随着智慧畜牧业与精准养殖理念的深入，羊只生产行为的自动化识别与连续监测已成为提升养殖效率、保障动物健康与福利的关键环节。传统依赖人工观察或接触式传感器的监测方式存在效率低、侵入性强、难以规模化部署等问题。近年来，以机器学习和深度学习为代表的人工智能技术，为实现站立、卧躺、采食、饮水、反刍及分娩等关键行为的无创、实时识别提供了新的技术路径。本文系统阐述了羊只行为监测的研究背景与技术需求，归纳了基于视频图像、RGB-D、点云及可穿戴传感器等多元数据采集手段，梳理了从传统机器学习到深度学习方法在行为识别中的研究进展，并对典型应用案例进行了对比分析。在此基础上，进一步指出当前面临的数据稀缺、环境干扰、模型泛化能力不足及系统实时性等挑战，展望了多模态信息融合、轻量化模型设计、边缘智能部署、自监督学习等未来发展方向。本综述旨在为该领域的研究提供系统参考，推动智慧养羊技术向可落地、可扩展、可持续方向演进。

腹脂是家禽体内重要的脂肪组织之一，参与能量储存和代谢调控，直接影响家禽饲料利用效率、屠体组成以及禽肉的经济价值。腹脂沉积属于复杂的数量性状，受多基因及多信号通路的协同调控。随着一系列分子生物学、基因组学和表观遗传学等研究的开展，人们对脂质合成、转运与分解等关键环节的调控因子有了更清晰的认识。多组学技术在探究家禽脂肪沉积机制领域的深入应用，为解析腹脂形成的分子机制提供了新思路。本文在总结家禽腹脂沉积生理学特征及其主要影响因素的基础上，重点梳理关键功能基因和信号通路相关研究进展，回顾从传统生化指标筛选到分子标记与基因组选择等遗传改良策略的发展历程。同时，探讨了多组学整合分析、基因编辑和智能表型表征等前沿技术在脂肪沉积研究与家禽精准育种中的潜在应用，以期为后续相关研究与产业应用提供参考。

传统冷冻保护剂（如DMSO、甘油）虽在生物样本保存中广泛应用，但其细胞毒性、渗透压冲击及潜在遗传风险等问题限制了临床与生物技术的安全应用。本文系统揭示了氨基酸作为新型冷冻保护剂的仿生学优势：其双重作用机制（物理化学防护与生物化学调控）不仅能通过抑制冰晶生长、稳定细胞膜结构抵御低温物理损伤，还可通过抗氧化、供能及信号通路调节等途径提升配子复苏后的功能完整性。研究显示，脯氨酸、谷氨酰胺等氨基酸在精卵冷冻中展现出显著的物种特异性保护效果——既可单独优化（如精氨酸改善精子活力、谷氨酰胺增强卵母细胞能量代谢），亦能与传统保护剂协同构建减毒增效体系（如降低DMSO毒性并维持纺锤体稳定性）。未来研究需聚焦复合配方精准设计、冷冻参数优化及长期安全性验证，以推动氨基酸从实验室突破走向临床转化，为辅助生殖、种质资源保存及再生医学提供更安全、高效的低温保存解决方案。

胎盘发育异常是克隆动物低出生率及高发育缺陷率的重要病理基础。合胞素基因家族编码胎盘特异表达的关键逆转录病毒源融合蛋白，参与胎盘形成与功能行使。合胞素表达异常不仅会直接破坏胎盘的正常结构与功能，导致体细胞克隆动物胎盘异常，还与多种疾病相关。本文详细介绍了克隆动物胎盘中存在的典型病理表型及合胞素对胎盘发育的影响，并提出未来需针对合胞素通路分子靶点进行干预，以改善克隆效率的研究方向，为深入理解并解决克隆动物的发育难题提供参考。

瘤胃作为反刍动物独特的消化器官，在营养物质的消化吸收、瘤胃微生物群落的维持以及生产性能提升等方面发挥着不可替代的作用。其屏障功能不仅是保障这些生理过程顺利进行的关键，更是维护瘤胃健康和功能稳定的核心机制。本综述聚焦于瘤胃屏障功能的四个关键层面——物理屏障、生物屏障、化学屏障和免疫屏障，系统总结其在防御病原体入侵、维持瘤胃内环境稳定以及促进营养物质高效利用中的重要作用。通过深入探讨四重屏障的相互作用及其协同机制，旨在为反刍动物瘤胃屏障功能的研究提供理论参考，为进一步优化反刍动物健康管理和生产性能提供科学依据。

双峰驼是我国北部荒漠草原的重要家畜，是维护荒漠草原生态平衡并支持牧民抵制地区突发极端灾害的核心畜种。由于长期适应特殊环境，其免疫细胞及免疫应答机制与人类及其他家畜存在显著差异，文章通过文献资料分析，总结了骆驼核心免疫细胞的结构，细胞免疫特征，固有免疫和适应性免疫的特点，并对其特殊的细胞免疫机制及影响因素进行了分析和讨论，为深入探讨骆驼免疫机制提供理论依据和支持。

内源性逆转录病毒（endogenous retroviruses，ERVs）如何被宿主驯化为防御元件，是进化生物学的核心问题之一。本综述以鸡为模型，揭示其内源性逆转录病毒通过双重机制构建抗病毒防线：包膜蛋白介导的“受体干扰”阻断外源病毒入侵；非编码RNA触发的“病毒模拟”效应激活天然免疫。这两种机制协同作用，赋予宿主对病毒感染及相关肿瘤的强大抗性。这种内源免疫机制与人类癌症免疫治疗中利用ERVs的策略高度一致。本文确立了鸡作为一个独特模型系统，为理解宿主如何将基因组入侵者转化为防御武器提供了新的进化视角。

5'-核苷酸酶是一种催化5'-核苷酸水解为核苷和磷酸的酶，广泛存在于哺乳动物及多种细菌和寄生虫中。5'-核苷酸酶参与细菌和寄生虫的核苷酸代谢过程，为自身细胞供能，并帮助细菌和寄生虫逃避宿主杀伤或破坏宿主的防御机制，在细菌和寄生虫的致病过程及其与宿主相互作用中起关键作用。本文以利什曼原虫、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌等病原的5'-核苷酸酶为重点，综述了细菌和寄生虫5'-核苷酸酶生物学功能的研究现状，以期为探究5'-核苷酸酶在细菌和寄生虫感染与宿主免疫中的作用提供参考。

牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）不仅能在牛群中引发肠道与呼吸道疾病，还可跨越物种屏障，感染多种反刍动物与啮齿类动物，并表现出潜在的人兽共患潜力。为系统剖析BCoV复杂的跨物种传播现象，从物种分类角度分析了BCoV对不同宿主的感染情况，揭示其广泛的宿主细胞适应性特征，并深入解析BCoV跨物种传播的分子基础，阐明BCoV刺突（spike，S）蛋白和血凝素-酯酶（hemagglutinin-esterase，HE）蛋白在组织嗜性和拓展宿主范围中的主要进化变异规律。未来应将S和HE蛋白等的突变与BCoV宿主范围或组织嗜性改变联系起来，警惕BCoV与其他冠状病毒的重组，并对变异毒株的跨物种传播能力进行监测预警。旨在为理解BCoV跨物种传播提供理论框架，并为其监测与防控策略提供思路。

猪伪狂犬病（porcine pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的、可造成仔猪的高死亡率和母猪的繁殖障碍传染病，常给养猪业造成重大的经济损失。疫苗接种伪狂犬疫苗是预防PR最有效的手段之一。本综述旨在总结PR传统疫苗以及基因工程疫苗如基因缺失疫苗、重组载体疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗等新型疫苗的研究进展，并对未来研究方向进行展望。

肠神经胶质细胞（EGCs）作为肠道神经系统的核心组分，发挥对神经元在营养和支持作用，同时通过与神经元、免疫细胞和肠上皮的相互作用，参与调控胃肠道运动、维护肠上皮屏障、免疫稳态及组织修复等功能，在动物肠道炎症损伤修复中发挥关键作用。EGCs具有高度可塑性，在肠道炎症反应调节中呈现双重性。在炎症初期，活化的EGCs通过分泌钙结合蛋白S100β、一氧化氮（NO）、白细胞介素（IL）-1β等促炎介质放大炎症反应，诱导上皮屏障损伤；在消退期，EGCs通过胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、转化生长因子（TGF）-β等因子促进巨噬细胞向M2型转化，并经由Wnt信号通路支持肠道干细胞增殖与分化，加速黏膜修复。通过调控EGCs活性、免疫细胞互作及相关信号通路可缓解肠道炎症，促进损伤修复。本文系统综述了EGCs的定位和分类、在胃肠道中的生理功能及其在肠道炎症反应中的双向调控机制，以期为靶向EGCs的肠道疾病治疗策略提供理论依据。

旨在基于低深度重测序（low-depth resequencing）鉴定猪重要性状的关键基因突变。本研究利用低深度重测序技术开展全基因组关联分析（genome-wide association study，GWAS），基于288头体重相近的健康公母大白猪的高深度测序数据（20×）构建填充参考面板，利用QUILT软件，对1 880头不同年龄的健康公母大白猪的低深度测序数据（0.78×）进行基因型填充，通过GWAS对猪平均日增重（average daily gain，ADG）、背膘厚（backfat thickness，BFT）、乳头数（teat number，TNN）3个重要经济性状的功能基因及关键突变位点进行鉴定。结果显示，在ADG性状中检测到10个基因组水平显著SNPs位点，主要分布于1号、5号和9号染色体，最显著位点为1_160105200，优势等位基因为T；在BFT性状中检测到13个显著位点，其中最显著的3个位点位于2号、6号和13号染色体，最显著位点2_39813166，优势等位基因为G；在TNN性状中检测到27个显著位点，主要集中在6号和7号染色体，最显著位点10_49190437，优势等位基因为A。结合功能基因组注释分析进一步鉴定出HMCN1、HMCN2为影响ADG性状的候选基因；VRTN为影响BFT性状的候选基因；BTBD9为影响TNN性状的候选基因。本研究结果为解析猪重要生长性状的分子遗传机制及开展后续遗传改良提供新的理论依据。

