-2在国内占据主导地位,呈现出多谱系共存的复杂态势,增加了防控难度。本研究旨在评估宏转录组测序技术在PRRSV-2多谱系混合感染鉴别诊断中的应用潜力。通过对四川某猪场采集的1份PRRSV-2阳性血清样品进行宏转录组测序,获得病毒的全基因组序列,并进一步结合遗传进化分析(IQ-TREE)、相似性比对(Megalign)及重组分析(RDP4/SimPlot)深入解析病毒的进化重组特征。结果显示,本研究从单一血清样品中成功鉴定出SC01-2025(15 023 bp)、SC02-2025(14 954 bp)、SC03-2025(15 293 bp)共3株PRRSV-2,它们的进化分群分别属于谱系1.8、谱系3和谱系8.7。其中,SC01-2025为谱系1.8(代表株NADC30)与谱系5(代表株VR2332)的重组株,其全基因组与NADC30株相似性为88.09%,但在NSP3~7、NSP9~12及ORF3区域与VR2332株相似性更高;SC02-2025为三谱系重组株(谱系1.8/3/8.7),该株在NSP2和NSP3区域与NADC30株最相似,在NSP1、NSP7~10与JXA1株最相似,剩下的区域则与QYYZ株最相似;SC03-2025与JXA1-P80疫苗株全基因组相似性达99%,未检测到重组。本研究基于宏转录组测序技术精准识别出1例四川某猪场PRRSV多谱系混合感染,揭示了该猪场疫苗株(JXA1-P80)与野毒株(类NADC30株、类QYYZ株)共存的复杂流行情况,研究结果表明宏转录组测序技术可为PRRSV疫病诊断和监测提供高分辨率技术支撑。
猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)是一种引起仔猪急性腹泻、呕吐及脱水等临床症状的冠状病毒,对全球猪养殖业造成了严重的经济损失。越来越多的研究报道长链非编码RNA(lncRNA)在猪冠状病毒中发挥着重要的调控作用,然而,关于lncRNA663在PEDV感染中的调控作用和机制研究尚未有相关报道。基于前期高通量转录组数据分析,笔者发现lncRNA 663与紧密连接蛋白CLDN10具有共表达趋势,因此本研究以lncRNA 663和CLDN10为试验对象,探索其在PEDV感染中的调控作用。本研究qRT-PCR和Western blot结果显示,PEDV感染IPEC-J2细胞后上调了lncRNA 663和CLDN10的表达水平(P<0.05),DSS处理则显著降低了lncRNA 663和CLDN10的表达水平(P<0.05)。亚细胞定位预测发现lncRNA 663主要定位于细胞质,RPISeq预测发现lncRNA663和CLDN10高度互作(SVM:0.98,RF:0.8);功能试验结果显示,siRNAs敲低lncRNA 663后,CLDN10的mRNA和蛋白表达水平显著下降,PEDV复制水平亦同步降低(P<0.05)。进一步通过AlphaFold3和ChimeraX进行结构预测,发现CLDN10可能与PEDV S蛋白形成7个氢键结合位点,提示其可能参与病毒侵染过程。综上所述,本研究初步揭示lncRNA 663通过调控CLDN10表达促进PEDV复制的可能机制,为深入解析病毒与宿主非编码RNA互作关系及干预靶点提供参考。
旨在探究猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株细胞适应后的复制特性及致病性,本研究将分离自某规模化猪场的PEDV流行毒株在Vero细胞中连续传代至不同代次,分别评价该毒株在细胞上的生物学特性,并将第25代和第141代病毒接种至3日龄仔猪,以比较其致病性差异。结果表明:临床病料接种液盲传至第4代时,在Vero细胞上形成PEDV典型合胞体病变;传代至25代时,细胞病变形态与病毒滴度趋于稳定;传代至141代时,病毒滴度显著提高,并诱发更快速的细胞病变效应。间接免疫荧光试验(IFA)可特异性检出PEDV N蛋白表达,序列分析表明该毒株为G2b型。仔猪攻毒试验表明,与亲本低代次毒株(YJH/2017/F25)相比,YJH/2017/F141接种组未出现明显临床症状或组织病理损伤,且肛拭子病毒排放量显著减少,各项指标与DMEM对照组无显著差异,该毒株的致病性较低而具有较好安全性。以上结果说明该流行毒株在体外连续传代后获得了更好的细胞适应性且对新生仔猪的致病性降低,本研究为PEDV弱毒疫苗研发提供新的候选毒株,其全基因组序列和生物学特征也为后续重组病毒研究奠定了基础。
