畜牧兽医学报 ›› 2011, Vol. 42 ›› Issue (7): 1046-1050.doi:

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猪源牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

邓宇1,2,3,张荣2,丛雁方2,张建武2,袁世山2,文心田1*,郑浩2*
  

  1. 1.四川农业大学动物医学院,雅安625014;2.中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;3.西昌学院 动物科学学院,西昌615000
  • 收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-07-28 发布日期:2011-07-28
  • 通讯作者: 文心田,郑浩

  • Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-07-28 Published:2011-07-28

摘要: 本研究旨在建立一种荧光定量PCR检测方法,用于猪源牛病毒性腹泻病毒(BVDVs)检测,同时能鉴别诊断猪瘟病毒(CSFV)。根据BVDVs与CSFV 5′-UTR保守序列,设计一套引物和特异TaqMan探针,以本实验室构建的猪源BVDVs 5′-UTR阳性重组质粒为标准品,通过优化反应条件,建立了标准曲线。以构建的标准品为模板进行了特异性、敏感性、重复性试验、并应用于临床检测。结果显示,该方法检测CSFV、猪繁殖与呼吸综合征病毒均为阴性;最低可检测到每个反应相当于10拷贝的标准品DNA;重复性试验的批内变异系数为0.20%~0.95%;应用所建立方法对临床样品进行检测,其结果与普通RT-PCR结果的符合率为86.7%。本研究建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于猪感染BVDVs、猪瘟疫苗污染BVDVs的监测。