旨在探究合作猪在响应寒冷环境时脾脏组织形态以及相关基因表达的变化情况。本研究选取36头75日龄的甘肃迭部自由放牧的健康合作猪，随机均分为冷刺激组（-15 ℃±2 ℃）和常温对照组，每组18头，于冷刺激12 h、1 d、2 d、5 d、10 d和15 d分别屠宰冷刺激组和常温组各3头，比较其在不同时间冷刺激下脾脏组织形态和炎性因子的表达水平，并对冷刺激1 d、5 d、15 d三个时间点的脾脏组织进行转录组测序。冷刺激对合作猪脾脏组织形态无不良影响，但影响脾脏组织中炎性因子相关基因的表达，其中冷刺激1 d的差异最为显著。与常温组相比，不同时间冷刺激的合作猪脾脏组织基因表达类型和水平存在差异，其中冷刺激1 d、5 d、15 d共鉴定到156个共表达基因，主要富集于自然杀伤细胞介导的细胞毒素、IL-17信号通路、细胞黏附分子、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用、甲状腺激素合成等免疫与代谢信号通路；构建了由54个免疫相关差异表达基因组成的互作网络，包括IFNG、PRTN3、ELANE等核心基因，可能是合作猪脾脏组织响应寒冷刺激的关键候选基因。冷刺激对合作猪脾脏组织的形态结构未产生明显影响，但会显著影响脾脏中炎性因子水平和基因的转录表达，且随着冷刺激时间延长，机体的免疫炎性反应越明显。本研究结果可为合作猪抗寒机制的研究提供参考。

旨在探究4周龄、7周龄和7月龄3个生长发育阶段约克夏猪血清代谢谱的动态变化规律，从代谢组学角度解析猪生长发育的代谢调控机制。本试验选取24头发育状况良好且3周龄断奶的约克夏仔猪，分别于断奶后1周（4周龄，A组）、断奶后3周（7周龄，B组）及育肥结束期（7月龄，C组），通过前腔静脉采集血液样本。采用LC-MS/MS非靶向代谢组学技术对血清代谢物进行检测，结合正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）、t检验及差异倍数筛选差异代谢物（differential metabolites，DMs），并通过KEGG富集分析揭示不同生长阶段代谢通路的差异。结果显示，机体从断奶应激期过渡到快速沉积期、再进入生理稳态期的过程中，血清代谢物发生重大变化。其中A组与B组（A vs B）、A组与C组（A vs C）和B组与C组（B vs C）分别检测到159种、911种和959种DMs。A vs C与B vs C共有778种DMs，这些DM显著富集于组氨酸等氨基酸代谢与合成、脂质代谢、辅酶及叶酸相关、糖代谢等通路。A vs B、A vs C及B vs C共有83种DMs，这83种共有DMs显著富集于组氨酸代谢通路。3个生长阶段均表达的DMs中，呈现持续上升趋势的DM数量最多（667种），这些DMs显著富集于氨基酸生物合成、代谢/降解相关通路、脂质相关代谢通路以及特殊碳单位相关通路。不同阶段DM共同富集于组氨酸代谢，组氨酸代谢可能是贯穿猪不同生长阶段的基础且关键的代谢途径。本研究从代谢层面深化了对猪生长发育机制的认识，为猪分子育种与精准营养调控提供了理论依据和潜在生物标志物。

旨在通过对大白猪的饲料效率及采食行为性状进行遗传参数分析和全基因组关联分析，获得其遗传特性、分子标记及候选基因，为相关性状的基因组选择提供参考依据。本试验以1 024头大白猪为研究对象，将饲料转化率（FCR）、校正40~120 kg饲料转化率（40~120 kg FCR）、平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）、平均每日采食次数（NVD）、平均每日采食时间（TFD）、平均每次采食时间（TV）、平均每次采食量（FIV）、采食速率（FR）作为表型性状，同时进行50K功能芯片测序。在此基础上，采用混合线性模型进行遗传参数分析，应用全基因组关联分析（GWAS）方法筛选与饲料效率和采食行为性状相关的SNP位点，并进行相关候选基因的注释、功能富集和蛋白互作网络分析。结果显示，大白猪的饲料效率和采食行为性状的遗传力在0.32~0.55之间，属于中高遗传力性状；ADFI与ADG的遗传相关较高（0.90），可作为共选育性状；采食行为性状之间存在遗传制约关系，TFD与FR呈高度遗传负相关（-0.89）。GWAS共鉴定到22个显著SNPs位点，其中ADFI关联10个显著SNPs位点，注释到13个候选基因；ADG关联3个显著SNPs位点，注释到9个候选基因；FCR关联3个显著SNPs位点，注释到6个候选基因；TFD关联6个显著SNPs位点，未注释到候选基因。ATP8B1、SLC51B、RASL12、KBTBD13、UBAP1L、PDCD7、CLPX、CILP、PARP16等9个基因在ADFI和ADG的关联信号中共同出现。GO富集结果显示，候选基因显著富集于内质网未折叠蛋白反应、胆汁酸跨膜转运蛋白活性、果糖-2，6-二磷酸代谢过程等条目；KEGG富集结果显示，候选基因显著富集于补体和凝血级联反应、胆汁分泌及果糖和甘露糖代谢等通路。PPI分析构建了两个子网络，其中C4BPA、C4BPB和CD55构成的三角模块主要参与补体激活的负调控过程，ATP8B1与SLC51B构成的子网络在胆汁酸代谢与胆汁盐运输中发挥核心作用。本研究结果为猪的饲料效率和采食行为性状的分子标记辅助选择及功能基因挖掘提供了重要参考。

旨在挖掘小骨山羊群体经济性状相关的功能基因。本研究以小骨山羊群体为研究对象，河西绒山羊和内蒙古绒山羊（阿尔巴斯型）群体为对照，每个群体选择20只健康母羊，利用简化基因组测序（specific-locus amplified fragment sequencing，SLAF-seq）技术检测全基因组范围内的单核苷酸多态性位点（single nucleotide polymorphism，SNP）。通过主成分分析和基因流事件分析群体间基因交流情况；统计长纯合片段（run of homozygosity， ROH）并计算基因组近交系数F_ROH，衡量近交情况；取top 1%的ROH作为高频ROH并注释基因；以窗口法计算群体遗传分化指数（fixation index，F_ST）和核苷酸多样性比值（theta estimated from nucleotide diversity ratio，θπ ratio），并将值为top 5%的窗口作为候选窗口，通过取交集确定选择信号，对其中的候选基因开展京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）和基因本体论（Gene Ontology，GO）富集分析。共获得5 253 776个SNPs标记。主成分分析显示群体间存在重叠，3个群体间没有检测到基因流。小骨山羊ROH数目最少，0~1 Mb片段占比最多，F_ROH 为0.10。长纯合片段岛（island of runs of homozygosity，ROH island）注释基因319个，显著富集在41条KEGG通路和16个生物过程（Biological process，BP）条目（P<0.05）。小骨山羊与河西绒山羊的比较组检测出291个受选择基因，显著富集在21条KEGG通路与27个BP条目（P<0.05）；与内蒙古绒山羊的比较组检测出351个受选择基因，显著富集在21条KEGG通路与16个BP条目（P<0.05）。筛选出PPP3CA和KDM2B等与经济性状相关的基因。研究结果表明，在小骨山羊全基因组范围内检测选择信号，鉴定到与骨骼重量调控相关的候选基因，为小骨山羊的分子遗传标记挖掘提供参考。

为探究Novel-m0035-5p对牛前体脂肪细胞增殖分化及不饱和脂肪酸（UFA）合成的影响。本试验以牛前体脂肪细胞为研究对象，采用双荧光素酶报告基因试验，验证Novel-m0035-5p与ACSL1基因的靶向关系；在牛前体脂肪细胞中转染Novel-m0035-5p mimic和inhibitor及相应的阴性对照后，通过EdU标记、CCK-8细胞增殖检测及油红O染色技术，检测其对牛前体脂肪细胞增殖与分化的影响；通过RT-qPCR检测增殖标志基因与分化标志基因表达量。此外，在牛前体脂肪细胞中转染Novel-m0035-5p mimic和mimic NC后，利用靶向代谢组学（n=3）和非靶代谢组学（n=6）筛选与UFA合成相关的代谢通路及代谢物。结果显示，转染Novel-m0035-5p mimic后，ACSL1-WT载体的荧光素酶活性显著降低，且ACSL1的mRNA表达水平显著下调（P<0.05）。过表达Novel-m0035-5p显著降低牛前体脂肪细胞阳性细胞比例及细胞增殖活性（P<0.05）；RT-qPCR分析表明，细胞增殖相关标志基因CDK3（P<0.05）、CDK4（P<0.01）和Cyclin B（P<0.001）的mRNA表达水平显著降低；油红O染色与TG含量测定结果显示，过表达Novel-m0035-5p，细胞内脂滴数量及总TG含量均显著减少（P<0.05）；脂肪细胞分化标志基因PPARγ（P<0.001）、C/EBPβ（P<0.05）和FABP4（P<0.001）的mRNA表达水平显著降低。而抑制Novel-m0035-5p后则产生相反效应。靶向和非靶代谢组学分析表明，过表达Novel-m0035-5p导致5种脂肪酸（FA）水平差异显著，同时，烟酰胺、前列腺素B2和4-氧代-维A酸在花生四烯酸代谢、烟酸/烟酰胺代谢以及视黄醇代谢通路中显著富集，它们通过调控上述通路参与UFA的生物合成。Spearman相关性分析表明，烟酰胺与顺式-10-十七碳烯酸及顺式-11，14-二十碳二烯酸均呈显著正相关。4-氧代-维A酸与顺式-10-十七碳烯酸呈现显著正相关（P<0.05）。综上所述，本研究证实Novel-m0035-5p通过靶向ACSL1基因抑制牛前体脂肪细胞的增殖与分化；同时，结合靶向和非靶代谢组学分析，筛选鉴定出可能参与UFA生物合成的关键代谢物。上述结果为进一步解析牛前体脂肪细胞中UFA合成的分子调控网络提供了重要的理论依据。