猫传染性腹膜炎病毒(feline infectious peritonitis virus,FIPV)的非结构蛋白(non structure protein,NSP)12是RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)核心组分,但其与辅助因子NSP7、NSP8之间的相互作用以及RdRp复合体的功能尚不清楚。本研究旨在分析NSP12的分子特征,探究其与NSP7、NSP8的相互作用,并验证RdRp复合体的酶活性。首先,采用生物信息学方法预测NSP12的理化性质及结构特征。为探究FIPV RdRp复合物中NSP7、NSP8和NSP12之间的相互作用,构建了pcDNA3.1-Flag-NSP7,pcDNA3.1-HA-NSP8和pcDNA3.1-Myc-NSP12质粒,转染至293T细胞后,利用免疫共沉淀(co-inmunoprecipitation,Co-IP)、蛋白质体外结合(Pull-down)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测蛋白互作及共定位。其次,利用PCR扩增FIPV的NSP7、NSP8和NSP12基因,并将其分别同源重组至pET-30α载体,构建原核表达重组质粒。进一步优化诱导表达条件,采用镍柱亲和层析纯化蛋白,并通过超滤管浓缩获得RdRp复合物。最后,建立FIPV RdRp体外RNA延伸体系,并基于凝胶方法检测RdRp复合物的酶活性。生物信息学分析表明,NSP12为稳定的亲水性蛋白,包含43.51%的α螺旋、45.02%的无规则卷曲以及90个潜在磷酸化位点。Co-IP、Pull-down和IFA试验证实,在293T细胞中NSP7、NSP8与NSP12之间存在相互作用并发生共定位。原核表达结果显示,NSP7和NSP8蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量为10和23 ku,NSP12则以可溶性蛋白形式表达,相对分子质量为105 ku。酶活性试验结果表明,RdRp复合物能够延伸RNA模板链,而单独的NSP12则无此活性。本研究通过原核表达纯化了FIPV RdRp复合物,并建立了体外酶活性检测体系。首次证实FIPV-DF2毒株的NSP12需与NSP7、NSP8形成复合体才能发挥RdRp功能,为进一步探究FIPV RdRp的生物学功能及开发靶向RdRp的抗病毒药物奠定基础。
本研究旨在可溶性原核表达伪狂犬病病毒(PRV)受体Nectin1蛋白的N端胞外结构域,并以此为靶标,筛选出高亲和力、高特异性的DNA适配体,为阻断伪狂犬病病毒吸附宿主细胞提供新的分子工具。将猪源Nectin1基因克隆至带有麦芽糖结合蛋白(MBP)促溶标签的原核表达载体pET28a中,构建重组质粒pET28a-MBP-Nectin1,将双酶切鉴定和测序正确的重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,使用Western blot和Pull-down试验验证重组蛋白。采用基于磁珠偶联的系统进化适配体筛选技术(SELEX)筛选特异性靶向rMBP-Nectin1的DNA适配体,并利用磁珠ELASA检测筛选所得适配体Apt-Nectin1-6的亲和力与特异性。以敲减Nectin1蛋白的细胞系(sh-Nectin1-1、sh-Nectin1-2)为对照,应用流式细胞术验证Apt-Nectin1-6对细胞表面Nectin1蛋白的结合能力,同时通过流式细胞术和基因组拷贝数试验评估其对PRV吸附细胞的抑制作用。Western blot和Pull-down结果表明重组MBP-Nectin1蛋白正确表达且具有生物学活性。通过SELEX技术筛选获得的适配体Apt-Nectin1-6对rMBP-Nectin1具有高亲和力,平衡解离常数(Kd)为(0.11±0.02) nmol,且不与rMBP-gD、rMBP-S1、rMBP-CD163及rMBP蛋白发生交叉反应。分子对接结果显示,Apt-Nectin1-6通过氢键与Nectin1结合。进一步流式细胞术、基因组拷贝数检测和病毒滴度测定结果显示,Apt-Nectin1-6可剂量依赖性地抑制PRV对细胞的吸附(P<0.05)。本研究成功筛选得到可高特异性、高亲和力结合Nectin1蛋白的DNA适配体Apt-Nectin1-6,并证实其可有效阻断PRV对细胞的吸附,为开发新的抗PRV策略奠定基础。
