鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.03.012

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (3): 430-437.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.03.012

鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性

张树栋¹，曹春秋¹，董井泉¹，高明春¹，张文龙¹，郑铁鑫²，马波^1*，王君伟^1*

（1.东北农业大学动物医学学院，哈尔滨 150030；2.哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨 150069）

收稿日期:2014-06-18 出版日期:2015-03-23 发布日期:2015-03-23
通讯作者: 王君伟，教授，主要从事禽病、牛病及其免疫防治相关研究，E-mail：jwwang@neau.edu.cn；马波，副教授，主要从事禽类疫病及其免疫防治研究，E-mail：mabo99@neau.edu.cn
作者简介:张树栋（1987-），男，黑龙江齐齐哈尔人，硕士，从事生物制品学与分子免疫学研究，E-mail：452616537@qq.com
基金资助:
2013年度黑龙江省博士后资助项目（LBH-Z13021）；高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（20102325110004）

Prokaryotic Expression of Antigenic Domain Region of Duck Enteritis Virus gB Gene and Reactivity of Its Polyclonal Antibody

ZHANG Shu-dong¹，CAO Chun-qiu¹，DONG Jing-quan¹，GAO Ming-chun¹，ZHANG Wen-long¹，ZHENG Tie-xin²，MA Bo^1*，WANG Jun-wei^1*

（1.College of Veterinary Medicine，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China；2.Harbin Pharmaceutical Group Bio-vaccine Co.,Ltd.,Harbin 150069,China）

Received:2014-06-18 Online:2015-03-23 Published:2015-03-23

摘要/Abstract

摘要：

拟制备鸭肠炎病毒（DEV）gB抗原优势区的多克隆抗体，初步应用于该病毒的检测。以本实验室克隆的DEVC-KCE株ul27基因序列为参考序列设计特异性引物，通过PCR获得DEV gB优势表位区域基因片段gB-AD（331—570 bp），并在pET-32a（+）/Rosetta(DE3) pLysS系统中进行原核表达。经IPTG诱导获得与预期大小相符的重组蛋白质，以Ni-NTA柱亲和层析法纯化重组蛋白质，利用DEV阳性血清检测重组蛋白质的抗原性，并用切胶纯化的重组蛋白质免疫家兔，制备兔抗DEV gB-AD血清。结果显示，重组蛋白质可被DEV阳性血清特异性识别，制备的兔源多克隆抗体I-ELISA效价为1∶10 240，且其具有中和活性；兔源多克隆抗体在还原电泳条件下显示DEV gB的相对分子质量约为66 ku，而在非还原电泳条件下DEV gB显示为相对分子质量约120和66 ku的两条目的带，通过间接免疫荧光试验和中和试验进一步证实制备的兔源多克隆抗体可特异性识别鸭肠炎病毒感染细胞所合成的gB蛋白。结果表明，所制备的兔抗DEV gB-AD多克隆抗体可作为检测DEV的试剂，为DEV检测及gB的功能研究提供必要的基础数据和材料。

Abstract:

This experiment was conducted to prepare the antiserum of antigenic domain region of duck enteritis virus (DEV) gB gene，and showed its initial application as detection reagent to detect DEV.Specific primers were designed for DEV C-KCE ul27 gene according to the cloned gene sequence of our laboratory，then the antigenic domain region of DEV gB gene （331-570 bp）was cloned by PCR which named gB-AD.Recombinant gB-AD region protein was expressed in prokaryotic expression system，pET-32a(+) / Rosetta(DE3)pLysS，by induction of IPTG and was purified by Ni-NTA column affinity chromatography，and the antigenicity of recombinant protein was identified by using the DEV positive serum.The purified recombinant protein was retrieved by cutting the gel slices that contain the right bands，and was used to immunize rabbits as immunogen to prepare the rabbit anti-gB-AD region serum.Results were as follows：The recombinant protein could be identified by DEV positive serum specifically，and the titer of polyclonal antibody for immunizing rabbit was 1∶10 240 by I-ELISA with neutralizing activity.The quality of the DEV gB molecule was about 66 kD reacted to polyclonal antibody in the reducing SDS-PAGE，on the contrary，it was about 120 and 66 kD in the non-reducing SDS-PAGE.I-ELISA and Western blot analysis showed that antibody for immunizing rabbit could identify recombinant gB-AD region protein from the infected cells respectively.In the further，indirect immunofluorescence test and neutralization assay confirmed that the antiserum could identify DEV specifically with neutralization.Above all，the results showed that antiserum for immunizing rabbit can be used as detection reagent to detect DEV，and it afforded significant data for the study on the detection of DEV and function of DEV gB.

中图分类号:

S852.4

张树栋，曹春秋，董井泉，高明春，张文龙，郑铁鑫，马波，王君伟. 鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(3): 430-437.

ZHANG Shu-dong，CAO Chun-qiu，DONG Jing-quan，GAO Ming-chun，ZHANG Wen-long，ZHENG Tie-xin，MA Bo，WANG Jun-wei. Prokaryotic Expression of Antigenic Domain Region of Duck Enteritis Virus gB Gene and Reactivity of Its Polyclonal Antibody[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(3): 430-437.

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鸭肠炎病毒gB抗原优势区的表达及其多克隆抗体的反应特性

Prokaryotic Expression of Antigenic Domain Region of Duck Enteritis Virus gB Gene and Reactivity of Its Polyclonal Antibody

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