1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2021.06.030

畜牧兽医学报 ›› 2021, Vol. 52 ›› Issue (6): 1753-1759.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2021.06.030

1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立

梅力¹, 王英超¹, 程汝佳¹, 于国际¹, 范学政², 高晓龙¹, 高敏¹, 秦玉明², 李筱英², 李巧玲², 朱良全^2*, 冯小宇^1*

1. 北京市动物疫病预防控制中心, 北京 102629;
2. 中国兽医药品监察所, 北京 100081

收稿日期:2020-10-30 出版日期:2021-06-23 发布日期:2021-06-22
通讯作者: 朱良全,主要从事动物疫病相关兽药研发,E-mail:1367391894@qq.com;冯小宇,主要从事动物疫病防控技术研究,E-mail:hairen_2000@sina.com
作者简介:梅力(1985-),女,黑龙江齐齐哈尔人,高级兽医师,硕士,主要从事动物传染病诊断技术研发,E-mail:meili0816@126.com;王英超(1994-),女,山东济南人,助理兽医师,硕士,主要从事动物传染病诊断技术研发,E-mail:wangyingchao1108@163.com。梅力与王英超为同等贡献作者
基金资助:
新疆生产建设兵团重大科技项目（2017AA003）；奶牛产业技术体系北京市创新团队项目（BAIC06-2021）

A Droplet Digital PCR Method for Detection of Brucella

MEI Li¹, WANG Yingchao¹, CHENG Rujia¹, YU Guoji¹, FAN Xuezheng², GAO Xiaolong¹, GAO Min¹, QIN Yuming², LI Xiaoying², LI Qiaoling², ZHU Liangquan^2*, FENG Xiaoyu^1*

1. Beijing Animal Disease Control Center, Beijing 102629, China;
2. China Institute of Veterinary Drug Control, Beijing 100081, China

Received:2020-10-30 Online:2021-06-23 Published:2021-06-22

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在构建1种布鲁氏菌（Brucella）微滴式数字PCR方法（droplet digital PCR，ddPCR）。以布鲁氏菌BCSP31基因为靶基因，选取保守区域设计引物和探针，构建了布鲁氏菌微滴式数字PCR方法。然后优化了ddPCR反应中的引物、探针浓度及退火温度，并进行方法的灵敏度、特异性和重复性试验。结果表明，ddPCR的最佳引物和探针浓度分别为900 nmol·L^-1和250 nmol·L^-1，最佳的退火温度为58℃。ddPCR的线性良好，最低检测下限为1.12 copies·μL^-1，与大肠杆菌O：157菌株等其他4种细菌无交叉反应，而且批内重复性和批间重复性都较好。综上表明，本研究建立的ddPCR方法灵敏度高、特异性强，可对布鲁氏菌感染的临床样品进行定量检测。

关键词: 布鲁氏菌, 数字PCR, 检测方法

Abstract: This experiment was conducted to establish a droplet digital PCR (ddPCR) method for detection of Brucella. A ddPCR method was developed, the primers and probes were designed based on the conservative regions of BCSP31 gene of Brucella. The concentration of primer and probe, the annealing temperature were optimized. The sensitivity, specificity and reproducibility of ddPCR method were evaluated. In results, the optimal primer concentration and the probe concentration were 900 nmol·L^-1 and 250 nmol·L^-1, the optimum annealing temperature was 58℃. The detection limit of ddPCR method was 1.12 copies·μL^-1 with a good linear response, it had no cross reaction with E. coli O:157 and other four bacterium, both the intra-batch reproducibility and the inter-batch reproducibility were good. All the results showed that Brucella ddPCR was sensitive and specific, it was suitable for quantitative detection of clinical samples infected with Brucella.

Key words: Brucella, droplet digital PCR, detection method

中图分类号:

S852.614

梅力, 王英超, 程汝佳, 于国际, 范学政, 高晓龙, 高敏, 秦玉明, 李筱英, 李巧玲, 朱良全, 冯小宇. 1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2021, 52(6): 1753-1759.

MEI Li, WANG Yingchao, CHENG Rujia, YU Guoji, FAN Xuezheng, GAO Xiaolong, GAO Min, QIN Yuming, LI Xiaoying, LI Qiaoling, ZHU Liangquan, FENG Xiaoyu. A Droplet Digital PCR Method for Detection of Brucella[J]. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica, 2021, 52(6): 1753-1759.

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