本研究旨在分析鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)弱毒株FJ19株的部分关键抗原基因及毒力基因的遗传演化特点,评估FJ19株对SPF鸡的安全性和免疫原性,为ILTV FJ19株弱毒活疫苗的开发提供参考依据。通过将FJ19株进行多次尿囊腔途径接种适应后,对其关键抗原和毒力基因进行测序分析,点眼或口服接种14日龄SPF鸡观察其安全性,并且通过点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21 d后用ILTV强毒株攻毒评价保护效果,测定免疫持续期等验证FJ19株作为弱毒活疫苗的潜力。结果显示:将FJ19株在10日龄SPF鸡胚以尿囊腔途径接种连续传代适应后,收获P0、P1、P2、P3代病毒液的EID50分别为105.0、106.5、106.9、106.5·mL-1。核酸序列分析结果表明:FJ19株主要免疫原性基因gB-gC-gD-UL32和毒力相关基因gE-gI-TK-ICP4-gG-gH-gK-gL-gM-gN与弱毒株K317、Nobilis Laringovac®、LT Blen、Poulvac ILT®、Laryngo Vac和我国2009年分离株LJS09株、2012年分离株ck/CH/LHLJ/120305株、2019年分离强毒株WF03的亲缘关系较近。安全性试验显示,FJ19株以104.0 EID50·羽-1的剂量(10羽份)点眼接种14日龄SPF鸡后有40%出现轻度眼炎症状,而口服接种SPF鸡未表现出明显的临床症状;当以104.0 EID50·羽-1的剂量气管途径接种21日龄SPF鸡时有30%鸡出现一过性的呼吸道反应,未发生严重的ILTV感染典型症状。免疫后强毒攻毒结果显示,FJ19株以0.2羽份或1羽份的剂量点眼或口服途径免疫14日龄SPF鸡21 d后,采用ILTV强毒株以104.0 EID50·只-1的剂量气管攻毒后,所有免疫组的鸡均获得了至少90%的保护,未观察到明显的临床症状,而未免疫攻毒组至少有90%的鸡出现了严重的ILTV感染典型症状,FJ19株免疫后的免疫持续期至少可达6个月。ILTV FJ19株采用尿囊腔途径接种可获得高滴度病毒含量,其主要抗原基因和毒力基因与我国早期分离株和疫苗株相比未发生明显变异,通过动物试验证实点眼或口服该弱毒株对14日龄SPF鸡具有良好的安全性和免疫有效性,且免疫持续期可达6个月,通过口服接种不影响其安全性和免疫有效性。因此,ILTV弱毒株FJ19株不仅适应尿囊腔接种途径收获病毒,且具备良好的安全性和免疫有效性,还可适应口服接种途径进行免疫,是一株理想的具有潜力的弱毒疫苗候选毒株。
传染性法氏囊病严重制约家禽养殖业经济发展。因此,研发安全且高效的传染性法氏囊病疫苗成为当下备受瞩目的关键课题。为探索柔嫩艾美耳球虫作为活载体表达及递送传染性法氏囊病毒抗原的可行性,本研究构建表达该病毒VP2蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫株(Et-VP2)。构建表达质粒,酶切后核转染入柔嫩艾美耳球虫中,利用流式细胞分选技术筛选得到表达红色荧光报告基因(mCherry)的阳性虫株,在基因和蛋白水平上鉴定VP2基因的表达。结果显示,构建表达VP2蛋白的转基因柔嫩艾美耳球虫经雏鸡体内3次传代阳性球虫荧光率已高于95%,在球虫基因和蛋白水平上证实了外源基因的成功插入和稳定表达(后代群体荧光率均达95%),间接免疫荧光结果显示融合蛋白(Mic2-linker-VP2)定位于柔嫩艾美耳球虫子孢子顶端。本研究成功建立柔嫩艾美耳球虫稳定转染体系,为后续转基因虫株的传染性法氏囊病免疫保护研究奠定基础。