旨在研究扬州鹅高产系（全白羽系）的遗传多样性和亲缘关系，以评估该专门化品系在基因组上的选育效果。本研究中，扬州鹅育种中心的高产系（全白羽系）采取纯系选育的方式，随机从该专门化选育家系中选取48只10周龄健康公鹅，采集静脉血提基因组DNA，并进行10×全基因组重测序，利用生物信息学程序对群体基因组进行遗传多样性和群体遗传结构分析与评价。经质控共筛选得到14 398 912个单核苷酸多态性位点。群体遗传多样性分析结果显示，群体平均观测杂合度为0.223，平均期望杂合度为0.253，群体近交系数均值为0.128，平均多态信息含量为0.207。采样群体共检测到259个连续纯合片段（ROHs），基于ROH值计算得出的近交系数为0.008，近交程度较低。IBS遗传距离矩阵与亲缘关系矩阵的结果趋势相似。主成分分析与聚类分析结果显示，采样群体呈均匀的聚集状态。总体而言，本研究抽样的扬州鹅高产系（全白羽系）群体，在高强度的人工定向选育下，仍保留了一定的遗传多样性，选育后的遗传多样性水平良好。

旨在探究PGF_2α对体外培养母猪卵巢颗粒细胞（granulosa cells，GCs）增殖、凋亡和雌、孕激素分泌的影响及机制。本研究从100 kg左右健康母猪卵泡中分离GCs，首先利用FSHR进行鉴定，应用细胞计数法绘制GCs生长曲线。将分离的GCs随机分为对照组和处理组，每组6个重复，添加氨基丁三醇前列腺素F_2α（prostaglandin F_2α tromethamine，PGF_2α-T）处理后，应用CCK-8和EdU检测细胞增殖活力，JC-1法检测细胞凋亡，ELISA检测细胞培养液上清液中孕酮和雌激素水平；最后应用qRT-PCR检测PGF_2α-T对GCs增殖、凋亡和激素分泌相关基因mRNA表达的影响。结果表明，本研究成功分离到猪GCs，且GCs在培养96 h后达到生长平台期。0~400 μg·mL^-1 PGF_2α-T作用细胞24 h后，其促进GCs增殖效应随着浓度增加而增强，并在100 μg·mL^-1促进作用最明显（P<0.001），随后随着浓度升高促进增殖效应减弱；且100 μg·mL^-1 PGF_2α-T处理的细胞中CCNA1、CCNB2、CCND1、CCNE1、PCNA、胰岛素样生长因子IGF1和IGF2 mRNA表达显著上升（P<0.05），PI3K/AKT/mTOR信号通路信号分子PI3K、AKT和mTOR mRNA表达显著上升（P<0.01）。400 μg·mL^-1 PGF_2α-T作用细胞24 h后，GCs凋亡增加（P<0.01），凋亡标志物Caspase-3、Caspase-9 mRNA表达以及Bax/Bcl-2比值显著上升（P<0.001，P<0.05和P<0.05）。3~1 000 μg·mL^-1 PGF_2α-T作用于GCs 24 h后，随着浓度增加，细胞分泌雌激素和孕酮的水平下降；且100 μg·mL^-1 PGF_2α-T显著抑制FSHR和LHR的mRNA表达（P<0.01），促进PTGFR mRNA表达（P<0.01），显著抑制类固醇激素合成关键基因CYP19A1、CYP11A1和StAR mRNA表达（P<0.05）。结果显示，PGF_2α-T调控猪卵巢GCs增殖、凋亡和激素分泌，其作用机制可能是通过上调细胞周期蛋白、激活PI3K/AKT信号通路，上调凋亡标志物mRNA表达，影响相关激素受体基因及下调类固醇合成关键基因mRNA表达等实现。

旨在探究西藏高原濒危牛种樟木牛精子质量调控及冷冻损伤应答网络。本研究采用电刺激法采集2头健康樟木牛公牛（4岁、1.5岁）精液共6次。精子活力>65%的为高质量精液组（H）、冷冻精液组（F，经“平衡-熏蒸-冷冻”处理），精子活力≤65%的为低质量精液组（L）。检测3组精子活力、质膜及顶体完整性，并利用DIA定量蛋白质组学分析其蛋白质组差异。精子质量检测发现，H组精子活力（78.43%±3.71%）、质膜完整性（82.74%±4.74%）和顶体完整性（79.87%±7.33%）均显著高于F组（37.92%±1.63%、46.21%±4.37%、56.18%±11.23%）和L组（33.33%±4.15%、27.18%±16.05%、39.11%±5.39%）（P<0.05）；精子总蛋白鉴定共发现46 976个肽段和5 426个蛋白；F与H组比较，共识别385个差异表达蛋白（P<0.05），其中上调差异蛋白285个，下调差异蛋白100个；GO富集分析表明，差异蛋白主要富集于细胞内信号转导等生物学功能；KEGG通路分析则揭示了这些差异蛋白主要富集于168条通路（P<0.05），其中在冷冻损伤响应中发挥关键作用的AMPK和MAPK等信号通路呈现差异表达。L与H组对比，发现580个差异蛋白（P<0.05），其中上调差异蛋白359个，下调差异蛋白221个；GO功能富集提示其主要参与细胞内生物合成过程等；KEGG通路分析富集到132条通路（P<0.05），其中主要为与精子质量调控密切相关的氧化磷酸化和PI3K-Akt等信号通路。基于蛋白质互作分析，研究明确了F与H组、L与H组精子差异表达蛋白之间的互作关系，并筛选出了互作关系网络中35个核心蛋白（F与H组中11个、L与H组中24个）；在对其中的差异蛋白GAPDH、TFAM（F与H组）、ND3、DAG1（L与H组）进行Western blot检测后，发现这些蛋白在精子中的表达量与蛋白质组学分析结果一致。本研究从蛋白质组学层面解析樟木牛精子质量调控机制及冷冻损伤应答网络，为濒危牛种精液冷冻保存技术优化及遗传资源保护提供重要理论依据和分子靶点。

旨在解决肉牛规模化养殖中母牛发情监测准确率低、应激反应大等问题，明确瘤胃温度与瘤胃蠕动次数在发情周期的动态变化规律及监测适用性。本研究以66头4~6岁、3胎及以上健康安格斯经产母牛为试验对象；采用单组连续监测设计，以每头母牛为独立重复，通过智能瘤胃传感器连续采集“发情前7 d—发情当天—发情次日”的瘤胃温度与瘤胃蠕动次数；结合“每2 h行为观察+直肠卵泡检查”双重标准判定发情，采用SPSS 21.0软件进行重复测量方差分析，GraphPad Prism 9.0绘图，P<0.05为差异显著。结果表明：①瘤胃温度与瘤胃蠕动次数均呈显著昼夜节律，瘤胃温度11：00达谷值（（38.35±0.31） ℃）、18：00达峰值（（39.03±0.33） ℃），瘤胃蠕动次数呈双峰值（10：00，（1 761.91±1 209.40）次·h^-1、18：00，（2 238.66±1 291.05）次·h^-1）；②发情当天瘤胃温度均值（（38.95±0.20） ℃）较发情前7 d均值（（38.69±0.02） ℃）显著升高（0.26±0.02） ℃（P<0.05），关键升温始于发情前2 h，发情后4~6 h达峰值（（39.49±0.49） ℃）；发情当天的瘤胃蠕动次数（（67 579.70±11 946.63）次）较发情前7 d（（34 800.20±9 215.845）次）约增加93.08%（P<0.05），响应始于发情前10 h，发情后4~6 h达峰值（（4 063.67±1 843.94）次·h^-1）。综上，牛发情周期中瘤胃温度与瘤胃蠕动次数动态规律明确，具备低应激、高灵敏的发情监测优势，可作为肉牛规模化牧场中母牛精准发情监测的核心指标，为肉牛繁殖管理数智化升级提供数据支撑。

