畜牧兽医学报

马生长激素（GH）基因的PCR-SSCP研究

张焱如;芒来

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 209-213. doi:

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选取4个蒙古马地方品种、1个国内培育品种和1个国外引入品种共281匹马，采用PCR-SSCP技术，检测了GH 基因5＇侧翼区、第1内含子、第2外显子和第5外显子4个位点的遗传多态性。结果显示：仅第5外显子出现多态性，表现出AA、BB和AB 3种基因型，其余位点未检测到多态。群体遗传学分析结果表明：除纯血马外，其余品种都是等位基因A为优势基因；Hardy-Weinberg平衡检验显示，乌审马、乌珠穆沁马、巴尔虎马处于平衡状态，锡尼河马、三河马、纯血马处于非平衡状态；各品种马的多态信息含量均为中度多态(0.25<PIC<0.5)。本研究为今后马的分子育种奠定一定基础。

莱芜猪DGAT1基因的多态性研究

刘源;姜运良;武英;魏述东;杨晓慧

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 214-218. doi:

摘要 ( 1178 )

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二酰基甘油酰基转移酶1（Diacylglycerol acyltransferase,DGAT1）是催化酰基化的辅酶A和二酰基甘油合成甘油三脂的关键限速酶。莱芜猪具有较强的脂肪沉积能力，可能与DGAT1基因的活性有关。本研究对莱芜猪DGAT1的外显子6至外显子8共476bp的序列进行了克隆、测序（GenBank登录号：DQ289596）和多态性分析，分别在外显子6的第27bp位点和外显子8的第56bp位点检测到单核苷酸多态（SNP），均属于沉默突变。克隆了莱芜猪5′调控区737 bp的序列，在-241bp (相对于起始密码子ATG)发现单个碱基的插入，该多态性位点与莱芜猪脂肪沉积的关系值得进一步探讨。

中国西南地区五个地方绵羊群体mtDNA遗传多样性及系统进化研究

管松;马月辉;叶绍辉

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 219-224. doi:

摘要 ( 1409 )

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采用 PCR-SSCP技术及mtDNA D-loop 序列分析相结合的方法，对我国云南昭通绵羊、腾冲绵羊、宁蒗绵羊及西藏的多玛绵羊、江孜绵羊5个地方绵羊群体共241个个体进行遗传多样性及系统进化分析。PCR-SSCP分析显示，在西藏的多玛绵羊和江孜绵羊中均检测到线粒体编码区的 Cyt b 和ND2基因的３种基因型A 、B和C，且在西藏的多玛绵羊、江孜绵羊中C基因型比例高于B型；而在云南的昭通绵羊、腾冲绵羊和宁蒗绵羊中只检测到基因型A和B。根据不同的基因型从5个群体中筛选出39个样品进行mtDNA D-loop区克隆测序，经过系统进化分析揭示西藏绵羊存在A 、B、C 3种mtDNA单倍型；而云南绵羊只存在A 、B 2种mtDNA单倍型。以上基于PCR-SSCP和D-loop区序列的分析结果一致提示西藏绵羊有３个母系来源，云南绵羊有２个母系来源。基于mtDNA D-loop序列的多态性分析结果显示西藏多玛绵羊和江孜绵羊的单倍型多样度（Hd）、核苷酸多样度（Pi）及平均核苷酸差异数（k）均高于云南３个地方绵羊品种，提示西藏绵羊遗传多样性较丰富，云南绵羊遗传多样性相对贫乏。

20个山羊品种FSHβ基因部分序列测定及与其它8个物种的序列比较分析

李利;张红平;吴登俊

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 225-231. doi:

摘要 ( 641 )