兔球虫病是一种呈世界性分布的寄生性原虫病,给养兔业造成了巨大的经济损失。传统的化学药物防控方法导致了普遍存在的耐药性及药物残留等问题;枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)作为常用的益生菌之一,被广泛用于外源蛋白的表达,这种基于益生菌的口服疫苗接种策略发生副作用的风险较小,还可以减少抗球虫药物的使用,因此具有良好的发展前景。本研究以CotB为锚定蛋白构建整合质粒,通过同源重组实现EiAMA1、EiIMP1、EmGAM56和EmROP17抗原在枯草杆菌芽胞表面的展示。并使用重组芽胞EiIMP1和重组芽胞EiAMA1单独或混合拌料免疫家兔,对其抗肠艾美耳球虫感染的免疫保护效果进行评估;使用重组芽胞EmGAM56和重组芽胞EmROP17单独或混合拌料免疫家兔,对其抗大型艾美耳球虫感染的免疫保护效果进行评估。结果显示:重组芽胞rEiAMA1单独拌料免疫家兔后,卵囊排出量和病变计分都显著降低(P<0.05),卵囊减少率达到59.91%。重组芽胞EmGAM56单独拌料免疫组效果相较重组芽胞EmROP17单独和EmGAM56+EmROP17混合拌料免疫组更好,卵囊排量显著降低(P<0.05),卵囊减少率达到68.54%。此外,重组芽胞免疫后实验兔血清特异性IgG和肠道特异性IgA都出现显著上升(P<0.05)。综上,构建的四种重组芽胞都可以刺激机体产生特异性的全身和局部体液免疫反应,重组芽胞rEiAMA1和重组芽胞EmGAM56分别表现出较好的抗肠艾美耳球虫和抗大型艾美耳球虫感染的免疫保护效果,因此,枯草芽胞杆菌具有作为兔球虫病疫苗活载体的潜力。
本文旨在评估旋毛虫核激素受体-23(NHR-23)的生物学特性及其疫苗开发潜力。通过克隆表达得到纯化的重组TsNHR-23蛋白(rTsNHR-23),Western blot分析其反应原性,qPCR分析TsNHR-23基因在旋毛虫不同发育阶段的转录水平。体外试验利用抗rTsNHR-23多克隆抗体分析对肌肉幼虫蜕皮的抑制,并探究该蛋白对小鼠巨噬细胞炎性细胞因子分泌的影响。将PLGA纳米颗粒包被的rTsNHR-23蛋白免疫ICR小鼠,通过检测小鼠血清中IgG抗体水平的变化、细胞因子IGF-1、IL-6和TGF-β的变化并计算减虫率,评估rTsNHR-23蛋白的免疫保护效果。结果表明,TsNHR-23基因在旋毛虫的不同发育阶段均存在转录,且在肌肉幼虫阶段的转录水平最高。抗rTsNHR-23的多克隆抗体能够显著降低肌肉幼虫的蜕皮率,也可有效抑制蜕皮进程的发展。rTsNHR-23蛋白能够显著提高小鼠巨噬细胞IL-1β、IL-6、IL-10的转录水平。免疫保护试验显示rTs-NHR-23蛋白免疫小鼠后,与对照组相比,小鼠血清中IgG抗体水平极显著升高,首次免疫后IGF-1显著下降,IL-6及TGF-β升高;二次免疫后,IGF-1部分回升,TGF-β则显著下调。攻虫后,与对照组相比,小鼠体内旋毛虫成虫数量、平均每条雌虫产生的新生幼虫数量以及肌肉幼虫数量均显著下降。综上所述,旋毛虫重组NHR-23蛋白对肌肉幼虫的蜕皮具有显著抑制作用,将该蛋白免疫小鼠后,荷虫量显著下降,具有作为疫苗候选抗原的潜力。
旨在确定引起宁夏某规模化肉兔养殖场家兔死亡可疑病原并进行致病性分析。通过病死兔剖检、细菌分离培养、16S rRNA测序分析、PCR鉴定、药敏试验、小鼠和家兔攻毒试验,确定引起家兔死亡的病原菌及其致病性。结果显示,细菌分离培养出3株革兰阴性菌,经16S rRNA测序分析和PCR鉴定为荚膜A型多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌和大肠杆菌,分别命名为QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03。通过K-B法药敏试验发现QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03共同对青霉素、卡那霉素、头孢唑林等临床常用药物耐药,对头孢曲松敏感。