基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究

畜牧兽医学报

基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究

程朝飞^1＃，宫苗苗^1＃，田康乐¹，王勇^1,2，赵占中¹，史利军¹，李刚^1*

（1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室，北京 100193；2. 中国农业大学动物医学院，北京 100193）

收稿日期:2012-07-02 出版日期:2012-12-26 发布日期:2012-12-26
通讯作者: 李刚，教授，E-mail：gli358@ Gmail.com
作者简介:程朝飞(1987-)，男，河南登封人，硕士，主要从事动物重大疫病的防控与诊断，E-mail: donwuyixue217@163.com，Tel：010-62813876；宫苗苗(1985-)，女，山东泰安人，硕士，主要从事预防兽医学研究。二人共同为第一作者
基金资助:
国家高技术研究发展计划 (863 计划) (2008AA10Z411)；北京市科委项目 (Z07010501780701)；国家公益行业项目 (20083014；200903037-2)

Comparative Study on the Indirect ELISA Methods Based on the Different Recombinant Proteins of Rabies Virus

CHENG Chao-fei^1＃，GONG Miao-miao^1＃，TIAN Kang-le¹，WANG Yong^1,2，ZHAO Zhan-zhong¹，SHI Li-jun¹，LI Gang^1*

(1. State Key Laboratory of Animal Nutrition, Institute of Animal Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China； 2. College of Veterinary Medicine, China Agricultural University, Beijing 100193, China)

Received:2012-07-02 Online:2012-12-26 Published:2012-12-26

摘要/Abstract

摘要：

原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M)，并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法，与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较。根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP-Flury株M基因序列设计特异性引物并引入SmaⅠ和NotⅠ酶切位点，经RT-PCR扩增得到目的基因，连接pCR^®2.1载体，构建重组质粒pCR-RV-M，重组质粒用SmaⅠ和NotⅠ进行双酶切，酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中，构建重组表达载体pGEX-RV-M。将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞，使用IPTG诱导表达目的蛋白，SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大，且主要以可溶性的形式表达。亲和层析纯化目的蛋白，Western blot表明融合蛋白具有良好的反应原性，使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清，同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P（RV-His-P）建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清。结果表明：与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比，使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率，能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法。

Abstract:

This study was designed to compare the indirect ELISA methods for detection of dog antibodies against rabies virus based on the recombinant matrix protein (M) and phosphoprotein (P). The M gene of rabies virus LEP-Flury strain was amplified by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pGEX-6P-1. The resultant constructed pGEX-RV-M plasmid was transformed into BL21 (DE3) and protein expression was analyzed by SDS-PAGE and Western blot. The results of SDS-PAGE showed that the M protein was efficiently expressed, which were mainly soluble, and purified with the affinity chromatography. The results of Western blot indicated that the recombinant protein M showed good immunogenicity. The indirect ELISA method was established with the purified recombinant protein M, and a total of 95 serum samples were detected by the method and the indirect ELISA method based on the recombinant protein P respectively. The results showed that compared with the commercially available ELISA kit coating RV as antigen, the indirect ELISA method based on recombinant protein P had a higher coincidence rate, and it can replace the ELISA method based on RV.

中图分类号:

程朝飞，宫苗苗，田康乐，王勇，赵占中，史利军，李刚. 基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究[J]. 畜牧兽医学报, doi: .

CHENG Chao-fei，GONG Miao-miao，TIAN Kang-le，WANG Yong，ZHAO Zhan-zhong，SHI Li-jun，LI Gang. Comparative Study on the Indirect ELISA Methods Based on the Different Recombinant Proteins of Rabies Virus[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, doi: .

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