畜牧兽医学报 ›› 2011, Vol. 42 ›› Issue (10): 1497-1502.doi:
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刘文华1,2,3,王志亮2,包静月2,吴晓东2,刘华雷2,赵永刚2,刘秀梵1
LIU Wenhua1,2,3, WANG Zhiliang2*, BAO Jingyue2 , WU Xiaodong2, LIU Hualei2, ZHAO Yonggang2, LIU Xiufan1
摘要: 本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(PPRV)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能,为建立PPRV反向遗传操作平台奠定基础。首先构建表达PPRV分离株China/Tib/07的N、P和L蛋白的辅助质粒pCIN、pCIP和pCIL。通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质粒转染细胞后的蛋白表达情况,并从mRNA水平上验证蛋白表达的正确性;扩增PPRV基因组两末端序列和eGFP报告基因,三者通过overlapPCR连接并克隆至转录载体pOLTV5中构建微型基因组。将构建的微型基因组分别与辅助病毒和3个辅助质粒进行共转染。经鉴定各辅助质粒完全正确,构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与3个辅助质粒共转染,报告基因均表达。本试验成功构建了PPRV分离株的表达N、P和L蛋白的3个辅助质粒以及微型基因组,并用微型基因组验证了3个辅助质粒可以作为PPRV反向遗传操作的辅助质粒,为该病毒感染性克隆的构建奠定了基础。