组氨酸标签标记的口蹄疫重组病毒的制备及鉴定

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.06.014

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (6): 960-966.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.06.014

组氨酸标签标记的口蹄疫重组病毒的制备及鉴定

杨波^1，2，杨帆²，王松豪²，张岩²，岳城 ^1*，郑海学^2*，殷宏^2*

（1.新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐 830052；2.中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，国家口蹄疫参考实验室，兰州 730046）

收稿日期:2013-12-19 出版日期:2014-06-23 发布日期:2014-06-23
通讯作者: 郑海学（1979-），副研究员，Tel：0931-8342086，E-mail:haixuezheng@163.com；岳城(1958-)，教授， Tel：0991-8762752，E-mail：yuechengxnd@yahoo.com.cn；殷宏，研究员，E-mail:yinhong@caas.net.cn
作者简介:杨波（1989-），男，汉族，甘肃天水人，硕士研究生，主要从事RNA病毒反向疫苗的研究， E-mail：yb4271@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31302118）；甘肃省科技重大专项计划项目（1302NKDA027）；国家863计划项目(2011AA10A211-1)；中国农业产业体系(CARS-39)

Generation and Identification of a Histidine Tagged Recombinant Foot and Mouth Disease Virus

YANG Bo^1，2，YANG Fan²，WANG Song-hao²，ZHANG Yan²，YUE Cheng ^1*， ZHENG Hai-xue^2*，YIN Hong^2*

(1.College of Veterinary Medicine，Xinjiang Agricultural University， Urumqi 830052， China; 2.State Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology， National Foot-and-Mouth Disease Reference Laboratory，Lanzhou Veterinary Research Institute， Chinese Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou 730046， China)

Received:2013-12-19 Online:2014-06-23 Published:2014-06-23

摘要/Abstract

摘要：

为了鉴定口蹄疫病毒（FMDV）插入位点并获得标记的重组病毒，本研究利用口蹄疫病毒反向遗传操作技术，在RGD基序后第9位和第10位氨基酸处（+9）引入组氨酸（His）标签，获得了含有His标签的FMDV全长cDNA克隆（命名为prAsia1-9His）。将prAsia1-9His质粒转染BHK-21细胞后，能够出现典型的细胞病变，对收获的病毒分别用RT-PCR、间接免疫荧光进行鉴定，结果证实，成功拯救了含His标签的重组病毒（命名为rAsia1-9His），该重组毒株能够稳定表达His标签。最后，比较测定了其对BHK-21细胞和乳鼠的致病性，结果表明，该重组毒株与亲本毒株（rAsia1）具有相似的生物学特性。含有标签标记的口蹄疫病毒的成功拯救，为深入研究口蹄疫病毒的致病机制以及分子标记疫苗奠定了基础。

Abstract:

To identify a feasible insertion site in the foot-and-mouth disease virus (FMDV) and obtain a tagged recombinant virus，in this study，we have used reverse genetics to introduce a histidine (His)tag into the ninth site in the downstream of RGD motif in FMDV and obtain His tagged full-length-cDNA clone， named prAsia1-9His.We transfected the prAsia1-9His into BHK-21 cells and typical cytopathic effect (CPE) were found in the transfacted BHK-21 cells.Then，RT-PCR，indirect immunofluorescence assay and sequence analysis were performed，the results showed that the recombinant virus named as rAsia1-9His was successfully rescued and the His tag was stably maintained.Finally，we compared rAsia1-9His with the parental virus (named rAsia1) for pathogenicity to BHK-21 cells and suckling mouse，the results showed that they had similarity in the biological characteristics.The successful rescue of tagged FMDV lays a foundation for further study of molecular pathogenesis and marker vaccine of FMDV.

中图分类号:

S852.659.

杨波，杨帆，王松豪，张岩，岳城,郑海学，殷宏. 组氨酸标签标记的口蹄疫重组病毒的制备及鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(6): 960-966.

YANG Bo，YANG Fan，WANG Song-hao，ZHANG Yan，YUE Cheng,ZHENG Hai-xue，YIN Hong. Generation and Identification of a Histidine Tagged Recombinant Foot and Mouth Disease Virus[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(6): 960-966.

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