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利用牛、绵羊等动物FSHβ亚基基因序列设计引物，采用PCR法扩增并测定出20个山羊品种（16个本地品种和4个引进品种）FSHβ亚基基因部分序列(GenBank登录号：AY838283和AY853276)。在测定出的FSHβ亚基基因731bp序列中，包括第1外显子全序列(1～61bp)，第1内含子全序列(62～702bp)以及第2外显子部分序列(703～731bp)，序列的A+T含量（66.07%）高于G+C（33.93%），编码7个氨基酸。在所有测定的序列中共检出3个突变位点，分别是78（-/A)、132(G/A)和343(G/A)，这些突变都位于内含子1序列中，它们与产羔率之间的联系需进一步研究。利用山羊以及GenBank中其他8个物种的FSHβ基因内含子1序列进行系统发育分析，部分结果与传统生物分类不一致，可能是由于大部分物种的序列长度不足700bp以及物种之间的关系超过了属阶元的限制。

鸭脂肪酸结合蛋白基因的克隆和序列多态性分析

龚道清;张红;顾志良;张军;段修军;赵旭庭

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 232-236. doi:

摘要 ( 1488 )

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根据鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白（A-FABP）基因序列设计一对引物对鸭基因组进行PCR扩增，将扩增出的475bp片段进行克隆和测序，序列分析表明该基因片段包含部分外显子2、3和完整的内含子2序列，与鸡、鹅、猪的A-FABP基因分别有84%、94%和77%的同源性。在此基础上又设计3对引物利用PCR-SSCP方法对获得的序列进行多态性研究。结果引物P3在樱桃谷鸭、山麻鸭等品种中发现4处单碱基突变，分别为：241处“A－T”突变；243处的“T－C”突变；258处的“T－C”突变；299处的“C－T”突变。这些点突变共产生了3种基因型，且基因型分布在各鸭品种间有显著差异。

5个鸡种腺苷琥珀酸裂解酶（ADSL）基因外显子9 SNP及其与鸡肉肌苷酸含量的相关分析

张学余;束婧婷;季从亮;陈国宏;韩威

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 237-240. doi:

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根据腺苷琥珀酸裂解酶（adenylosuccinate lyase, ADSL）基因外显子9的序列设计引物，用PCR-SSCP的方法对隐性白羽鸡、丝羽乌骨鸡、萧山鸡、白耳鸡、藏鸡进行了单核苷酸多态性分析，并检测到了多态性，表现为3种基因型，对两种纯合子进行直接测序，结果发现9 839位碱基发生了突变，由C突变为A，将核苷酸序列翻译成氨基酸序列后，发现突变后引起ADSL基因第273位氨基酸由Pro突变为 Thr，为错义突变。经独立性检验，发现基因型频率和基因频率分布与品种有关，但进一步方差分析并没有显示出该位点的多态性与胸肌的IMP含量之间存在关联。

二核苷酸微卫星PCR扩增的影子带及其来源

王吉振;王爱国;储明星;李宁;傅金恋

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 241-246. doi:

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2个绵羊二核苷酸微卫星BM143和BMS2508的PCR扩增产物在非变性（中性）聚丙烯酰胺凝胶电泳（nPAGE）中形成滞后于主带的影子带。影子带比主带小2 bp。实际上主带由两部分组成：表明微卫星正确大小的PCR特异扩增的高浓度条带（特异扩增带）和比特异扩增带小2 bp的PCR非特异扩增的低浓度条带（非特异扩增带）。本实验初步证明影子带是微卫星的一条特异扩增带和一条非特异扩增带错配形成的异源双链。本研究结果表明，影子带的出现并不改变特异扩增带在nPAGE中的正常迁移率。

鸡不同肠段碱性氨基酸转运载体mRNA表达的差异性研究

谭会泽;王修启;苏海林;邹仕庚;代发文;冯定远

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 247-252. doi:

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为研究肉鸡肠道不同肠段碱性氨基酸转运载体rBAT（系统b0,+）、y+LAT2（系统y+L）、 CAT1（系统y+）、CAT4（系统y+）mRNA表达的差异性，以快大型黄羽肉鸡为动物模型，采集30d时接近平均体重黄羽肉鸡十二指肠、空肠、回肠和结直肠样品，采用相对定量RT-PCR方法研究不同肠段rBAT 、y+LAT2、 CAT1 、CAT4 mRNA表达丰度。结果显示：结直肠rBAT 、y+LAT2的mRNA表达丰度极显著低于十二指肠、空肠和回肠（p＜0.01），其在回肠表达丰度高于空肠、十二直肠，但是统计上没有差异（p＞0.05）。结直肠CAT1 mRNA表达丰度极显著高于十二指肠、空肠和回肠（P＜0.01），回肠极显著高于空肠（P＜0.01），高出十二指肠 27.9％（P=0.111）。结直肠CAT4 mRNA的表达丰度极显著高于其他各个肠段（P＜0.01），十二指肠、空肠、回肠CAT4 mRNA的表达丰度依次降低，但相互之间无显著差异。结果表明，位于肠上皮黏膜细胞顶端的碱性氨基酸转运系统b0,+和基底部位的系统y+L转运载体mRNA的表达在肠道中的分布类似，显著区别于系统y+。

猪肌肉组织LPL基因表达的发育性变化及其与肌内脂肪沉积关系的研究

王刚;曾勇庆;武英;魏述东;包新见;刘婵娟;孙延晓

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 253-257. doi:

摘要 ( 780 )

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以40~90 kg 6个体重组的莱芜猪和鲁莱黑猪共72头去势公猪为试验对象（每组6头），采用相对定量RT-PCR方法，以β-actin基因为内标，分析肌肉组织LPL基因表达的发育性变化及其与肌内脂肪沉积的关系。结果表明：莱芜猪与鲁莱黑猪肌肉组织中LPL基因表达的发育性变化趋势基本相似，随体重的增长，莱芜猪50~70 kg阶段LPL mRNA表达丰度逐渐下降（P<0.05），80 kg阶段迅速回升出现一个峰值后再次下降；鲁莱黑猪LPL mRNA表达丰度随体重的增加呈缓慢下降趋势，70 kg以后变化不大并维持较低水平，其前期（40~60 kg）与后期（70~90 kg）的表达量差异显著（P<0.05）。总体上莱芜猪肌肉组织LPL基因表达量略高于鲁莱黑猪（P>0.05）。相关分析表明，莱芜猪和鲁莱黑猪肌内脂肪相对含量与肌肉组织LPL mRNA表达的发育性变化分别呈显著（P<0.05）和极显著（P<0.01）的正相关。研究结果提示：猪肌肉组织LPL是肌内脂肪沉积的重要参预者，其编码基因的表达具有明显的体重发育特征，并对于肌内脂肪的沉积具有一定程度影响。

表达犬瘟热病毒H基因的重组犬2型腺病毒免疫原性测定

闫芳;夏咸柱;扈荣良;谢之景;赵忠鹏;高玉伟;黄耕

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 258-262. doi:

摘要 ( 693 )

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为测定表达犬瘟热病毒（CDV）H基因的重组犬2型腺病毒（CAV-2/CDVLPH）免疫原性，25只45~50日龄犬（抗CDV中和抗体小于1:2，CAV-2 HI抗体效价小于1:2）随机分为5组进行免疫犬试验，第1组为CAV-2/CDVLPH免疫组，第2组为pVAXLPH 免疫组，第3组为pVAXLPH和CAV-2/CDVLPH联合免疫组， CDV弱毒疫苗组和pVAX1空载体组分别作为阳性和阴性对照组。利用间接ELISA和CDV中和试验检测免疫犬的抗CDV体液免疫水平、CAV-2 HI试验检测免疫犬的抗CAV体液免疫水平、淋巴细胞转化试验检测免疫犬的抗CDV和抗CAV-2细胞免疫水平，分析CAV-2/CDVLPH的免疫性。结果，能够在各试验组免疫犬犬血清中检测到抗CDV ELISA抗体和抗CDV中和抗体，同时在第1组和第3组免疫犬的血清中检测到抗CAV-2的HI抗体，免疫犬的外周淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激均有明显增殖，第2组的免疫应答水平低于第3组，第1组又高于第3组，但低于CDV弱毒疫苗免疫组，试验表明CAV-2/CDVLPH可同时诱导免疫犬产生抗CDV和CAV特异性免疫， CAV-2/CDVLPH与pVAXLPH相比能诱导犬产生较高的特异性免疫应答，然而低于CDV弱毒疫苗。

