中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.005

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (4): 541-546.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.005

中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究

刘强，贺志锐，王银龙，乌热力哈孜，赛务加甫^*

（石河子大学动物科技学院，石河子 832003）

收稿日期:2013-09-18 出版日期:2014-04-23 发布日期:2014-04-23
通讯作者: 赛务加甫，博士，副教授，主要从事转基因动物研究，E-mail:291016059@qq.com
作者简介:刘强(1987-)，男，陕西西安人，硕士生，主要从事兽医外产科学研究，E-mail：249272295@qq.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31160524）

Construction Eukaryotic Expression Vector and Its Expression of PLCζ Gene from Chinese Merino Sheep

LIU Qiang，HE Zhi-rui，WANG Yin-long，WU RE lihazi，SAI Wujiafu^*

(College of Animal Science and Technology，Shihezi University，Shihezi 832003， China)

Received:2013-09-18 Online:2014-04-23 Published:2014-04-23

摘要/Abstract

摘要：

旨在构建PLCζ真核表达载体，初步研究其在体细胞系中的表达特性。本研究用PCR技术扩增出PLCζ基因片段，克隆至载体pEGFP-N1，鉴定无误后，将构建了重组质粒pEGFP-N1-PLCζ转染293T细胞和绵羊成纤维细胞，在倒置荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察重组质粒在细胞中的表达和分布。经酶切与测序证明，本试验成功的构建了pEGFP-N1-PLCζ真核表达载体，并且成功与绿色荧光蛋白融合表达。本试验实现了pEGFP-N1-PLCζ在绵羊胎儿成纤维细胞中的表达，这将有利于进一步通过核移植来研究其重组蛋白对卵母细胞的激活作用。

Abstract:

This experiment aimed to construct the eukaryotic expression vector of PLCζ，a preliminary study of its expression properties in progenitor cell line was conducted.PLCζ was amplified by PCR and cloned into vector pEGFP-N1，after correct identification，the recombinant plasmid pEGFP-N1-PLCζ was transfected to 293T cells and sheep fibroblasts.The expression and distribution of cell recombinant plasmid was observed under an inverted fluorescence microscope and laser scanning confocal microscope.After digestion and sequencing,the pEGFP-N1-PLCζ eukaryotic expression vector was successfully constructed，and its successful fusion expression with the green fluorescent protein was observed.This experiment realized the expression of pEGFP-N1-PLCζ in sheep fetal fibroblast cells，which will help us to study the activation of recombinant protein on the oocyte through nuclear transfer furtherly.

中图分类号:

S826
S813.3

刘强，贺志锐，王银龙，乌热力哈孜，赛务加甫. 中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(4): 541-546.

LIU Qiang，HE Zhi-rui，WANG Yin-long，WU RE lihazi，SAI Wujiafu. Construction Eukaryotic Expression Vector and Its Expression of PLCζ Gene from Chinese Merino Sheep[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(4): 541-546.

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.xmsyxb.com/CN/10.11843/j.issn.0366-6964.2014.04.005

https://www.xmsyxb.com/CN/Y2014/V45/I4/541

参考文献

［1］SAUNDERS C M，LARMAN M G，PARRINGTON J，et al.A spermspecific trigger of Ca²⁺ oscillations in eggs and embryo development ［J］.Development，2002，129:3533-3544.
［2］贺志锐，肖红冉，于振兴，等.中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因的克隆及序列分析［J］.动物医学进展，2013，34(5):31-36.
［3］ROSS P J，RODRIGUEZ R M，CIBELLI J B，et al.Activation of bovine somatic cell nuclear transfer embryos by PLCZ cRNA injection ［J］.Reproduction，2009，137(3):427-437.
［4］COWARD K，PONTING C P，PARRINGTON J，et al.Phospholipase C zeta，the trigger of egg activation in mammals，is present in a non-mammalian species［J］.Reproduction，2005，130:157-163.
［5］YONEDA A，KASHIMA M，WARANABE T，et al.Molecular cloning，testicular postnatal expression，and oocyte-activating potential of porcine phospholipase C zeta［J］.Reproduction，2006，132：393-401.
［6］ITO J，YUHARA E，NAKAMURA A，et al.Activation of round spermatid-injected oocytes using phospholipase c zeta in pigs［J］.Reprod Fert Dev，2012，25(1)：286.
［7］BEDFORD-GUAUS S J，MCPARTLIN L A，XIE J，et al.Molecular cloning and characterization of phospholipase C Zeta in equine sperm and testis reveals species-specific differences in expression of catalytically active protein［J］.Biol Reprod，2011，85:78-88.
［8］MALCUIT C，KUROKAWA M，FISSORE R A.Calcium oscillations and mammalian egg activation［J］.Cell Physiol，2006，203(3)：565-573.
［9］YOON S Y，EUM J H，LEE J E，et al.Recombinant human phospholipase C zeta 1 induces intracellular calcium oscillations and oocyte activation in mouse and human oocytes［J］.Hum Reprod，2012，27(6):1768-1780.
［10］HEYTENS E，PARRINGTON J，COWARD K，et al.Reduced amounts and abnormal forms of phospholipase C zeta (PLCζ) in spermatozoa from infertile men［J］.Hum Reprod，2009,24(10):2417-2428.
［11］NOMIKOS M，ELGMATI K，THEODORIDOU M，et al.Male infertility-linked point mutation disrupts the Ca²⁺ oscillation-inducing and PIP₂ hydrolysis activity of sperm PLCzeta［J］.Biochem J，2011，434：211-217.
［12］ITO M，SHIKANO T，ODA S，et al.Difference in Ca²⁺ oscillation-inducing activity and nuclear translocation ability of PLCZ1，an egg-activating sperm factor candidate，between mouse，rat，human，and medaka fish［J］.Biol Reprod，2008，78(6)：1081-1090.
［13］AARABI M，YU Y，XU W，et al.The testicular and epididymal expression profile of PLCζ in mouse and human does not support its role as a sperm-borne oocyte activating factor［J］. PLoS ONE，2012，7(3)：e33496.
［14］DING M，BECK R J，KELLER C J，et al.Cloning and analysis of MACE-1 related genes ［J］.Biochem Biophys Res Commun，1994，202(1)：549-555.
［15］COWARD K，KUBOTA H，HIBBITT O，et al.Expression of a fluorescent recombinant form of sperm protein phospholipase C zeta in mouse epididymal sperm by in vivo gene transfer into the testis［J］.Fert Ster，2006，85：1281-1289.
［16］赛务加甫，张立，彭新荣，等.绵羊精子提取物对卵母细胞的孤雌激活作用［J］.西北农林科技大学学报，2006,34(7):9-12.
［17］PHILLIPS S，YU Y，ROSSBACH A，et al.Divergent effect of mammalian PLC-zeta in generating Ca²⁺ oscillations in somatic cells versus eggs ［J］.Biochem J，2011，438(3)：545-553.

