畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (5): 576-580.doi:
侯勃,张彦明*,朱晓娟,康恺,代晨,唐青海
HOU Bo, ZHANG Yan-ming*, ZHU Xiao-juan, KANG Kai, DAI Chen, TANG Qing-hai
摘要: 本试验旨在筛选猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)内作用于猪瘟病毒(CSFV)的microRNA。通过构建CSFV 3′和5′非翻译区(Untranslated region, UTR)的双荧光素酶报告基因载体,经生物信息学预测可能与CSFV相互作用的microRNA,然后瞬时共转染重组载体与microRNA的抑制物,最后通过发光检测仪测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了CSFV 5′非翻译区(373 bp)和3′非翻译区(252 bp)的报告基因载体,并合成了4条预测出的microRNA(ssc-miR-let7c、ssc-miR-106a、ssc-miR-18、ssc-miR-139)的抑制物,共转染后发光检测仪检测到荧光素酶的活性被不同程度抑制。本研究发现microRNA作用位点主要在CSFV的3′UTR,而且以上4种microRNA都对CSFV 3′UTR有不同程度的抑制作用,其中ssc-miR-18的抑制作用比较明显。