巴马小型猪SLA-2和β2m复合体蛋白的构建及二级结构测定分析

高凤山;李新生;李云岗;方勤美;郝慧芳;夏春

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 263-270. doi:

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以巴马小型猪为研究材料，克隆SLA-2和β2m基因。然后采用剪接重叠延伸PCR（splicing overlap extention PCR, SOE PCR）法，将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接，形成SLA-2-Linker-β2m全长。将SLA-2-Linker-β2m在pMAL-p2X系统上表达，其融合表达蛋白分别经过 Western-blot、纯化及Factor Xa切割，分离纯化单体蛋白。圆二色谱(circular dichroism spectrum, CD)测定蛋白的二级结构。结果显示，重构表达的复合体融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m大小为84.1ku。切割后去除MBP的单体蛋白大小为41.6ku。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、97.3%、97.1% 和97.9%，揭示重构的复合体具有正确的二级结构，可以用于体外多肽结合等研究。

免疫亲和色谱—气相色谱/质谱法（IAC-GC/MS）检测猪肝中的沙丁胺醇与克伦特罗

王建平;史为民;沈建忠

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 271-275. doi:

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本实验制备出抗沙丁胺醇的抗血清，并提取、纯化IgG制备免疫亲和色谱柱，针对沙丁胺醇与克伦特罗的动态柱容量为分别为400ng/mL基质和416ng/mL基质。猪肝样品匀浆后用稀盐酸提取，经免疫亲和色谱柱纯化，再用GC/MS检测，即为IAC-GC/MS法。对沙丁胺醇的检测限为0.5ng/g，定量限为2ng/g，对克伦特罗的检测限为0.8ng/g，定量限为2.5ng/g。空白组织按照1、5、10、20ng/g的浓度添加药物，沙丁胺醇在空白肝中的添加回收率为78.4%-106.9%，克伦特罗的添加回收率为77.1%-102.9%。本文建立的检测猪肝中沙丁胺醇与克伦特罗的IAC-GC/MS法乃国内首次报道。

低温诱发肉鸡腹水综合征过程中肺动脉平滑肌细胞增殖的变化

王建琳;乔健;赵立红;王慧煜;利剀;徐彤;田勇

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 276-281. doi:

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本试验主要研究低温诱发肉鸡腹水综合征(AS)过程中平滑肌细胞增殖在肺血管重塑过程中的动态变化，初步探讨肺血管重塑的机制。160只雄性AA商品代肉鸡15日龄时随机分对照组(22±1.5℃)和低温组(11±2℃)。15日龄到50日龄，每周每组随机取6只，取肺组织做石蜡切片，Weigert-间苯二酚复红染色，观察并测定血管重塑情况；采用免疫组织化学方法检测肺动脉增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达，并对其半定量化，分析平滑肌细胞增殖情况。50日龄时统计整个饲养过程中AS发生率。结果显示: (1) 低温组肉鸡AS发生率(18.75%)极显著高于对照组(1.25%)(P＜0.01）；(2) 低温组肉鸡20-50μm和50-150μm肺动脉结构从36日龄开始较对照组发生了明显的重塑(P<0.01或P＜0.05)；（3）低温组肉鸡20-50μm和50-150μm的肺动脉中平滑肌细胞增殖指数分别从22日龄和36日龄开始到50日龄极显著高于对照组（P＜0.01）。结果表明：低温诱发肉鸡AS过程中肺动脉结构发生了明显的重塑，肺血管平滑肌细胞发生了明显的增殖，并且平滑肌细胞增殖促进了肺血管重塑，在肉鸡AS发生发展过程中起着重要的作用。