耐药基因检测结果,3株分离菌均检出耐药基因aadB、strA、strB、blaTEM和sul1。毒力基因检测结果,巴氏杆菌携带exbB、exbD和hgbA等16种毒力基因,奇异变形杆菌携带ureC、zapA、atfC、atfA和pmfA毒力基因,大肠杆菌携带eaeA和fimC毒力基因。小鼠致病性试验显示,QF24-Pm01、QF24-Ps02和QF24-Ec03的LD50分别为9.27×105 CFU、1.43×106 CFU和1.88×107 CFU。小鼠混合感染致病性试验结果,QF24-Pm01组、QF24-Ps02组和QF24-Ec03组小鼠分别于攻毒后9、18和16 h发生死亡,QF24-Pm01+QF24-Ec03混合感染组及QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组小鼠分别于攻毒后6和13 h出现死亡。病理组织学观察显示,单纯感染与混合感染均可导致肺、肝、肠等组织出现显著损伤。主要病理变化表现为:肺组织出现间质水肿、毛细血管充血及中性粒细胞浸润;肝组织呈现肝细胞脂肪变性及肝细胞索排列紊乱;小肠组织则表现为上皮细胞脱落及肠绒毛断裂等病变。家兔致病性试验结果显示,QF24-Pm01+QF24-Ec03混合感染组和QF24-Pm01组家兔分别于攻毒后24和36 h全部死亡,QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组、QF24-Ec03和QF24-Ps02组家兔攻毒后7 d死亡率分别为60%、20%和40%。试验兔剖检结果显示,QF24-Pm01+QF24-Ps02+QF24-Ec03混合感染组家兔的肺出现充血、水肿,呈现花玻璃样改变,脾萎缩并呈深褐色,该病理变化与临床解剖所观察到的家兔病变一致。综上表明,多杀性巴氏杆菌与大肠杆菌混合后致病性增强,大肠杆菌与奇异变形杆菌混合后亦如此。多杀性巴氏杆菌、奇异变形杆菌与大肠杆菌的混合感染可能是该场肉兔高死亡率的主要原因。因此在预防多杀性巴氏杆菌感染同时,还应加强对大肠杆菌和奇异变形杆菌的防控,以降低混合感染风险和死亡率。
旨在评估山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp. capripneumoniae,Mccp)膜表面蛋白P4的免疫原性和作为疫苗候选抗原的潜力。前期实验室筛选出Mccp的膜表面蛋白P4,本研究利用原核表达系统制备重组蛋白,纯化后与佐剂混合乳化制备疫苗,在山羊上进行免疫攻毒实验,通过临床症状、病理变化、血清抗体、肺脏载菌量、细胞因子等评价免疫效果。结果表明:成功表达纯化rP4蛋白,能够与His标签抗体、rP4多克隆抗体和Mccp感染抗体发生特异性反应;免疫动物能够刺激山羊产生高水平的抗体,但没有减轻临床症状,山羊存活率只有40%,与PBS对照组相同;病理学观察显示无论是急性还是慢性病例,P4组都要比PBS对照组更严重;肺脏载菌量高于全菌灭活组和PBS对照组;血清细胞因子结果显示P4组免疫后上调IL-2,下调IL-4水平。本研究成功表达纯化了rP4,制备疫苗免疫山羊能够诱导高水平抗体,但并不能保护山羊免受Mccp的攻毒,甚至会加重病变。研究结果为山羊传染性胸膜肺炎新型疫苗的设计研制提供了参考。
本研究旨在筛选与鉴定抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株,为养鸡业提供抗生素替代品。采用MRS培养基从鸡空肠内容物中分离乳酸杆菌,通过体外抑菌能力、耐酸能力、产酶能力和黏附性能指标筛选候选菌株,并选择1日龄AA肉鸡进行菌株移植28 d,观察其对鸡生长发育的影响,并在42 d进行沙门菌感染试验验证其抑制沙门菌能力,最终鉴定抗鸡沙门菌的乳酸杆菌菌株。结果显示:共分离鉴定27株乳酸杆菌(包括13株唾液联合乳杆菌、11株罗伊氏黏液乳杆菌、2株约氏乳杆菌和1株格氏乳杆菌),其中唾液联合乳杆菌S31菌株可显著抑制鼠伤寒沙门菌和鸡伤寒沙门菌,在pH 3.0时存活率大于50%,可产蛋白酶、脂肪酶,提示S31菌株不仅具有较强抑制沙门菌能力,还具有胃肠道适应性及潜在的益生功能。