猫杯状病毒单克隆抗体的制备

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2024.01.038

畜牧兽医学报 ›› 2024, Vol. 55 ›› Issue (1): 401-405.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2024.01.038

猫杯状病毒单克隆抗体的制备

王莹¹, 李佳康², 曾悦¹, 史开拓¹, 韦丽婷¹, 彭佳佳¹, 李秋燕¹, 曹龙龙^2*, 周登元^1,2*

1. 武汉科前生物股份有限公司, 武汉 430000;
2. 华中农业大学动物科学技术学院动物医学院, 武汉 430070

收稿日期:2023-03-28 出版日期:2024-01-23 发布日期:2024-01-24
通讯作者: 周登元,主要从事宠物新发传染病疫苗、宠物治疗性抗体研发等研究,E-mail:zhoudy6@webmail.hzau.edu.cn;曹龙龙,主要从事猫病毒性传染病流行病学调查、新发宠物传染病疫苗研发等研究,E-mail:caolong5955@163.com
作者简介:王莹(1995-),女,云南昆明人,硕士,主要从事宠物传染病疫苗及治疗性抗体研发等研究,E-mail:seeecho@163.com
基金资助:
武汉市"3551创新人才计划"

Development of Monoclonal Antibodies against Feline Calicivirus

WANG Ying¹, LI Jiakang², ZENG Yue¹, SHI Kaituo¹, WEI Liting¹, PENG Jiajia¹, LI Qiuyan¹, CAO Longlong^2*, ZHOU Dengyuan^1,2*

1. Wuhan Keqian Biology Corporation Limited, Wuhan 430000, China;
2. College of Animal Science & Technology/College of Veterinary Medicine, Huazhong Agricultural University, Wuhan 430070, China

Received:2023-03-28 Online:2024-01-23 Published:2024-01-24

摘要/Abstract

摘要： 制备猫杯状病毒（feline calicivirus， FCV）的特异性单克隆抗体，为FCV的免疫学诊断方法提供材料。本研究将经蔗糖梯度离心纯化的FCV灭活后免疫BALB/c小鼠，通过间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞，并对其进行一系列鉴定。结果成功获得1株能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株3B11。MAb 3B11抗体类型鉴定其重链属于IgG₁、轻链为κ链。MAb 3B11能与FCV-SH192发生特异性反应；小鼠腹水MAb 3B11对5株FCV毒株具有较高的ELISA效价；与5株FCV毒株具有间接免疫荧光（IFA）和蛋白免疫印迹（Western blot， WB）结合特性。本研究制备的MAb 3B11对FCV具有良好的特异性、免疫反应性及广谱识别性，为FCV诊断方法的优化、流行毒株筛选以及基础研究提供生物原料。

关键词: 猫杯状病毒, 单克隆抗体, 特异性, 反应性

Abstract: This study aimed to develop specific monoclonal antibodies for feline calicivirus (FCV) and provide materials for immunological diagnostic methods of FCV. In this study, BALB/c mice were immunized with FCV purified by sucrose gradient centrifugation and inactivated. The positive hybridoma cells were screened by an indirect ELISA method and characterized by a series of methods. One hybridoma 3B11 stably secreting monoclonal antibodies was successfully obtained. The antibody type of MAb 3B11 was identified as IgG1 for the heavy chain and κ chain for the light chain. MAb 3B11 specifically reacted with FCV-SH192. The mouse ascites MAb 3B11 showed high ELISA titers against five FCV strains; it had IFA and Western blot binding characteristics with five FCV strains. The MAb 3B11 developed in this study has good specificity, immunoreactivity and broad-spectrum recognition of FCV, which provides biological raw materials for the optimization of FCV diagnostic methods, screening of epidemic strains and basic research.

Key words: feline calicivirus, monoclonal antibodies, specificity, reactivity

中图分类号:

S852.659.6

王莹, 李佳康, 曾悦, 史开拓, 韦丽婷, 彭佳佳, 李秋燕, 曹龙龙, 周登元. 猫杯状病毒单克隆抗体的制备[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 401-405.

WANG Ying, LI Jiakang, ZENG Yue, SHI Kaituo, WEI Liting, PENG Jiajia, LI Qiuyan, CAO Longlong, ZHOU Dengyuan. Development of Monoclonal Antibodies against Feline Calicivirus[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2024, 55(1): 401-405.