为了探究SNRPB2基因在牛植入前胚胎发育中的功能，本研究采集屠宰场卵巢，获取卵丘-卵母细胞复合体（cumulus-oocyte complexes，COCs）并进行体外成熟、受精与培养。细胞转染验证siRNA-SNRPB2干扰效率后，通过显微注射技术将阴性siRNA和siRNA-SNRPB2在受精后注射入受精卵中，分别作为对照组和干扰组。统计卵母细胞的卵裂率、8-16细胞率、8-16细胞阻滞率、囊胚发育率。每组总样本为15~25枚胚胎，每个试验重复3次。检测8-16细胞期时SNRPB2基因干扰效率、新生RNA水平、胚胎基因组激活（embryonic genome activation，EGA）相关基因的表达水平，并检测囊胚时期细胞凋亡情况、滋养层和内细胞团数量。试验结果显示，与对照组相比，SNRPB2干扰组的早期胚胎卵裂率无显著差异（78.47%±5.31% vs 82.87%±1.69%，P>0.05），但8-16细胞阻滞率极显著升高（29.68%±4.29% vs 81.48%±2.84%，P<0.01），囊胚形成率显著降低（50.18%±4.99% vs 12.92%±2.14%，P<0.01）。免疫荧光染色结果表明，SNRPB2干扰导致胚胎新生RNA合成受阻及囊胚的早期凋亡水平增加；qRT-PCR分析显示，部分EGA相关基因的转录水平显著下降（P<0.05），提示SNRPB2干扰对胚胎基因组激活过程产生损害。综上所述，SNRPB2可能通过调控胚胎基因组激活、细胞凋亡过程以及介导新生RNA合成，在牛早期胚胎发育进程中发挥核心调控作用，进而影响胚胎发育潜能。

畜牧养殖业中，铅离子（Pb²⁺）作为一种剧毒重金属，由于环境污染导致家畜接触铅（Pb²⁺）的情况经常发生，动物饲料中的Pb²⁺污染是家畜Pb²⁺暴露的主要途径。即使在痕量水平上也会对动物造成各种损害。当前饲料重金属检测依赖原子吸收光谱法（atomic absorption spectroscopy，AAS）、电感耦合等离子体质谱法（inductively coupled plasma-mass spectrometry，ICP-MS）等传统技术，存在操作繁琐、依赖大型仪器和检测周期长等问题，难以满足在饲料生产及养殖现场的饲料快速检测与筛查需求。基于此，本研究开发并验证了一种基于DNAzyme与磁性纳米材料的荧光生物传感平台，以实现对饲料中Pb²⁺的快速、高特异性检测。本研究以金纳米磁珠（Fe₃O₄@Au）作为载体，通过一系列的试验对生物敏感材料组装与传感器构建条件进行优化，确定GR-5-sub信号传导元件的最佳浓度为20 μmol·L^-1、孵育时间12 h，并确定了DNAzyme生物识别元件与GR-5-sub的最佳浓度比为1.5∶1且采用95 ℃退火结合的方式进行组装，成功构建了Fe₃O₄@Au-GR-5-sub-DNAzyme荧光传感器。同时优化了检测体系，确定了最佳检测pH和反应时间，结果表明，所构建的荧光生物传感器性能优异，不仅在1 pmol·L^-1~1 μmol·L^-1 Pb²⁺浓度内线性关系良好，检测限为0.137 μg·kg^-1，低于我国饲料铅限量标准，并对饲料中常见的干扰性金属离子表现出优异的抗干扰性，通过对Pb²⁺加标的饲料样品进行检测，回收率达到86%~118%，与火焰原子吸收光谱法传统检测方法的检测性能基本一致。综上证明，该传感平台具有快速、准确、高特异性的优势，为饲料中Pb²⁺的痕量检测提供了新技术方案，对保障畜禽健康养殖、阻断铅通过食物链危害人类健康及推动畜牧业可持续发展具有重要意义。

旨在研究胆汁酸对热应激蛋鸡蛋品质、抗氧化能力和盲肠菌群的影响。选取产蛋率和体重相近的55周龄京粉三号蛋鸡400只，随机分为5个处理组，每个处理8个重复，每个重复10只鸡。常温对照组温度为（26±1） ℃，高温对照组温度为（35±1） ℃，均饲喂玉米-豆粕基础日粮；高温处理组温度为（35±1） ℃，分别在基础日粮中添加60、120和240 mg·kg^-1胆汁酸（猪源性胆汁酸，主要成分为7.99%猪胆酸、19.65%鹅脱氧胆酸和70.88%猪脱氧胆酸，总胆汁酸含量98.52%）。常温对照组24 h处于常温状态，高温对照组和高温处理组16/8 h处于高温/常温状态，光/暗循环为16/8 h。试验期28 d。结果表明，与高温对照组相比，饲喂胆汁酸均显著改善蛋鸡所产蛋的蛋黄颜色（P<0.05），其中添加120 mg·kg^-1胆汁酸显著提高哈氏单位（P<0.05）。与高温对照组相比，日粮中添加120 mg·kg^-1胆汁酸显著提高热应激蛋鸡血液总抗氧化能力（T-AOC）和超氧化物歧化酶（SOD）含量（P<0.05）。饲喂120 mg·kg^-1胆汁酸对蛋鸡盲肠菌群Chao1、Shannon、Simpson和ACE指数没有显著影响（P>0.05）。饲喂120 mg·kg^-1胆汁酸提高了蛋鸡盲肠罕见小球菌属（Subdoligranulum）、扭链瘤胃球菌（Ruminococcus torques）和未正式命名罕见小球菌（研究编号IC1395，subdoligranulum-bacteriumic1395）相对丰度。综上所述，日粮中添加胆汁酸可改善热应激蛋鸡蛋品质、增强抗氧化能力和优化盲肠菌群结构。在本试验条件下，热应激蛋鸡日粮中胆汁酸适宜添加量为120 mg·kg^-1。

旨在评定固态和液态发酵巨菌草在生长猪上的消化能（DE）和代谢能（ME）。选取“杜×长×大”去势公猪18头（初始体重：48.7±4.5 kg），采用18×2尤丁方试验设计，分2期试验进行，随机分为6个处理组，分别饲喂1种基础饲粮和5种待测试验饲粮（固态巨菌草组、固态发酵巨菌草1组、固态发酵巨菌草2组、液态巨菌草组、液态发酵巨菌草组），每期试验包含5 d预饲期和5 d粪尿收集期。每个处理6个重复，每个重复1头猪。同时，采用猪体外仿生消化法测定各处理巨菌草的干物质（DM）和总能（GE）体外消化率，每个处理5个重复，每个重复1根消化管。结果表明：DM基础下，固态发酵均可提高固态巨菌草GE、粗蛋白质（CP）和粗脂肪（EE）的含量，降低粗纤维（CF）和中性洗涤纤维（NDF）含量。液态发酵会提高液态巨菌草EE含量，但同样提高了CF、NDF和酸性洗涤纤维（ADF）含量，降低了CP含量。猪体外仿生消化结果表明，2种固态发酵方式均可显著提高巨菌草DM和GE体外消化率（P<0.01），液态发酵对巨菌草DM和GE体外消化率没有显著影响。体内试验结果表明，固态发酵巨菌草2对生长猪的DE（P=0.07）和ME（P=0.08）有提高趋势，但显著降低了NDF的表观全肠道消化率（ATTD）（P=0.04）。液态发酵对巨菌草在生长猪上的DE和ME没有显著影响。固态巨菌草DE（8.52 vs. 6.03 MJ·kg^-1 DM）和ME（7.17 vs. 5.60 MJ·kg^-1 DM）高于液态巨菌草。综上可知，通过发酵工艺可以一定程度改善巨菌草的营养价值，固态发酵可提高巨菌草的DE和ME。

旨在探究饲粮能量水平对萨-藏杂交F1代绵羊的生长性能、屠宰性能、肉品质及胃肠道组织形态的影响。采用单因子完全随机设计，选取30只经同期发情处理萨福克羊改良河谷型藏绵羊所产的3月龄去势羔羊（♂，17.57±1.20 kg），按饲粮代谢能水平随机分为低能组（代谢能10.51 MJ·kg^-1）、中能组（11.24 MJ·kg^-1）和高能组（11.95 MJ·kg^-1），每组10个重复。试验期97 d，包括预试期7 d和正试期90 d。结果表明：1）随着饲粮能量水平升高，中、高能组的终末体重、净增重、干物质及粗蛋白质表观消化率、胴体重、净肉重、GR值和板油重显著高于低能组（P<0.05），中、高能组之间差异不显著（P>0.05）；2）器官指数方面，低能组肝重和肾重指数显著高于高能组（P<0.05），心、脾、肺指数差异不显著（P>0.05）；3）肉品质方面，低能组肌肉pH_{1 h}、pH_{24 h}显著高于高能组，且肌肉剪切力显著低于高能组（P<0.05）；4）与低能组相比，高能组在瘤胃乳头宽度、乳头基底层厚度、肌层和黏膜层厚度，网胃基底层厚度，瓣胃肌层厚度，十二指肠肌层厚度、绒毛高度及杯状细胞密度，空肠绒毛高度，回肠杯状细胞密度，盲肠固有层厚度，结肠肌层及固有层厚度，以及直肠上皮和固有层厚度等指标上均显著增加（P<0.05）；相反，在瘤胃乳头颗粒层厚度、网胃黏膜层厚度、皱胃肌层厚度、空肠肌层及黏膜上皮厚度、回肠肌层厚度与隐窝深度、盲肠上皮厚度与杯状细胞密度、结肠杯状细胞密度以及直肠固有层厚度等指标上，高能组显著低于低能组（P<0.05）。中能组在各区段的大多数指标上与低能组和高能组相比均无显著差异（P>0.05）。综上，中、高能组的终末体重、净增重、干物质及粗蛋白质表观消化率、胴体重、净肉重、GR值、肌肉剪切力、花油重和板油重显著高于低能组，且中、高能组之间并未检测到显著性差异，同时三种能量水平处理下肌肉酸碱度在pH_1h（5.8~6.5）和pH_24h（5.4~5.7）范围内，此外，中能组在各区段胃肠道组织大多数形态指标几乎与低能组和高能组之间无显著性差异，由此可见，代谢能为11.24 MJ·kg^-1的全混合饲粮能显著提升集约化养殖条件的萨-藏杂交F1代绵羊的生长及屠宰性能，维持肌肉pH于正常区间，且能够促进胃肠道组织形态发育。