动物试验结果显示,唾液联合乳杆菌S31菌株移植28 d可显著增加受体鸡体重(P<0.000 1)、腿肌重(P<0.001)、胸肌重(P<0.01)、空肠长度(P<0.01)、肠绒毛长度(P<0.05)、杯状细胞数量(P<0.05)、空肠乳酸杆菌丰度(P<0.05),提示S31菌株可促进鸡生长发育。在42 d进行沙门菌感染,唾液联合乳杆菌S31菌株移植组脾脏载菌量(P<0.05)、回肠TLR-4、MyD88和AP-1信号通路转录水平(P<0.01)和促炎因子IL-1β、IL-6和IL-12转录水平(P<0.05)均显著低于对照组,空肠和回肠结构完整。综上,唾液联合乳杆菌S31菌株不仅具备较强的抑制沙门菌能力,还有良好的胃肠道适应性及优良的促生长功能,具有潜在应用价值。
本研究旨在制备纳米银并评价其对犬皮肤伤口感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的治疗效果。利用灵芝提取物(40%多糖含量)为还原剂,聚乙烯吡咯烷酮为稳定剂,通过生物合成法制备纳米银,之后通过紫外-可见吸收光谱、透射电子显微镜与动态光散射技术对纳米银进行表征。随后,通过测定最小抑菌浓度以评价纳米银的体外抗菌活性。最后,选用体重10 kg左右的比格犬12只,随机分为3组,每组4只,分别为生理盐水对照组、恩诺沙星阳性对照组和纳米银组。在建立伤口感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的模型后,连续治疗12 d后对伤口愈合情况、载菌量、组织病理学形态、胶原纤维与血管生成、巨噬细胞极化水平进行检测分析。结果表明,制备的纳米银在433 nm处有最大吸收波长,颗粒呈球形,分布均匀,粒子尺寸为(20.01±6.99) nm,zeta电位为(-2.56±0.32) mV。纳米银对含耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在内的常见皮肤感染致病菌均具有良好的抗菌活性,最小抑菌浓度为16~32 μg·mL-1。体内试验结果显示,纳米银能够有效降低伤口组织的载菌量,促进胶原沉积与血管生成,改善伤口免疫微环境,进而促进感染伤口的愈合。综上所述,制备的纳米银能有效治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌引起的犬皮肤伤口感染,为其转化并应用于宠物皮肤感染的临床治疗奠定了物质与实践基础。
旨在探讨阿司匹林丁香酚酯(aspirin eugenol ester,AEE)对脂肪肝出血综合征(fatty liver hemorrhagic syndrome,FLHS)蛋鸡卵巢氧化应激和炎症反应的预防作用。选取65羽健康的160日龄海兰褐蛋鸡,随机分为5组,每组13羽。空白对照组(Control)饲喂基础日粮;模型组(high-energy low-protein diet,HELP)和低、中、高剂量AEE给药组(AEE-L、AEE-M、AEE-H)均饲喂高能低蛋白日粮,并根据蛋鸡体重,分别在高能低蛋白日粮中添加0、25、50、100 mg∙kg-1阿司匹林丁香酚酯。结果显示,相较于Control组,HELP组蛋鸡卵巢有明显的大小不等的脂肪空泡;相较于HELP组,AEE组卵巢组织脂肪空泡数量显著减少。相较于Control组,HELP组蛋鸡卵巢中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性显著降低,丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平显著升高(P<0.05);相较于HELP组,不同剂量AEE组SOD、CAT、GSH活性显著增加,MDA水平显著减少(P<0.05),SOD和CAT mRNA转录显著升高(P<0.05)。