参考文献 11

[1]	王一鸣. 5株猫杯状病毒致病性及免疫原性的比较研究[D]. 长春:吉林农业大学, 2016.WANG Y M. Comparison of pathogenicity and immunogenicity of five feline calicivirus isolates[D]. Changchun:Jilin Agricultural University, 2016. (in Chinese)
[2]	李响. 吉林省宠物猫传染性鼻结膜炎病原学调查[D]. 长春:吉林农业大学, 2016.LI X. Etiology investigation of pet cat nasal conjunctives in Jilin province[D]. Changchun:Jilin Agricultural University, 2016. (in Chinese)
[3]	刘健, 白艺兰, 李鑫, 等. 猫杯状病毒分离株VP1基因序列与致病性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(10):3530-3539.LIU J, BAI Y L, LI X, et al. VP1 sequence and pathogenicity analysis of feline calicivirus isolates[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2022, 53(10):3530-3539. (in Chinese)
[4]	孙雅鑫, 吴斌. 猫杯状病毒及疾病诊疗研究进展[J]. 动物医学进展, 2015, 36(11):97-101.SUN Y X, WU B. Progress on feline calicivirus and dignosis and treatment of its associated diseases[J]. Progress in Veterinary Medicine, 2015, 36(11):97-101. (in Chinese)
[5]	李爽. 猫杯状病毒的纯化与检测抗FCV抗体的间接ELISA方法的建立[D]. 太谷:山西农业大学, 2018.LI S. Purification of Feline calicivirus (FCV) and the establishment of an indirect ELISA for the detection of anti-FCV antibodies[D]. Taigu:Shanxi Agricultural University, 2018. (in Chinese)
[6]	霍华德G C, 凯瑟M R. 抗体制备与使用实验指南[M]. 张建民, 章静波, 陈实平, 等译. 北京:科学出版社, 2020.HOWARD G C, KASER M R. Making and using antibodies:a practical handbook[M]. ZHANG J M, ZHANG J B, CHEN S P, et al, trans. Beijing:Science Press, 2020. (in Chinese)
[7]	程晨曦. 猫杯状病毒单克隆抗体的制备及其抗原表位鉴定[D]. 北京:中国农业科学院, 2018.CHENG C X. Preparation of monoclonal antibodies against feline calicivirus and epitope mapping[D]. Beijing:Chinese Academy of Agricultural Sciences, 2018. (in Chinese)
[8]	赵艳丽, 董宏伟, 陈小庆, 等. 猫传染性鼻-结膜炎疫苗研究进展[J]. 中国兽医杂志, 2014, 50(9):56-58.ZHAO Y L, DONG H W, CHEN X Q, et al. Research progress on cat infectious rhinoconjunctivitis vaccine[J]. Chinese Journal of Veterinary Medicine, 2014, 50(9):56-58. (in Chinese)
[9]	刘迪, 郑亚婷, 许鑫燕, 等. 检测猫杯状病毒RT-qPCR方法的优化与应用[J]. 中国兽医学报, 2022, 42(1):53-60.LIU D, ZHENG Y T, XU X Y, et al. Optimization and application of RT-qPCR assay for detection of feline calicivirus[J]. Chinese Journal of Veterinary Science, 2022, 42(1):53-60. (in Chinese)
[10]	CHEN B, ZHANG H Y, WANG H H, et al. Development and application of a dual ERA method for the detection of Feline Calicivirus and Feline Herpesvirus Type I[J]. Virol J, 2023, 20(1):62.
[11]	XIAO X Y, HAO X Q, CHEN B, et al. Two multiplex PCR methods for detecting several pathogens associated with feline respiratory and intestinal tracts[J]. Vet Sci, 2023, 10(1):14.

[1]	刘桃雪, 苏冰倩, 齐艳丽, 郭江涛, 刘忠虎, 褚贝贝, 王江, 曾磊. 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3415-3423.
[2]	袁丽, 孙杨杨, 张路捷, 张杰, 孙海凤, 白娟, 姜平. 猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白单克隆抗体制备及抗原表位鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3424-3434.
[3]	曹丽艳, 孔祥雨, 李想通, 索学鹏, 段月月, 袁聪, 施磊, 张宇, 马国祥, 郑海学, 王琦. 猪急性腹泻综合征冠状病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其抗体序列的分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(6): 2487-2497.
[4]	刘青, 吴少鹏, 石彬, 邵红霞, 钱琨, 叶建强, 秦爱建. 鸡CTLA-4蛋白在昆虫细胞中的表达及其单克隆抗体的制备[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(6): 2596-2604.
[5]	翟云逸, 袁野, 李俊玫, 田路路, 刁梓洋, 李彬, 陈家露, 周栋, 靳亚平, 王爱华. 布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(5): 2083-2091.
[6]	许鑫燕, 郑亚婷, 刘迪, 马波, 刘家森, 曲连东. 一株猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(4): 1713-1720.
[7]	黄婧洁, 李苗, 陈莹娴, 钟雅兰, 张婷婷, 姜廷超男, 李建成. 基于免疫磁珠净化间接竞争酶联免疫吸附试验检测氟喹诺酮类药物[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(2): 766-778.
[8]	李林燕, 滕蔓, 刘金玲, 郑鹿平, 柴书军, 丁轲, 余祖华, 罗俊. 马立克病病毒单克隆抗体库构建及gB蛋白特异性单抗的筛选与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4712-4723.
[9]	齐艳丽, 刘桃雪, 于海深, 张超, 鲁维飞, 王江, 褚贝贝, 张改平. 非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(1): 281-292.
[10]	陈孝军, 马俊, 陈熊男, 梁祎凡, 高琦, 黄钊, 许润达, 郑佳琛, 郑泽中, 张桂红, 王衡, 龚浪. 1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(7): 2239-2251.
[11]	曾金红, 徐青元, 沙玮萍, 吴爽, 李媛, 辛九庆, 王秀梅. 抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(7): 2290-2299.
[12]	江玲丽, 高有领, 胡兴娟, 章先, 杨云凯, 魏华, 方维焕. 检测产单核细胞李氏杆菌溶血素的胶体金试纸条制备及初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(6): 1841-1848.
[13]	张路捷, 高雁怩, 夏婷婷, 白娟, 姜平. 非洲猪瘟病毒p72蛋白阻断ELISA检测方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(5): 1509-1516.
[14]	徐玲玉, 曹琛福, 李中圣, 陈俊宏, 柳腾飞, 王新凯, 贾伟新. 非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(3): 813-821.
[15]	蔡为民, 李文静, 王乐乐, 苏丁泽阳, 朱玉, 刘丹丹, 许金俊, 陶建平. 毒害艾美耳球虫配子体抗原EnGAM22单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(3): 875-882.

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