狂犬病病毒单质粒拯救系统的建立及应用

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.014

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (11): 2020-2024.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.014

狂犬病病毒单质粒拯救系统的建立及应用

孙玉章^1，5，何彪²，许运斌³，丛彦龙^4*，Karl-Klaus Conzelmann^5*

(1.中国动物卫生与流行病学中心，青岛 266032；2.军事医学科学院军事兽医研究所，长春 130122；3.浙江大学动物科学学院，杭州 310020；4.吉林大学动物医学学院，长春 130062；5.慕尼黑大学基因中心，慕尼黑 81377）

收稿日期:2015-01-25 出版日期:2015-11-23 发布日期:2015-11-23
通讯作者: 丛彦龙，E-mail：congyanlong1977@126.com；karl-klaus Conzelmann
作者简介:孙玉章(1985-)，男，山东寿光人，博士，主要从事分子病毒学研究，Tel：0532-87694317，E-mail：yuzhang.sun1985@hotmail.com
基金资助:
青岛市优秀人才引进计划（Q201402025）；国家留学基金委资助项目（CSC-LMU2011）；德国自然科学基金（DFG SFB870）

Generation of a Single Infectious RABV cDNA Clone by Inserting IRES Sequences

SUN Yu-zhang^1，5，HE Biao²，XU Yun-bin³，CONG Yan-long^4* ，CONZELMANN Karl-Klaus^5*

(1.China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao 266032，China；2.Military Veterinary Institute，Academy of Military Medicals Sciences，Changchun 130122，China；3.College of Animal Sciences，Zhejiang University，Hangzhou 310020，China；4.College of Veterinary Medicine，Jilin University，Changchun 130062，China；5.Gene Center，University of Munich，Munich 81377，Germany)

Received:2015-01-25 Online:2015-11-23 Published:2015-11-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在建立一种针对狂犬病病毒SAD L16株单质粒拯救的反向遗传操作系统。根据全长cDNA感染性克隆pSAD-L16 N、P和L基因上游序列的不同，分别设计多对引物将EMCV IRES序列、PV IRES序列和TaV 2A序列分别克隆入pSAD-L16载体的相应位置中，构建成5个重组狂犬病病毒全长cDNA克隆。在无需辅助质粒的情况下直接转染BSR T7/5细胞拯救病毒，并对拯救病毒进行生物学特性的鉴定和分析。结果表明，只有pSAD-NeNePeL和pSAD-NeNtPeL能够成功拯救出重组狂犬病病毒，获救病毒均高度致弱且增殖缓慢。获救的2株重组狂犬病病毒具有不同的遗传稳定性，表现出与野生型亲本毒株较大的差异。本研究首次建立起一种针对狂犬病病毒的单质粒拯救系统，为深入研究狂犬病病毒基因组结构与功能、分子致病机制以及狂犬病病毒与宿主相互作用等提供了一个基础的技术平台。

Abstract:

In order to assess the possibility of developing one-plasmid rescue systems of rabies virus(RABV)，this study was undertaken to generate a single-infectious cDNA clone by inserting Picornaviral IRES elements.Five full-length cDNA clones were constructed by inserting encephalomyocarditis virus(EMCV) IRES sequences，PV IRES sequences or TaV 2A-like sequences to upstream of the respective ORFs.BSR T7/5 cells in 6-well plates were directly transfected with 10 μg of either full-length clones or co-transfected with pTiT-N，pTiT-P or pTiT-L using CaPO₄as the control.Two recombinant RABVs were successfully rescued from these constructs，yet the rescue of SAD-NeNePeL was significantly more efficient than the rescue of SAD-NeNtPeL.Passaged SAD-NeNtPeL was genetic stable whereas passaged SAD-NeNePeL was recombinant in the RNA level.Both viruses were strongly attenuated，only growing to titers reduced about 2-log steps in comparison to the wild-type virus，SAD L16 strain.The rescue of RABVs from these single infectious cDNA clones provide a powerful tool to investigate the molecular biology，neurotropism，and pathogenicity of RABV.

中图分类号:

S852.659.5

孙玉章，何彪，许运斌，丛彦龙，Karl-Klaus Conzelmann. 狂犬病病毒单质粒拯救系统的建立及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(11): 2020-2024.

SUN Yu-zhang，HE Biao，XU Yun-bin，CONG Yan-long，CONZELMANN Karl-Klaus. Generation of a Single Infectious RABV cDNA Clone by Inserting IRES Sequences[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(11): 2020-2024.