旨在研究不同粗饲料和添加白藜芦醇（RSV）对育肥肉羊生长性能、营养物质表观消化率、甲烷排放、能量代谢、氮代谢和胃肠道组织形态结构的影响。试验选取健康、断奶后体重为（27.56±1.72）kg的澳洲白（♂）和湖羊（♀）杂交F₁代公羔36只，依据2×2双因素试验设计随机分为4组，分别以膨化油菜秸秆或花生秧为粗饲料来源，以及添加或不添加白藜芦醇（RSV，每只羊添加2 g·d^-1），每组9个重复，每个重复1只羊。试验期90 d，包括预试期30 d和正试期60 d。结果表明：1）与花生秧相比，以膨化油菜秸秆为粗饲料极显著提高育肥肉羊30~60 d的干物质采食量（DMI）（P<0.01），显著提高1~60 d的DMI（P<0.05）；2）与花生秧相比，以膨化油菜秸秆为粗饲料显著降低育肥肉羊的干物质（DM）表观消化率（P<0.05）；3）与花生秧相比，以膨化油菜秸秆为粗饲料极显著降低育肥肉羊瘤胃乳头高度和回肠绒隐比（P<0.01）；添加RSV显著提高育肥肉羊回肠绒隐比（P<0.05），极显著提高瘤胃乳头宽度和回肠黏膜层厚（P<0.01）；4）与花生秧相比，以膨化油菜秸秆为粗饲料显著提高育肥肉羊粪能（FE）（P<0.05），显著降低总能（GE）消化率和代谢率（P<0.05）；5）与花生秧相比，以膨化油菜秸秆为粗饲料极显著降低育肥肉羊摄入总氮（P<0.01），显著降低氮沉积率（P<0.05）。添加RSV显著降低育肥肉羊氮沉积率（P<0.05）；6）粗饲料和添加RSV均对育肥肉羊甲烷排放无显著影响（P>0.05）。上述各指标均未见粗饲料来源和RSV的交互作用（P>0.05）。综上，以膨化油菜秸秆作为育肥肉羊的粗饲料来源，能够提高DMI；添加2 g·d^-1的RSV能够改善育肥肉羊胃肠道发育。

旨在探究在低蛋白日粮的基础上添加过瘤胃赖氨酸（rumen-protected lysine，RPL）、过瘤胃蛋氨酸（rumen-protected methionine，RPM）或酵母培养物（yeast culture， YC）对奶牛泌乳性能及瘤胃发酵参数的影响。选取泌乳天数（121±8 d）、胎次（1.5±0.1）和产奶量（32.5±0.7 kg·d^-1）相近的健康荷斯坦奶牛24头，随机分为3组，每组8头。对照组（HP组）饲喂粗蛋白质（crude protein， CP）水平为16.20%的基础日粮；低蛋白氨基酸平衡组（LPLM组）饲喂CP水平为14.50%的低蛋白日粮，并添加50 g·d^-1 RPL和40 g·d^-1 RPM；低蛋白酵母组（LPYC组）饲喂CP水平为14.50%的低蛋白日粮，另添加100 g·d^-1的YC。试验期共10周，其中预饲期2周，正试期8周。结果表明：1）与HP组相比，LPLM组和LPYC组奶牛的干物质采食量（dry matter intake， DMI）、产奶量、乳糖、乳脂肪、非脂乳固体及总固体含量无显著差异（P>0.05），但CP摄入量及各养分表观消化率显著下降（P<0.05）；其中LPYC组奶牛乳蛋白率显著高于HP组（P<0.05）；2）与HP组相比，LPLM组和LPYC组乳中甘氨酸（Gly）、蛋氨酸（Met）、酪氨酸（Tyr）等氨基酸及总氨基酸（total amino acid， TAA）含量显著升高（P<0.05），而血清中氨基酸含量无显著变化（P>0.05）；3）LPLM组和LPYC组奶牛乳中亚油酸和α-亚麻酸含量均显著高于HP组奶牛（P<0.05）；4）与HP组相比，LPLM组和LPYC组奶牛瘤胃液pH显著升高，而丙酸、丁酸、异戊酸及总挥发性脂肪酸浓度显著降低（P<0.05）。综上所述，尽管在低蛋白日粮中添加RPL和RPM在一定程度上影响了瘤胃发酵，但未影响泌乳奶牛生产性能，且优化了乳中氨基酸和脂肪酸组成。同时，低蛋白日粮中添加YC的效果与补充RPAA相似，还可以提高乳蛋白含量，有利于改善泌乳奶牛生产性能。

本研究旨在对获得的山羊地方性鼻内肿瘤病毒（ENTV-2）进行全基因组扩增和序列分析，明确其遗传特征及进化地位。通过PCR鉴定与Sanger测序获得其序列，命名为GZZY1（基因登录号：PV871611.1）。利用DNASTARLasergene v7.1、RDP4、SimPlot及MEGAv11软件（邻接法），结合GenBank中相关参考毒株进行基因特征及系统发育分析。系统发育分析显示，所有中国ENTV-2毒株聚为谱系1，其他国家毒株构成谱系2；谱系1可分6个亚谱系，GZZY1因与已知亚谱系聚类距离较远，成为新的1.6亚谱系，其与ENTV-2 CQ1核苷酸差异近5%，印证了独特性。GZZY1全基因组相关特征：长末端重复序列（LTR）长377 bp，U3、R、U5区域分别为285、13、79 bp，与ENTV-2 FJ有7个核苷酸差异，且LTR区域与其他病毒差异显著；gag基因编码616个氨基酸多肽，含典型锌指结构域，与enENTV-CHN4的Gag氨基酸相似度96.4%，24个差异中8个位于可变区域，且不含多数ENTV-2中的连续6个Pro残基序列。Pro区与ENTV-2 Shaanxi3核苷酸及氨基酸相似度均达99.7%，仅1个氨基酸差异；Pol区与enENTV-CQ1核苷酸相似度97.9%、氨基酸相似度98.3%，有12个氨基酸差异；Env蛋白与ENTV-2 CQ1有25个氨基酸差异，21个位于SU结构域，4个位于TM结构域，且除特定毒株外均含YXXM基序。重组分析表明，GZZY1存在4个高可靠性重组断点，可能是以enENTV-CQ1（1.5亚谱系）为主亲本、ENTV-2 FJ（1.2亚谱系）为次亲本的天然重组体，非重组区与重组区的系统发育关系差异支持此结论。综上所述，本研究获得了一株新的ENTV-2重组毒株，为深入探究ENTV-2遗传变异与进化提供了重要依据。

口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）是一种高度传染性的RNA病毒，在我国被列为一类动物疫病，对畜牧业安全构成严重威胁。为建立灵敏、快速的口蹄疫病毒检测体系，本研究基于反向遗传学技术，在FMDV O/BY/CHA/2010株的全长cDNA感染性克隆基础上，构建了HiBiT荧光素酶报告基因标记的重组口蹄疫病毒，并在BSR/T7细胞中成功拯救获得重组病毒。Western blot结果验证了HiBiT 蛋白在重组病毒中的正确表达。进一步通过50%组织感染量（TCID₅₀）、噬斑试验、生长曲线分析以及遗传稳定性检测，对重组病毒的体外生物学特性进行了系统评估。结果表明，重组病毒在复制能力和致病性方面与亲本病毒无显著差异，且保持良好的生物学特性。此外，本研究构建并筛选获得稳定表达LgBiT蛋白的BSR/T7细胞系。通过LgBiT与HiBiT蛋白的特异性互补结合，实现对病毒感染过程中发光信号的实时检测，建立了一种高灵敏度的病毒检测体系。综上，HiBiT报告基因的引入不影响FMDV的基本生物学特性，并结合BSR/T7-LgBiT细胞系，提供了一种可用于口蹄疫病毒研究和快速检测的工具。

本研究旨在探究不同年龄小鼠（幼年、成年及老年）感染D型流感病毒（influenza D virus，IDV）后肺组织中长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）表达差异，并筛选病毒-宿主互作中可能发挥关键作用的lncRNA。本研究通过建立IDV感染小鼠模型，采集各年龄组小鼠肺组织进行转录组测序，结合严格的筛选标准（∣log₂ FC∣>1，P-adjust<0.05），鉴定差异表达转录本，通过GO和KEGG富集分析预测其潜在功能，利用q-PCR对测序结果进行试验验证，并进一步利用体外细胞过表达模型对关键lncRNA进行功能验证。研究结果显示，IDV感染显著扰动小鼠肺部lncRNA表达谱，且应答强度呈现明显的年龄依赖性，幼年组差异表达lncRNA数量最多（916个），老年组最少（343个），共鉴定出38个在三个年龄组中共同差异表达的lncRNA。功能富集表明，这些lncRNA的靶基因显著富集于NOD样受体信号通路、甲型流感病毒、新型冠状病毒等重要病毒免疫密切相关的通路。挑选了10个差异最显著的lncRNA及10个其共表达靶基因进行q-PCR验证，只有1个lncRNA的表达趋势与测序结果不一致，证实了数据的可靠性。进一步通过体外过表达细胞感染模型证实，候选分子lncRNA Oasl2-209在IDV感染后被诱导表达，其过表达能显著提高2'-5'-寡腺苷酸合成酶样2（2'-5'-oligoadenylate synthetase-like 2，Oasl2）的表达水平，并显著抑制IDV在小鼠肺上皮细胞中的复制。本研究揭示了IDV感染可引起年龄特异性的lncRNA表达差异，其中38个在各年龄组之间共同差异表达的关键lncRNA可能在宿主广谱抗病毒免疫中发挥重要作用，其中，关键分子Oasl2-209可通过上调Oasl2基因的表达抑制IDV复制。本研究为进一步探索IDV感染机制和寻找潜在的抗病毒治疗靶点提供了新的思路。

