畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (6): 997-1003.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.06.019
冯培祥1,朱梅胜1,杨莉1,檀学进2,潘福星1,齐娟3,郭妍妍3,张毅4,尹燕博1,3*
FENG Pei-xiang1,ZHU Mei-sheng1,YANG Li1,TAN Xue-jin2,PAN Fu-xing1,QI Juan3,GUO Yan-yan3,ZHANG Yi4,YIN Yan-bo1,3 *
摘要:
旨在克隆鸡 β-防御素Gal-9 基因,对其预测的成熟肽基因进行原核表达,并对产物进行抑菌活性的检测。根据 GenBank发表的鸡β-防御素基因Gal-9(NM_001001611.2)设计引物,采用RT-PCR方法从鸡食道中扩增得到鸡β-防御素Gal-9基因,将该成熟肽基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)的EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切位点上,构建重组原核表达质粒pET-32a-Gal-9。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37 ℃进行诱导表达。结果扩增出Gal-9,其cDNA为204 bp,成熟肽编码42个氨基酸。SDS-PAGE电泳表明,重组鸡Gal-9蛋白大小约为25 ku,与预期大小一致,重组蛋白主要以包涵体形式存在。重组鸡 Gal-9 蛋白对金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(ATCC 25922)、酵母菌 (GS115) 都能产生抑菌作用,最小抑菌浓度分别为62.50、31.75、125.00、31.75 mg•L-1。成功获得了鸡 β-防御素Gal-9成熟肽基因的表达产物,证实了重组鸡Gal-9蛋白具有广谱的抗菌活性,体外抑菌试验为其在家禽生产中应用提供了理论基础。
中图分类号: