猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用

畜牧兽医学报 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (9): 1422-1428.doi:

猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用

杨春华^1，2, 周延^2，3，孙思扬², 钟毅²,王川庆^1*

（1. 河南农业大学牧医工程学院，郑州 450002； 2. 江西出入境检验检疫局，南昌 330002； 3. 南昌大学，南昌 330002）

收稿日期:2011-12-26 出版日期:2012-09-25 发布日期:2012-09-25
通讯作者: 王川庆, 教授, 主要从事动物传染病研究，E-mail: wchuanq@163.com
作者简介:杨春华(1980-), 女，兽医师, 博士, 主要从事动物分子病原学与免疫学研究，E-mail:ellenyung@foxmail.com；Tel：0791-86358797
基金资助:
国家质检总局科技计划项目（2009IK029；2012IK012)

Development and Application of PCR-DHPLC Assays for Detection of the Swine
Torque Teno Sus Virus

YANG Chun-hua^1，2， ZHOU Yan^2,3， SUN Si-yang²， ZHONG Yi²， WANG Chuan-qing^1*

（1. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Henan Agricultural University,
Zhengzhou 450002, China； 2. Jiangxi EntryExit Inspection & Quarantine Bureau of P.R.China,
Nanchang 330002, China； 3. Nanchang University, Nanchang 330002, China）

Received:2011-12-26 Online:2012-09-25 Published:2012-09-25

摘要/Abstract

摘要： 为了应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术检测猪细环病毒1型和2型，根据猪细环病毒的序列特点设计特异性引物，PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测。选择猪细小病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪伪狂犬病毒进行特异性试验，无交叉反应。该检测方法具有较好的特异性和重复性；用质粒标准品进行TTSuV1和TTSuV2的PCR-DHPLC检测，灵敏度可达1.0×10¹拷贝·μL^-1。对80份血清样本分别应用实时荧光PCR法、PCR-凝胶电泳法及本文所建立的PCR-DHPLC法与进行检测，发现TTSuV1有63份PCR-DHPLC阳性，63份实时荧光PCR阳性，54份PCR-凝胶电泳阳性；TTSuV2有69份PCR-DHPLC阳性，69份实时荧光PCR阳性，56份PCR-凝胶电泳阳性。本试验建立的PCR-DHPLC法具有特异、敏感、快速、重复性好等优点，可用于TTSuV感染的分子流行病学调查。

Abstract: To identify the Torque teno sus virus (TTSuV), a PCR-DHPLC assay was developed in this study. Primers specific for the partial region of the TTSuV1 and TTSuV2 were selected to conduct the PCR-DHPLC assays. The specificity test was performed with PPV, PCV-Ⅱ and PRV and no cross reaction was found. The PCR-DHPLC for TTSuV had good specificity and nice repeatability. Sensitivity analysis showed that the developed PCR-DHPLC could detect 1.0×10¹ copy·μL^－1. The established method and the Real-time PCR were used to detect 80 serum samples, the results showed that 63 samples were TTSuV1 positive by PCR-DHPLC, and it was consistent with real-time PCR test; 69 samples were TTSuV2 positive by PCR-DHPLC, and it was consistent with real-time PCR test, 56 samples were positive by normal RT-PCR. The method showed nice specification, sensitivity, repeatability, and quickness, and it could be used in epidemiological investigation of TTSuV.

中图分类号:

杨春华, 周延, 孙思扬, 钟毅, 王川庆. 猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(9): 1422-1428.

YANG Chun-Hua, ZHOU Yan, SUN Si-Yang, ZHONG Yi, WANG Chuan-Qing. Development and Application of PCR-DHPLC Assays for Detection of the Swine
Torque Teno Sus Virus[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2012, 43(9): 1422-1428.

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