本研究旨在建立滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae，MS）、传染性支气管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）与鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）混合感染的SPF鸡输卵管栓塞模型，探讨当前青年蛋鸡输卵管栓塞发生的病因，为产蛋鸡输卵管栓塞的防控提供思路。选用90只30日龄SPF母鸡，随机分为7组，包括空白对照组、RA单一感染组、MS+RA、IBV-VI+RA、IBV-QX+RA、IBV-VI+MS+RA及IBV-QX+MS+RA感染组。通过点眼途径先感染MS和/或IBV，7 d后再点眼感染RA，观察临床症状。于RA感染后第7、14和21天进行剖检，通过气囊损伤评分、组织病理学分析和病原载量检测等方法，分析各组鸡气管、气囊和输卵管的损伤情况。结果显示：阴性对照鸡在整个试验过程中未见异常；在RA感染第7天后，RA单一感染组未见明显气囊炎和输卵管病变；MS+RA感染组鸡出现轻度气囊炎但未发生输卵管栓塞；IBV+RA混合感染组（尤其是IBV-VI+RA组）发生了明显的气囊炎，且部分鸡出现输卵管栓塞；IBV+MS+RA混合感染组表现为严重的腹气囊炎和输卵管栓塞，其中IBV-QX+MS+RA组栓塞率明显高于IBV-VI+MS+RA组。在RA感染第14和21天后，各感染组鸡的气囊炎症状部分缓解，但IBV+MS+RA混合感染组的干酪样物质增多并硬化，输卵管栓塞发生率和病变程度加重，IBV-QX+MS+RA组输卵管栓塞更为严重。气管病原载量检测结果显示，MS在感染周期均维持较高载量，而IBV检出率和病原载量水平较低，RA病原在RA单一感染组几乎未检出，但在IBV+MS+RA感染组中，发生输卵管栓塞的鸡RA载量相对较高。输卵管病原载量检测结果进一步证实RA的高载量与输卵管栓塞发生高度相关，而IBV和MS载量与输卵管栓塞发生无显著关联。组织病理学分析显示MS+RA及IBV+MS+RA混合感染组均出现气管黏膜增厚、纤毛缺失和炎性细胞浸润，其中IBV-QX+MS+RA组损伤程度显著高于其他组；发生栓塞的输卵管中可见大量黏液、坏死上皮细胞及炎性细胞浸润。综上，传染性支气管炎病毒、滑液囊支原体和鸭疫里默氏杆菌的混合感染可显著诱发青年SPF鸡输卵管栓塞，并引起气囊和输卵管的严重病变，与生产实际中所观察到的现象具有一致性。该结果为青年产蛋鸡输卵管栓塞的防控提供了理论支撑。

本研究旨在分离鉴定某规模化肉牛场病亡牛的主要病原——牛支原体，并系统分析其生物学特性、耐药性及毒力基因特征，为牛呼吸道疾病防控策略提供病原学基础。采集病亡牛肺组织样本，通过细菌分离培养、菌落形态观察、生化鉴定、特异性PCR扩增、16S rRNA基因测序及系统发育分析、生长曲线测定、毒力基因PCR检测、药敏试验及耐药机制研究开展综合分析。结果显示：分离株呈典型的“煎蛋”样菌落形态，Dienes 染色显示中央深蓝着色，边缘透明环状结构；生化鉴定显示脲酶试验呈阳性，葡萄糖、甘露醇、明胶及甲基红试验等结果均为阴性；16S rRNA基因测序表明分离株与多株牛支原体基因序列相似性>99%，鉴定为牛支原体，命名为zzccy-20。生长曲线表明该菌株24 h进入平台期，30 h进入衰亡期；毒力基因检测证实其携带VspY2、VspX、VspHB0801-1、P48、Vpma1331、P81基因；药敏试验结果提示分离株对大环内酯类（泰乐菌素、替米考星、红霉素）和氟喹诺酮类（恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星）耐药；耐药机制研究揭示大环内酯类和氟喹诺酮类药物结合作用靶点基因均发生错译突变。综上，zzccy-20菌株呈现多重耐药表型且携带多种高毒力基因，其耐药性与药物靶基因位点突变密切相关，本研究结果为牛支原体病的针对性防控提供科学依据。

梅山猪是我国太湖流域地方品种猪的重要代表之一，但猪肺炎支原体（Mhp）的感染一直制约着该猪种的发展。本研究旨在揭示感染梅山猪的猪肺炎支原体菌株的遗传特征、毒力及药物敏感性，为梅山猪支原体肺炎的防控提供依据。首先采集出栏前未用抗生素，病变评分≥15分且Mhp实时荧光定量PCR（qPCR）检测Ct值<30的梅山猪肺脏组织，利用KM2培养基进行Mhp分离，通过菌落形态、qPCR及16S rRNA基因测序对培养物进行鉴定。然后采用多位点序列分型（MLST）分析分离株的基因型。通过结晶紫染色法测定Mhp分离株生物被膜形成能力，并通过扫描电镜观察Mhp分离株感染离体培养梅山猪气管环后纤毛损伤情况以评估其毒力。最后采用微量肉汤稀释法测定10种常用抗菌药物对Mhp分离株的最小抑菌浓度（MIC）。结果表明，从10份肺脏样本中成功分离到3株Mhp，命名为Mhp-MS-2401、Mhp-MS-2402和Mhp-MS-2403。MLST分型显示3株均为ST252型，为国内外首次报道。3株分离株均具有较强的生物被膜形成能力（OD_{570 nm}>4ODc），且能引起离体气管环纤毛严重损伤脱落。药物敏感性试验表明，3株分离株对泰妙菌素高度敏感（MIC≤0.007 8 µg·mL^-1），对泰乐菌素和林可霉素敏感（MIC=0.062 µg·mL^-1），但对替米考星（MIC=32 µg·mL^-1）、泰万菌素和庆大霉素（MIC=8 μg·mL^-1）耐药。本研究从梅山猪中成功分离并鉴定出ST252型Mhp强毒株，该菌株对泰妙菌素敏感，但对替米考星和泰万菌素耐药，为梅山猪Mhp感染的临床用药和综合防控提供参考。

旨在从天然产物库中筛选靶向β-微管蛋白的高效抑制剂，以期为开发治疗捻转血矛线虫病的新型天然疗法提供候选化合物。采用基于结构的虚拟筛选方法，对TargetMol天然产物数据库L6020（共16 627个化合物）进行筛选，寻找靶向β-微管蛋白的潜在抑制剂。对筛选出的候选化合物进行量子化学计算（DFT）以验证其理化稳定性。进一步对候选化合物与β-微管蛋白形成的复合物进行50 ns的分子动力学（MD）模拟，分析均方根偏差（RMSD）、均方根波动（RMSF）、回旋半径（Rg）、溶剂可及表面积（SASA）和氢键（H-bond）等参数以评估复合物稳定性。利用MM-PBSA方法计算结合自由能，分析候选化合物的结合亲和力。虚拟筛选结果发现Glycyrrhisoflavone、Myricetin、Glicoricone、Maesopsin及Derrisisoflavone B五种潜在化合物，其与β-微管蛋白结合亲和力分别为-42.708、-40.138、-39.284、-37.216和-37.137 kJ·mol^-1，经量子化学计算（DFT）验证其理化稳定性。从均方根偏差（RMSD）、均方根波动（RMSF）、回旋半径（Rg）、溶剂可及表面积（SASA）、H键等各种MD分析结果显示，这些复合物的整体结构稳定。通过MM-PBSA计算进一步确认Glycyrrhisoflavone和Glicoricone对β-微管蛋白结合亲和力高于阿苯达唑，因此，其可作为潜在的抑制剂，未来将进一步对这两种化合物进行驱虫试验验证。

中国作为肉鸡生产大国和抗生素消耗大国，肉鸡源大肠杆菌成为抗生素耐药基因（Antimicrobial Resistance Genes，ARGs）的重要储存库和扩散源，可通过食物链和环境对人类健康构成风险。为系统评估我国肉鸡养殖环节大肠杆菌ARGs携带情况，本研究检索2012—2025年期间中国知网、维普、万方、PubMed等中英文数据库中关于中国肉鸡养殖环节大肠杆菌耐药基因的相关研究，采用Review Manager 5.3软件进行Meta分析。经筛选，本研究共纳入文献32篇，涉及9 619份样品，分离6 474株大肠杆菌，对4 025株大肠杆菌进行ARGs检测。Meta分析结果显示，中国肉鸡养殖环节大肠杆菌β-内酰胺类耐药基因总检出率为37%（95% CI，28%~45%），优势基因为bla_TEM 和bla_CTX-M，检出率分别为59%（95% CI，43%~74%）和45%（95% CI，31%~58%）；四环素类耐药基因总检出率为42%（95% CI，30%~53%），优势基因为 tet（A） 62%（95% CI，50%~74%）；多肽类药物耐药基因仅分析了mcr-1，检出率为19%（95% CI，8%~30%）；除mcr-1外，高危基因如bla_NDM 和tet（X）等也有不同程度的检出。我国肉鸡养殖环节大肠杆菌ARGs检出率在农业农村部194号公告和《全国兽用抗菌药使用减量化行动方案》推行后出现了显著拐点并呈下降趋势，但β-内酰胺类和氨基糖苷类ARGs检出率呈“政策抗性”，在环境中自然消减与清除存在显著滞后性。建议在肉鸡养殖环节仍需严格管控和规范兽用抗菌药的使用，积极推动绿色养殖和抗生素替代疗法，减少肉鸡养殖对抗生素的依赖，建立ARGs监测网络，追踪高危基因的时空动态，以遏制ARGs的蔓延。