相较于Control组,HELP组蛋鸡卵巢中抗氧化相关基因和蛋白,如核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、醌氧化还原酶1(NADPH:Quinone Oxidoreductase1,NQO1)、血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)表达显著降低,kelch样ECH关联蛋白1(kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)表达显著升高(P<0.05);相较于HELP组,不同剂量AEE组Nrf2、NQO1、HO-1基因和蛋白表达显著升高,Keap1表达显著降低(P<0.05)。相较于Control组,HELP组蛋鸡卵巢中炎性因子白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA转录显著升高,炎症相关基因和蛋白(toll-like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、磷酸化p65(phosphorylated p65,p-p65)表达显著增加(P<0.05);相较于HELP组,不同剂量AEE组IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB基因转录显著减少,p-p65蛋白表达显著降低(P<0.05)。综上,蛋鸡脂肪肝出血综合征可导致卵巢发生氧化应激和炎症反应;高能低蛋白日粮中添加不同剂量AEE对脂肪肝出血综合征蛋鸡卵巢损伤均有一定的预防效果。
环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)是临床中常用的犬肿瘤治疗药物,存在较强的免疫抑制作用,会造成犬免疫功能降低,同时改变犬肠道菌群稳态进而继发其他疾病。鼠乳杆菌(Lactobacillus murinus,L. murinus)目前已被明确报道具有调节免疫细胞活性和保护胃肠道系统的功能,展现出作为临床功能性食品添加剂的潜力。从健康犬新鲜粪便中筛选出一株益生特性最佳的鼠乳杆菌ZNL-13进行后续试验。本研究旨在探究犬源鼠乳杆菌ZNL-13对CTX诱导的犬免疫功能低下的干预效果以及肠道菌群的影响。使用犬血清学和粪便16S rRNA测序进行分析。结果显示,与CTX组相比,预防性饲喂鼠乳杆菌ZNL-13可以显著改善犬白细胞、淋巴细胞降低等趋势(P<0.05),缓解肝肾损伤和氧化应激水平(P<0.05),降低血清中DAO、D-LA水平增强肠道功能(P<0.01),改善血清中IgG以及免疫细胞因子显著降低的趋势(P<0.05)。同时增加了Blautia_A、Holdemanella和Peptacetobacter等有益菌的含量,恢复肠道菌群稳态。综上所述,鼠乳杆菌 ZNL-13可以有效升高CTX造成的免疫细胞数减少,降低机体氧化应激水平,保护肠道屏障功能,调节肠道菌群结构,从而缓解CTX造成的犬免疫功能低下,为其作为一种新型功能性食品的发展提供了研发思路。
本研究旨在挖掘治疗奶牛乳房炎处方的用药规律分析核心用药。本研究采用 Excel、GraphPad Prism 软件分析治疗奶牛乳房炎处方方剂基本信息,用IBM Spss Statistics 26.0、IBM Spss Modeler、Cytoscape软件对方剂配伍中药性味归经,关联规则进行数据挖掘,筛选出核心药物,并对核心药物蒲公英的临床药效进行了验证。结果表明,共纳入分析239首方剂、涉及185味中药,药物总频次为2 317,核心药物蒲公英、当归、甘草、金银花、连翘频率≥100次,性味以寒性温性、苦、甘、辛味为主,大多归肝、胃、肺经,以蒲公英-紫花地丁、金银花药对组合置信度最高,聚类分析分为7类,蒲公英居于用药最核心位置。临床疗效试验表明,核心药物蒲公英,显著降低隐性乳房炎患牛乳汁体细胞数,对奶牛隐性乳房炎具有良好的治疗效果。本研究挖掘出治疗奶牛乳房炎核心药物蒲公英,并验证了蒲公英鲜品对奶牛隐性乳房炎的治疗作用,为防治奶牛乳房炎的中兽药开发提供数据支持。
