摘要： 为了有效检测低浓度禽流感病毒，笔者通过将高特异性的抗原抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合，建立了一种快速检测痕量H5亚型禽流感病毒的间接免疫PCR方法和间接“三明治”抗体夹心免疫PCR方法。以TopYield 96孔板为固相免疫吸附载体，以禽流感病毒H5蛋白为检测对象，通过一系列免疫反应及亲和素生物素桥联作用，将生物素标记的报告DNA分子和生物素标记的禽流感病毒H5亚型抗体分子连接。充分洗涤后，在TopYield板孔中添加PCR反应液，对板壁偶联的报告DNA进行PCR扩增，间接达到检测微量禽流感病毒H5蛋白的目标。通过优化报告DNA分子和链亲和素的浓度，2种免疫PCR技术都可检测到约1 fg的禽流感病毒H5蛋白，与常规ELISA方法相比，灵敏性提高了近1 000倍。