泌乳周期中外源物质对大鼠乳腺内肥大细胞数量的影响及乳腺组织内组胺含量的研究

荆海霞;陈耀星;王子旭;董玉兰

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 282-287. doi:

摘要 ( 1230 )

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选择泌乳期和静止期大鼠，经乳腺局部（乳导管）或外周（脚掌皮下）注射辣根过氧化物酶（HRP）后，应用改良甲苯胺蓝染色法（MTB）对各组乳腺及其引流(鼠蹊部)和非引流（腘）淋巴结内的肥大细胞数量变化进行了研究，用荧光分光光度法检测了乳腺组织中组胺含量。结果显示，对照组乳腺及引流和非引流淋巴结内的肥大细胞数量均为静止期显著多于泌乳期（P<0.01），乳腺中组胺含量也呈相同的变化趋势。泌乳期从不同部位引入外源物质后，乳腺及乳腺引流淋巴结内肥大细胞数量明显增多，与对照组相比差异极显著（P<0.01）；而乳腺非引流淋巴结内肥大细胞数量则略有减少，与对照组相比差异不显著（P>0.05）。静止期从不同部位引入外源物质后，乳腺及乳腺非引流淋巴结内肥大细胞数均减少，而乳腺引流淋巴结内的肥大细胞数则随引入部位不同而有差别：乳腺引入时增加，而脚掌引入时减少。本研究结果表明肥大细胞数量随生理周期的改变而增减的趋势与乳腺的发育、乳腺局部免疫状态及内分泌调节都有关系，而且不同泌乳阶段乳腺内肥大细胞对异物的易感性也存在差异。

富硒麦芽对二乙基亚硝胺致肝癌大鼠低血糖症及相关体液调节因子动态变化的影响

刘家国;赵洪进;刘艳娟;王小龙

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 288-293. doi:

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雄性SD大鼠193只，体重100~120 g，随机分成5组。组I~组III，日粮中添加富硒麦芽至硒含量分别为0.3，1.0，3.0 mg/kg；组IV，模型组；组V，阴性对照组，不加硒也不诱癌，日粮中分别添加亚硒酸钠至硒含量达0.1 mg/kg。组I~组IV，饮水中添加二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN，100mg/L）诱癌，维持DEN摄入量每天约10 mg/kg体重连续16周，然后改饮普通灭菌水至18周末。组V始终以普通灭菌水自由饮用。每4周眼眶采血1次，测定血浆葡萄糖及其相关体液调节因子胰岛素、胰高血糖素、胰岛素样生长因子-II (IGF-II)等的含量，统计胰岛素/葡萄糖（IGR1）、胰岛素/胰高血糖素（IGR2）、胰高血糖素/葡萄糖（GGR）值。分析血糖与各相关调节因子间的相关性。结果发现，与同期阴性对照组相比，各诱癌组大鼠血糖和血清胰岛素、胰高血糖素水平及GGR值均显著下降，血清IGF-II水平和IGR2值则显著上升，而某些剂量的富硒麦芽能有效地抑制血糖、胰高血糖素水平的下降和血清IGF-II水平、IGR2值的上升。血糖与上述各调节因子间分别存在显著相关性。表明：富硒麦芽能抑制肝癌大鼠低血糖症的发生，该作用可能是通过对诸多相关调节因子的共同调节而实现的。

己酮可可碱和血小板激活因子对冷冻保存的大熊猫精子受精能力的影响

张明;鲜红;侯蓉;郑鸿培;朱庆

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 294-300. doi:

摘要 ( 1242 )

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在Ham’s F-10培养液中，添加了不同剂量的己酮可可碱(PF)或血小板激活因子(PAF)，与大熊猫冷冻保存后解冻的精子在37℃水浴中孵育，通过测量孵育不同时间精子的活力、存活时间、顶体反应率、质膜完整率和异种穿卵率，来探讨PF、PAF对大熊猫冷冻精子体外受精能力的影响，结果显示：己酮可可碱、血小板激活因子均能影响大熊猫冷冻精子体外受精能力。其中：己酮可可碱以1mg/mL处理剂量对提高大熊猫冷冻精子体外受精能力效果较好，总存活时间达15.33±4.73h，培养4h 时体外异种穿卵率达51.44%，培养6h时体外异种穿卵率为7.49%，与对照组差异极显著（P＜0.01()，并优于其它处理组；PAF 50ng/mL处理剂量下的各质量评估指标优于100ng/mL处理，但用PAF处理精液的时间超过2h后即引起精子质量的显著下降。

鸡胚原始生殖细胞（PGCs）玻璃化冷冻的研究

韩威;李碧春;陈国宏;秦洁;朱云芬;周冠月;张学余

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 301-306. doi:

摘要 ( 1838 )

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对发育至第19期和第28期鸡胚性腺原始生殖细胞（primordial germ cells ，PGCs），用六种玻璃化冷冻液I：10%DMSO+10%EG+10%PVP，II：20%EG+10%PVP，III：20%DMSO+10%PVP，IV：10%DMSO+10%EG+0.5mol/LSurcose，V：20%EG+0.5mol/LSurcose，VI：20%DMSO+0.5mol/LSurcose进行冷冻保存。结果：第19期鸡胚PGCs玻璃化冷冻复苏后存活率，在冷冻液II与IV之间差异不显著（P>0.05），V与VI之间差异显著（P <0.05），其余各冷冻液之间差异均极显著（P <0.01）。第28期鸡胚PGCs玻璃化冷冻复苏后存活率，在冷冻液IV与V之间差异显著（P <0.05），III与IV、V之间差异不显著（P >0.05），II与III、IV之间差异不显著（P >0.05），其余各玻璃化冷冻液之间差异均极显著（P <0.01）。复苏后接种培养传至第2代的鸡胚PGCs细胞，PAS染色、AKP染色呈阳性并保持完整的二倍体核型。目的：克服慢速冷冻法保存PGCs过程中需长时间平衡和逐渐降温的缺点，建立快捷的玻璃化冷冻保存法，进而为禽类遗传资源多样性的保存提供另一途径，为PGCs体外操作提供细胞来源。

马白细胞介素18成熟蛋白（mEIL-18）基因在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化

童铁钢;刘光亮;白宇;肖一红;王群;李少英;孟庆文;吴东来

畜牧兽医学报, 2007, 38(3): 307-312. doi:

摘要 ( 716 )

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用RT-PCR从经ConA刺激的马外周血单个核细胞(PBMC)中扩增出马白细胞介素18( Equine interleukin-18, EIL-18 ) 前体蛋白( precursor EIL-18 , pEIL-18 ) 基因的cDNA，然后克隆至载体pCR2.1-TOPO中，鉴定并命名为pCR2.1-pEIL-18。自pCR2.1-pEIL-18中扩增马白细胞介素18 成熟蛋白( mature EIL-18, mEIL-18 ) 基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达及其表达产物纯化。结果表明，mEIL-18 基因全长474bp，含1个开放阅读框，编码157个氨基酸的成熟蛋白；表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，经SDS-PAGE和Western-blot分析，重组蛋白相对分子量约为20ku，且具有免疫生物学活性。mEIL-18基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下采用Ni+亲和层析纯化方法获得了高纯度的重组mEIL-18,为探究马白细胞介素18的生物学活性及其应用奠定了基础。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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