旨在研究药食同源中草药菊苣的醇提物(CIL)对高脂饮食(HFD)诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝脏脂质代谢的影响,分析CIL改善脂质代谢紊乱的作用机制。HFD诱导建立C57BL/6J小鼠的NAFLD模型,评估CIL(800 mg·kg-1和2 g·kg-1)和辛伐他汀(SVT,20 mg·kg-1)对NAFLD小鼠的治疗效果。检测肝脏天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)酶活性;过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量及肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)含量。利用UPLC-MS/MS脂质组学技术检测肝脏脂质代谢物的组成;qRT-PCR检测脂质合成相关基因(PPARγ、ACCα、Srebp1c和CD36)和脂质氧化相关基因(PPARα和CPT1α)mRNA基因的表达水平。体内试验结果表明,高剂量菊苣醇提物组(HCIL)可极显著抑制HFD诱导的AST和ALT酶活性异常升高(P<0.01),且和SVT组酶活性相比无显著差异(P>0.05)。CIL处理极显著降低血液和肝脏三酰甘油(TG)含量(P<0.01),和SVT组TG含量无显著差异(P>0.05)。HCIL处理明显减轻肝脏脂肪变性和脂肪细胞的体积;重塑肝脏脂质组成,降低肝脏TG和DG水平,提升PG、PE、LNAPE、LPE和HexCer水平。HCIL组和SVT组均极显著降低肝脏PPARγ、ACCα、Srebp1c和CD36mRNA基因表达水平(P<0.01),靶向抑制CD36蛋白对脂质的摄取,分子对接具有较高的结合能。因此,CIL通过靶向抑制CD36对脂质的摄取,调节脂质代谢紊乱,改善肝脏脂质组成,CIL治疗NAFLD的药理效果与SVT药物处理无明显差异,这将促进菊苣产品在畜禽养殖领域的开发和应用。
旨在系统评估复方中草药对鸡生长性能及肠道菌群的影响,本研究基于PRISMA指南,对CNKI、维普、万方、PubMed、Web of Science数据库建库至2025年9月发表的21篇文献进行Meta分析。通过RevMan 5.4软件,采用随机效应模型计算加权平均数及95%置信区间,并评估异质性与发表偏倚。结果表明:与空白组相比,复方中草药能显著提高鸡ADFI(MD=2.42 g·d-1,95%CI为[1.99,2.85])(P<0.01)、ADG(MD=3.23 g·d-1,95%CI为[2.48,3.98])(P<0.01)、及空肠VH/CD(MD=0.87,95%CI为[0.40,1.35])(P<0.01),显著降低F/G(MD=-0.19,95%CI为[-0.27,-0.11])(P<0.01)和大肠杆菌数量(MD=-1.48,95%CI为[-1.87,-1.09])(P<0.01),但在提高Shannon指数、Chao1指数、Simpson指数及乳酸菌数量方面,中草药组与空白组无显著差别(P>0.05);与抗生素组相比,在ADFI、ADG及F/G方面,两者无显著差别(P>0.05)。本研究通过Meta分析系统评估了复方中草药对鸡生产性能及肠道健康的影响,结果表明,复方中草药对肉蛋兼用型鸡ADFI、肉鸡及肉蛋兼用型鸡ADG的促进作用尤为显著,且在育雏期和育成期效果突出;同时可显著降低肉鸡F/G,但对蛋鸡相关指标无显著影响。复方中草药能选择性抑制大肠杆菌增殖,显著提高空肠绒毛高度/隐窝深度比值(VH/CD),但对菌群多样性指数及乳酸菌数量无显著影响。本研究结果为复方中草药在鸡生产中的应用提供了系统性参考,对中草药在鸡养殖中的应用及深入研究具有重要意义。
2023—2024年,江苏省某肉鸭养殖场的10~20日龄肉鸭疑似感染鸭瘟病毒(duck plaque virus,DPV)。本研究旨在分离鉴定该病毒并分析基因组特征。本研究对病料进行病毒分离、动物回归和基因组测序分析。结果显示:在内脏组织中检测到鸭瘟病毒,并成功分离一株鸭瘟毒株,命名为QL2312。与强毒株CV株具有同等致病力。通过基因组序列分析发现,QL2312株的UL56/LORF5基因与强毒株CV株相同,而UL2基因与疫苗株C-KCE株相同。本研究成功分离到一株鸭瘟变异株,为相关疾病的进一步研究提供基础。
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