[1]	王海波, 占今舜, 谷志勇, 陈新锋, 潘月, 贾浩滨, 钟小军, 李开嵘, 赵生国, 霍俊宏. 湖羊与三元杂交绵羊夏杜湖、夏澳湖肉质特性比较研究[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 110-119.
[2]	段香茹, 康佳, 杨若晨, 单新雨, 李太春, 赵雯, 张英杰, 刘月琴. L-半胱氨酸对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡和类固醇激素分泌的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2024, 55(1): 179-191.
[3]	宋鹏琰, 王思伟, 岳巧娴, 张寅梁, 陈晓勇, 周荣艳. 绵羊miR-200b启动子鉴定及其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5066-5076.
[4]	韩浩园, 李世凯, 杨瑞巧, 李曼曼, 李君, 哈斯, 赵金艳, 魏红芳, 权凯. 基于转录组测序挖掘槐山羊高繁关键候选基因[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5077-5090.
[5]	陈聪慧, 段春辉, 杨欣雨, 夏翠, 郭云霞, 纪守坤, 严慧, 刘月琴, 张英杰. 运输应激不同干预方式对羔羊宰后肌肉能量代谢的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(12): 5101-5111.
[6]	栗登攀, 马克岩, 韩金涛, 白雅琴, 李讨讨, 马友记. 永登七山羊全基因组选择信号检测分析[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4577-4588.
[7]	赵雪洋, 李丹妮, 王钰晨, 郭磊, 王丽, 黄杰, 焦仪强, 安小鹏, 张希云, 张磊, 宋宇轩. 东湖杂交羊产羔性状的GWAS分析及候选基因GRID2的验证[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(11): 4625-4635.
[8]	张寒月, 赵丹, 梁煜, 赵弼时, 范蒙丹, 乔利英, 刘建华, 杨凯捷, 潘洋洋, 刘文忠. miR-150靶向AOC3调控绵羊前体脂肪细胞分化的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3262-3274.
[9]	刘林丽, 彭雪兰, 李博, 程乐凡, 次仁拉姆, 张恩平. 过表达UCP3基因对萨湖羊前体脂肪细胞分化的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3275-3285.
[10]	贺名扬, 马钰静, 王泳, 杨若晨, 刘月琴, 张英杰, 段春辉. 褪黑激素对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3313-3324.
[11]	宋美君, 郝科兴, 海思妤, 陈岩, 王静, 胡广东. SRIF-14对绵羊子宫内膜上皮细胞增殖和凋亡的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3325-3334.
[12]	李悦欣, 刘爱菊, 马晓菲, 郑忠, 胡伯欣, 智云霞, 田树军. TGFβR1介导TGF-β/Smad信号通路对绵羊颗粒细胞功能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3335-3347.
[13]	马友记, 陈鹏飞, 马青, 吴怡. 不同运动量对滩羊瘤胃菌群多样性的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(8): 3393-3405.
[14]	王万年, 陈思佳, 郜金荣, 温中豪, 袁梦娇, 张洪志, 庞志旭, 乔利英, 刘文忠. 基于多层感知机的绵羊限性性状基因组选择模拟研究[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(7): 2824-2835.
[15]	熊程坤, 张道亮, 杨悦, 丁红研, 赵杰, 李玉, 王希春, 冯士彬, 赵畅, 汤继顺, 吴金节. 芦丁对围产期湖羊瘤胃发酵、瘤胃菌群结构及抗氧化性能的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2023, 54(7): 2898-2909.

中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因真核表达载体的构建及其表达研究

Construction Eukaryotic Expression Vector and Its Expression of PLCζ Gene from Chinese Merino Sheep

RichHTML

PDF

可视化

被引次数

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价