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.xmsyxb.com/CN/10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.014

https://www.xmsyxb.com/CN/Y2015/V46/I11/2020

参考文献

［1］KNOBEL D L，CLEAVELAND S，COLEMAN P G，et al.Re-evaluating the burden of rabies in Africa and Asia［J］.Bull World Health Organ，2005，83(5)：360-368.
［2］TAKAYAMA-ITO M，INOUE K，SHOJI Y，et al.A highly attenuated rabies virus HEP-Flury strain reverts to virulent by single amino acid substitution to arginine at position 333 in glycoprotein［J］.Virus Res，2006，119(2)：208-215.
［3］DIETZGEN R D，KUZMIN I V.Rhabdoviruses：molecular taxonomy，evolution，genomics，ecology，host-vector interactions，cytopathology and control［M］.London：Caister Academic Press，2012：37-57.
［4］SHOJI Y，INOUE S，NAKAMICHI K，et al.Generation and characterization of P gene-deficient rabies virus［J］.Virology，2004，318(1)：295-305.
［5］SCHNELL M J，MEBATSION T，CONZELMANN K K.Infectious rabies viruses from cloned cDNA［J］.EMBO J，1994，13(18)：4195-4203.
［6］GHANEM A，KERN A，CONZELMANN K K.Significantly improved rescue of rabies virus from cDNA plasmids［J］.Eur J Cell Biol，2012，91(1)：10-16.
［7］MARSCHALEK A，FINKE S，SCHWEMMLE M，et al.Attenuation of rabies virus replication and virulence by picornavirus internal ribosome entry site elements［J］.J Virol，2009，83(4)：1911-1919.
［8］PIJLMAN G P，ROODE E C，FAN X，et al.Stabilized baculovirus vector expressing a heterologous gene and GP64 from a single bicistronic transcript［J］.J Biotechnol，2006，123(1)：13-21.
［9］WAGSTAFF M J，LILLEY C E，SMITH J，et al.Gene transfer using a disabled herpes virus vector containing the EMCV IRES allows multiple gene expression in vitro and in vivo［J］.Gene Ther， 1998，5(11)：1566-1570.
［10］ZHANG X，KONG W，ASHRAF S，et al.A one-plasmid system to generate influenza virus in cultured chicken cells for potential use in influenza vaccine［J］.J Virol，2009，83(18)：9296-9303.

[1]	孟令宅, 陈春丽, 于蒙蒙, 王占新, 王素艳, 刘鹏, 何塔娜, 郭茹, 陈运通, 刘长军, 祁小乐, 吴志强, 高玉龙. B亚型禽偏肺病毒对黄羽肉鸡致病性分析及其灭活疫苗免疫效果评价[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5154-5161.
[2]	蒋盛强, 胡靖, 陈红英. H1N1亚型流感病毒感染A549细胞的环状RNA表达分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4724-4734.
[3]	张傲, 谭斌, 刘可欣, 刘佳利, 张淑琴. 一株H1N1亚型猪流感病毒全基因组特征分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4866-4871.
[4]	何辰香, 高闪电, 田占成, 独军政, 王锦明, 关贵全, 殷宏. 基于G_NS蛋白的牛流行热病毒感染与免疫鉴别诊断ELISA方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(10): 4320-4326.
[5]	常益铭, 汤承, 岳华. 牦牛源牛呼吸道合胞体病毒的分子流行病学调查[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(5): 2030-2041.
[6]	方源, 侯巧弟, 项超辉, 赵红奕, 齐雪峰. IFITM3对小反刍兽疫病毒在山羊子宫内膜上皮细胞中增殖的调控效应[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(5): 2200-2207.
[7]	李舜, 李桂珍, 原耀贤, 李康健, 马春全, 李守军, 黄良宗, 马骏. PA-X基因的长度变化对H3N2犬流感病毒复制能力和致病性的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(1): 272-280.
[8]	崔明仙, 王星博, 黄彦铭, 卞希一, 冯梦珂, 颜焰, 董伟仁, 周继勇. 3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(11): 4116-4122.
[9]	于蒙蒙, 包媛玲, 王素艳, 辛子琪, 刘鹏, 冯笑艳, 孟令宅, 郭茹, 张艳萍, 刘长军, 祁小乐, 李俊平, 王笑梅, 高玉龙. B亚型禽偏肺病毒的分离鉴定及致病性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(10): 3540-3549.
[10]	周勇, 李知新, 鲁宏伟, 孙燕, 李甜, 杜凡姝, 蒲娟. 我国H5和H7N9亚型高致病性禽流感的监测及疫情暴发分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(9): 3093-3106.
[11]	潘春容, 邓瑞雪, 胡林杰, 朱学亮, 孙跃峰, 王桂荣, 蒙学莲. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂对小反刍兽疫病毒复制的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(7): 2307-2316.
[12]	陈子轩, 张楠, 胡群, 全柯吉, 秦涛, 陈素娟, 彭大新, 刘秀梵. 我国H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白145和153位抗原位点变异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(4): 1165-1172.
[13]	段志强, 谢玲玲, 陈佳琪, 唐宏, 王燕碧, 赵采芹, 赵佳福. 新城疫病毒M蛋白与宿主蛋白相互作用的研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2022, 53(1): 32-42.
[14]	严雅瑶, 顾敏, 刘秀梵. HA蛋白位点变异影响H7N9亚型流感病毒特性的研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(8): 2093-2106.
[15]	蒋梅, 陈武, 翟俊琼, 卜婉迪, 谢逸伦, 刘灿彬, 单芬, 罗满林. 小熊猫源犬瘟热病毒株H、F基因的克隆及序列分析[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(6): 1670-1676.

狂犬病病毒单质粒拯救系统的建立及应用

Generation of a Single Infectious RABV cDNA Clone by Inserting IRES Sequences

RichHTML

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价