本研究旨在探讨长链非编码RNA ch-MYC-AS1在J亚群禽白血病病毒（ALV-J）感染过程中的作用，并解析其通过调控膜联蛋白A2（ANXA2）核转位以抑制病毒复制的分子机制。以鸡巨噬细胞系HD11为研究对象，通过ch-MYC-AS1过表达与敲低细胞模型；采用RT-qPCR和Western blot法检测ALV-J囊膜基因（env）在转录与翻译水平的表达以及TCID₅₀检测病毒滴度以评估病毒复制水平；利用RNA pull-down联合质谱分析、RNA免疫共沉淀（RIP）及Western blot验证ch-MYC-AS1与ANXA2的相互作用；通过亚细胞组分分离及ANXA2回复表达试验，分析ANXA2核转位过程及其在病毒复制中的功能。结果表明，过表达ch-MYC-AS1可显著抑制ALV-J的复制，而敲低ch-MYC-AS1则明显促进病毒复制。机制研究显示，ch-MYC-AS1能够直接与ANXA2蛋白结合。ALV-J感染可诱导ANXA2发生核转位，而ch-MYC-AS1过表达有效阻断了该过程。在ch-MYC-AS1稳定表达的细胞中回复ANXA2表达，可逆转ch-MYC-AS1对ALV-J复制的抑制作用。结果提示，ch-MYC-AS1作为宿主内源性的抗病毒因子，可通过直接结合ANXA2并阻断其病毒感染诱导的核转位，从而抑制ALV-J复制。

高原环境具有高寒、低氧等特点，牦牛毛在高原环境适应过程中发挥着重要作用。毛作为皮肤的附属物，既可以保护皮肤免受紫外线和机械损伤，又可以调节体温，它还可以反映机体的健康状况，是观察机体健康状态的重要方式。毛由毛囊产生，毛囊主要由其毛球部的真皮乳头控制生长和生长周期转换过程。本研究旨在通过探究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor，FGF2）、蛋白激酶Bα（AKT1）、SRY-box转录因子2（SRY-box transcription factor 2，SOX2）在毛囊不同生长周期的表达分布，并进一步通过培养毛乳头细胞（dermal papilla cells，DPCs）阐明FGF2、AKT1、SOX2对DPCs增殖及凋亡的影响。本研究通过采集成年牦牛（毛囊处于休止期、生长期、退行期）的皮肤，通过组织免疫荧光（IF）、蛋白免疫印记（Western blot）和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术来检测FGF2、AKT1、SOX2的定位与表达。并且通过培养的牦牛DPCs，探究加入FGF2抑制剂NSC12通过抑制FGF2对AKT1、SOX2以及DPCs增殖与凋亡的影响。IF结果显示，FGF2、AKT1和SOX2蛋白在毛囊休止期、生长期和退行期皮肤中定位基本相同，主要表达在毛囊的内外根鞘、汗腺和毛乳头等部位。Western blot结果显示，FGF2蛋白在生长期和休止期表达量高，退行期较低。AKT1和SOX2蛋白表达量一致，在生长期最高，休止期次之，退行期最低。qRT-PCR结果显示，FGF2、AKT1和SOX2的mRNA表达量在退行期最高，生长期和休止期较低。使用NSC12处理DPCs，能抑制DPCs中FGF2蛋白的表达，并且当FGF2蛋白的表达受到抑制后，AKT1、p-AKT1、SOX2的蛋白表达量也显著降低；相反，Caspase-3蛋白表达量升高，Bcl2/Bax蛋白相对表达量降低。综上所述，牦牛DPCs中FGF2可能通过调节AKT1的活性激活SOX2调控DPCs增殖、凋亡水平，从而在毛囊生长周期转换过程中发挥作用。本研究能为牦牛毛囊高寒、低氧环境适应性分子调控机制研究提供一定的基础资料。

旨在建立并验证一种用于测定牛血浆中头孢噻呋活性代谢物去呋喃甲酰基头孢噻呋（desfuroyl ceftiofur，DFC）的生物分析方法，并对健康安格斯牛皮下注射头孢噻呋晶体注射液（ceftiofur crystalline free acid，CCFA）后体内DFC的药物代谢动力学规律进行考察。选取12头健康安格斯牛，以6.6 mg·kg^-1剂量于近头部耳背中部单次皮下注射某公司自研头孢噻呋晶体注射液，于给药前和给药后不同时间点颈静脉采血。分离血浆，血浆样品经二硫赤鲜糖醇（dithioerythritol，DTE）还原作用，使DFC从蛋白或含硫化合物中分离，经提取净化后用高效液相色谱法测定血药浓度，内标法定量，血药浓度以非房室模型计算药代动力学参数。结果显示：该药在牛体内的药动参数达峰时间T_max为（21.33±7.00） h，达峰浓度C_max为（7.89±1.45） μg·mL^-1，药-时曲线下面积（AUC_0-t）为（518.92±115.42） h·μg·mL^-1、（AUC_0-∞）为（533.41±120.33） h·μg·mL^-1，消除半衰期t_1/2λz为（54.64±26.43） h，单次给药可维持有效血药浓度达10 d以上。牛皮下注射某公司自研头孢噻呋晶体注射液后，消除缓慢且能够维持较长时间的有效血药浓度。

旨在探究山羊副流感3型病毒（CPIV3）感染牛肾细胞（Madin-Darby bovine kidney cell，MDBK cell）过程中对细胞骨架的调控作用，重点关注对微管（microtubules，MTs）系统的调控。分别采用干扰MTs和微丝骨架功能的药物诺考达唑（Nocodazole，Noco）和细胞松驰素D（Cytochalasin D，Cyto D）处理MDBK细胞，通过RT-qPCR、TCID₅₀和Western blot评估病毒载量变化；结合激光共聚焦显微技术观察病毒感染24 h后，细胞骨架结构形态的变化及其与病毒的亚细胞定位关系；利用Co-IP筛选与微管蛋白的相互作用的病毒蛋白；通过RT-qPCR和Western blot检测微管蛋白的表达变化；通过RT-qPCR检测dynein、kinesin和末端结合蛋白（end-binding proteins，EBs）mRNA水平的变化。结果发现，Noco和Cyto D分别处理MDBK细胞，药物处理组在入胞和复制阶段病毒含量均显著下降；激光共聚焦检测发现，病毒及其包涵体结构与MTs存在共定位，而与微丝不共定位；通过Co-IP试验，证实CPIV3的N蛋白和P蛋白与微管蛋白存在相互作用；病毒感染过程中，微管蛋白的转录和表达水平，dynein、kinesin、EB2和EB3的转录水平均显著下调（P<0.01）。上述结果表明，CPIV3感染MDBK细胞的过程中，MTs作为细胞骨架的重要组成部分，发挥了重要作用。CPIV3通过促进MTs的聚集，调控MTs自身及其相关蛋白的表达，实现了病毒的高效复制。这为MTs骨架系统在CPIV3感染中的功能研究提供新认识，为抗病毒研究提供了新的视角。

旨在比较金银花与连翘两种不同部位复配提取物的化学成分和含量，以及其对脂多糖诱导鸡急性肺损伤的缓解作用。基于UPLC-MS/MS比较金银花-连翘以及金银花叶-连翘叶提取物中活性成分的种类和含量。将120只白羽肉鸡随机分为空白对照组、模型组（LPS组）、金银花-连翘提取物组（LF，170 mg·kg^-1）、金银花叶-连翘叶提取物组（LFL，170 mg·kg^-1），每组6个重复，每个重复5只鸡。LF组、LFL组分别灌胃LF和LFL，其他组灌胃等体积生理盐水，连续给药7 d后模型组、LF组和LFL组分别由气管滴注1.5 mg·kg^-1 LPS，空白对照组给予等量生理盐水，24 h后收集血清及肺组织检测其炎症相关指标，并观察肺组织形态。结果表明，金银花-连翘提取物和金银花叶-连翘叶提取物中活性成分种类基本相同，但含量不同，其中黄酮类物质在LF和LFL中占比分别为9.989%和5.627%，苯丙素类占比53.663%和49.37%。LF和LFL均能显著抑制LPS导致的TNF-α的升高（P<0.05）；其中LF对IL-1β、IL-6的抑制效果更为显著（P<0.05）。LF和LFL均能增强MPO和GSH-Px的活性（P<0.05），降低MDA含量（P<0.05）；其中LF和LFL均可增强SOD和CAT的活性和T-AOC的含量，但LF效果更为显著（P<0.05）。综上，金银花与连翘的不同部位复配提取物的化学成分相似，但含量不同导致金银花与连翘的不同部位复配提取物对LPS导致的肉鸡急性肺损伤的抗炎和抗氧化活性存在差异，且金银花-连翘提取物的作用优于金银花叶-连翘叶提取物。本研究为金银花叶-连翘叶提取物的开发及金银花-连翘的药用部位的拓展及临床应用提供了试验依据。

本研究旨在探究常山口服液（Radix Dichroae oral liquid，RDOL）对球虫感染鸡肠道菌群的影响，从微观层面揭示其对鸡球虫病的调节机制。选取1日龄非免疫海兰褐AA肉仔鸡210只，随机分为7组，每组3个重复，每个重复10只，分别为模型对照组（M组）、健康对照组（J组）、常山口服液低、中、高剂量组（D、Z、G组），百球清组（toltrazuril，B组）、鸡球虫散组（chicken coccidiosis powder，CCP，S组）。除J组外，其余各组每只鸡经口感染6×10⁴个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊（攻虫前2个月健康雏鸡复壮，保证虫株感染活力），J组与M组饲喂基础饲料，自由饮水，其余各组于攻虫24 h后开始给药至试验结束，试验期7 d。试验结束后，采集盲肠、收集肠道内容物进行16S rRNA测序分析。结果显示：1）从OTU水平看，球虫感染后M组OTU数目显著低于J组（P<0.05）；药物组一定程度上改善了感染鸡肠道菌群种类和结构，以Z组OTU数目变化最显著（P<0.05）。2）根据α多样性分析的Chao1、ACE、Shannon和Simpson指数显示，5个药物组均能提升感染鸡肠道菌群丰富度和多样性，G组在增强菌群丰富度方面效果最显著（P<0.05）。3）门水平上，球虫感染未改变鸡肠道菌群的菌门种类，但导致菌群相对丰度发生改变，其中拟杆菌门（Bacteroidetes）、变形菌门（Proteobacteria）丰度变化较为明显（P<0.05）。属水平上，拟杆菌属（Bacteroides）、另枝菌属（Alistipes）、粪杆菌属（Faecalibacterium）、埃希菌-志贺菌属（Escherichia-Shigella）的差异具有统计学意义（P<0.05）。其中，G组显著提升了拟杆菌属（Bacteroides）、另枝菌属（Alistipes）、副拟杆菌属（Parabacteroides）、粪杆菌属（Faecalibacterium）的相对丰度（P<0.05），B组拟杆菌属（Bacteroides）占比显著高于其他药物干扰组（P<0.05）。4）LEfSe分析显示，常山口服液组检测出普雷沃菌科（f_Prevotellaceae）、坦纳菌科（f_Tannerellacea）和乳杆菌科（f_Lactobacillaceae），表明常山口服液不仅改变了菌群的组成，还增强免疫调节和代谢修复能力。综上，常山口服液能够通过提升菌群多样性、重塑菌群结构以及富集有益功能菌，修复球虫感染造成的肠道菌群紊乱，且中、高剂量效果更为突出。

本研究旨在从铁死亡途径探究过表达热休克因子结合蛋白1（heat shock protein beta-1，HSPB1）对奶牛脂肪源巨噬细胞（adipose tissue-derived macrophages，ATMs）氧化应激和内质网应激的影响。将奶牛ATMs分为对照组（EV组）、erastin处理组（erastin组）、HSPB1过表达腺病毒处理组（ad-HSPB1组）、HSPB1过表达腺病毒+erastin处理组（ad-HSPB1+erastin组），每组3个重复。采用Western blot检测铁死亡相关蛋白溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、长链酰基辅酶A合成酶4（ACSL4）、转铁蛋白（TF），氧化应激相关蛋白核因子红细胞2相关因子2（Nrf2）、过氧化氢酶（CAT）、醌氧化还原酶1（NQO1）、血红素加氧酶-1（HO-1）和内质网应激相关蛋白蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶（p-PERK）、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、激活转录因子6（ATF6）的相对表达水平；比色法检测Fe²⁺、总Fe和氧化应激状态核心指标丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）的含量；流式细胞术检测细胞CD14阳性率，荧光探针检测活性氧（ROS）水平，透射电镜观察内质网形态。结果发现：50 MOI HSPB1过表达腺病毒处理组细胞中HSPB1蛋白水平显著高于EV组（P<0.05）。与erastin组相比，ad-HSPB1组的抗铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4蛋白水平显著升高（P<0.01），促铁死亡相关蛋白ACSL4、TF蛋白水平显著降低（P<0.01），Fe²⁺含量和总Fe含量显著降低（P<0.01）；ad-HSPB1+erastin组中氧化应激相关蛋白Nrf2、CAT、NQO1、HO-1的蛋白水平均显著升高（P<0.01）；ad-HSPB1组和ad-HSPB1+erastin组中内质网应激相关蛋白ATF6、p-PERK/PERK、GRP78蛋白水平显著降低（P<0.01），MDA含量和ROS水平显著降低（P<0.01），GSH含量显著升高（P<0.01）。与erastin组相比，ad-HSPB1+erastin组的内质网扩张程度减轻，恢复折叠结构。综上所述，HSPB1过表达可以有效缓解ATMs铁死亡及其诱导的氧化应激和内质网应激。

旨在探讨藏丹参-金银花-栀子-甘草复合物（Sal）和荜茇-胡椒-山柰-金银花-栀子复合物（Lon）对藏猪源粪肠球菌的体外抑菌作用及其免疫保护机制。采用微量肉汤稀释法测定两种藏药复合物对粪肠球菌的最小抑菌浓度（MIC），并系统评估其对细菌生长动力学、生物被膜形成能力及核酸泄漏的影响。建立粪肠球菌感染小鼠模型，通过灌胃给予藏药复合物干预，采用苏木精-伊红（HE）染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot技术检测小鼠心脏组织中炎症因子（NF-κB、IL-6R、TNF-α、IL-1β、CRP）的mRNA及蛋白表达水平。同时开展小鼠生物安全性评价，以验证藏药复合物的毒性反应。Sal组和Lon组的MIC值分别为31.25和50 mg·mL^-1，两者均显著抑制粪肠球菌的生长及生物被膜形成，并诱导细菌核酸泄漏。结果显示，与感染对照组相比，藏药复合物干预显著下调感染小鼠心脏组织中炎症因子mRNA及蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01），其中Lon组的抗炎作用更为显著。生物安全性试验表明，藏药复合物在试验浓度下未引起明显毒性反应。藏药复合物可通过抑制粪肠球菌生长、破坏生物被膜形成及调控NF-κB通路相关炎症因子表达，有效缓解细菌感染诱导的炎症反应，且具有良好生物安全性，为高原动物耐药性细菌感染的防控提供了潜在候选药物和试验依据。

为明确河南省驻马店某鸡场疫苗免疫鸡群中疑似马立克病（Marek’s disease，MD）的发病原因，本研究于2023年采集病鸡样品进行病原学分析。剖检可见病鸡肝脏出现明显白色肿瘤，脾脏充血肿大。采用PCR方法扩增马立克病病毒（MDV）的meq、pp38和U_S 3基因，结果显示，扩增的基因片段大小均与预期一致，表明样品中存在MDV感染。进一步对meq基因进行克隆、测序及测序比对，利用MEGA11.0软件构建系统进化树。结果显示：与参考株meq基因相比，扩增到的meq基因与特超强毒株（vv+）648A-P101的相似性最低（98.6%），而与多个超强毒株（vv）（GX0101、CC-1409、JL1404、WC1203、LMS）及强毒株（v）HNXZ103的相似性最高（99.7%），且在系统进化树中与强毒株HNXZ103聚为同一分支。Jalview软件分析显示，该meq基因存在7个氨基酸突变位点，其中Q⁹³R为该meq序列特有，其余位点与强毒株HNXZ103完全一致。综上，本研究通过分子检测确认了该鸡群感染MDV，并揭示了其meq基因的变异特征，为河南省MD的流行病学监测、遗传进化分析及防控策略制定提供了重要的参考依据。

本研究旨在分离并鉴定黑龙江省哈尔滨市地区仔猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus，TGEV）的流行毒株，并进一步分析其基因组遗传变异特征与致病性。选取经检测为TGEV阳性的腹泻仔猪小肠组织作为样本，经处理后接种于猪睾丸（testicular，ST）细胞进行病毒分离培养；将细胞培养物进行核酸检测、形态学观察以及间接免疫荧光鉴定；利用RT-PCR扩增并测定该毒株S基因全序列；进一步开展致病性试验。结果表明，接毒后细胞出现脱落、圆缩及折光性增强等典型病变；核酸检测结果显示，TGEV呈阳性，且无常见猪腹泻外源病毒污染；透射电镜下观察到冠状病毒典型形态；间接免疫荧光观察到细胞出现特异性绿色荧光；遗传进化分析表明，该分离株属于Purdue基因型。表明成功分离到1株可在ST细胞上稳定传代的TGEV毒株，命名为TGEV-SD。接种该毒株的仔猪可在8~28 h出现水样腹泻和呕吐等临床症状；剖检可见肠壁变薄，肠内容物呈黏稠样或水样。组织病理学观察发现，感染仔猪十二指肠与结肠固有层结构疏松，伴有炎性细胞浸润，十二指肠、空肠及回肠黏膜下层间质明显增宽，组织结构疏散。荧光定量RT-PCR检测感染仔猪排毒量和肠道病毒载量，结果显示，病毒拷贝数在感染后96 h达到峰值，结肠病毒载量最高。综上，本研究成功分离到1株Purdue型TGEV流行毒株，并证实其对仔猪具有较强致病性，研究结果可为该地区TGEV流行情况的监控与防控提供参考依据。