畜牧兽医学报

中国部分山羊品种线粒体DNA D－loop序列遗传多样性分析

刘益平;曹少先;傅泽红;徐敏;刘铁铮

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 313-320. doi:

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分析了中国部分本地山羊品种（18个品种200个个体）以及在中国饲养的引入品种（4个品种25个个体）线粒体DNA控制区（D-loop）的全序列，结合已报道的世界其它地方的山羊（15个品种77个体）以及2只野山羊的线粒体DNA控制区（D- loop）全序列共304个个体，分析结果表明：山羊线粒体DNA控制区约为1 212bp，检测到228个变异位点，203种单倍型，单倍型多样度为0.993±0.001；核苷酸多样度0.018±0.001。中国部分山羊的变异类型主要为类型A和B，而在巴基斯坦山羊中还检测到类型C和D。比较分析结果表明中国山羊遗传多样性和基因交流比中国黄牛品种要高。

牛Smad4基因cDNA克隆及生物信息学分析

张小辉;张路培;许尚忠;陈金宝;高雪;任红艳

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 321-325. doi:

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Smad4基因在TGF-ß细胞内信号传导过程中起重要作用，通过生物信息学方法，结合RT-PCR技术和SMART RACE技术，对牛Smad4基因进行了克隆，得到了3 503bp cDNA全长并向GenBank递交了该序列，登录号：DQ494856。通过核酸序列分析发现，牛Smad4基因由12个外显子组成，编码553个氨基酸。该基因与绵羊、猪、人、大鼠和小鼠在核酸序列上分别有99％、96％、95％、91％、91％的同源性；在氨基酸序列上分别有99％、98％、98％、99％和98％的同源性，牛Smad4基因的组织表达谱很广，在睾丸、胰腺、肝、小肠、卵巢、淋巴、心肌、骨骼肌、胸腺组织中都有表达。

荷斯坦奶牛STAT5A基因的SNPs检测及其与产奶性状的关联分析

何峰;孙东晓;俞英;王雅春;张沅

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 326-331. doi:

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根据GenBank公布的牛STAT5A基因的2个SNPs（AJ237937和AF079568）的引物序列，采用PCR-SSCP方法对758头中国荷斯坦奶牛进行了STAT5a基因多态性检测，并将其与5个产奶性状进行了关联分析。在SNP1的9501碱基处发现A→G突变；SNP2中发现2个连锁点突变，即12440位T→C和12550位的CCT插入/缺失；方差分析结果表明：SNP1对乳蛋白率有显著影响（P<0.05）；SNP2对产奶量有极显著影响（P<0.01），对乳脂量、乳蛋白量有显著影响（P<0.05）；单倍型组合对产奶量和乳蛋白量有极显著影响（P<0.01），对乳脂量有显著影响（P<0.05）。多重比较分析表明SNP2 的AB基因型的产奶量、乳脂量和乳蛋白量的最小二乘均数极显著（P<0.01）或显著（P<0.05）高于基因型AA；而单倍型组合H1H2的产奶量、乳脂量和乳蛋白量的最小二乘均数显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于其它4种单倍型组合；H3H4对产奶量和乳蛋白量的效应极显著高于其它4种单倍型组合(P<0.01)。结果提示：STAT5A基因可以作为奶牛产奶性状的候选分子遗传标记。

奶牛TLR2基因遗传变异与乳房炎体细胞评分的相关研究

马腾壑;许尚忠;王兴平;高雪;任红艳;陈金宝

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 332-336. doi:

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选用中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛共207头奶牛为研究对象，采用PCR-RFLP和创造酶切位点RFLP（CRS-RFLP）技术对其TLR2基因进行多态性研究，发现TLR2基因第2外显子上T/G，G/A和G/A 3个突变，分别是EcoRⅤ，HaeⅢ和HhaⅠ限制性内切酶的酶切多态位点，其中T/G突变引起蛋白质氨基酸天冬氨酸/谷氨酸的变化。对3个酶切多态位点进行基因型分析，χ2检验表明：中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛在3个酶切多态位点都达到了Hardy-Weinberg平衡。中国西门塔尔牛在3个酶切多态位点PIC为最高。运用SAS9.0软件，采用最小二乘拟合一般线性模型分析了3个酶切多态位点与中国荷斯坦奶牛、三河牛和中国西门塔尔牛体细胞评分（SCS）的关系，结果表明：在这3个酶切多态位点中，只有EcoRⅤ酶切多态位点BB基因型个体的SCS显著低于AA和AB基因型个体（P<0.05），说明BB基因型可能为抵御乳房炎的有利基因型。

用生物经济模型对我国不同类型猪场的模拟研究 ——模型的构建和初步结果

郑华;吴常信

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 337-343. doi:

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根据我国当前养猪生产繁育体系，将我国集约化养猪生产概括为5类典型猪场，并利用农场模型的方法，构建了不同类型猪场的生物经济模型，并考虑了模型的生物学效率。模拟的600头母猪的商品猪场、猪苗场、杂种扩繁场、杜洛克育种场和长白（或大约克）育种场每年总利润分别为56.01万元、12.99万元、100.53万元、134.09万元和164.10万元，净能利用效率分别为27.69 MJ/kg、32.98 MJ/kg、28.25 MJ/kg、28.32 MJ/kg和28.48MJ/kg。模型还输出了不同类型猪场的成本结构、收入组成和生产综合指标。对模型的敏感度分析表明，模型对不同市场形势、生产水平和管理措施变化的反应是灵敏的。

鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体库的构建

王乃东;薛立群;许道军;袁安文;邓治邦

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 344-351. doi:

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利用雄鼠脾细胞免疫6～7周龄C57BL/6雌鼠，加强免疫后取脾细胞，TRIZOL 法提取细胞总RNA，并逆转录合成cDNA第一条链。以其为模板，利用特异性Ig基因的引物PCR扩增出重链Fd片段和κ链基因，并将扩增出基因重组到噬质粒载体pComb3中，重组噬质粒转化大肠杆菌XL1-Blue中，分别构建κ链基因库和抗体Fab段基因库。分别经蓝白斑筛选，计算转化效率，通过PCR反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率，轻链、重链Fd段基因的重组率均为80%。抗体Fab段基因库经过辅助噬菌体VCSM13超感染，成功构建了鼠源性噬菌体Fab抗体库，并测定噬菌体抗体库的库容和滴度，结果分别为1.5×107，3.2×1011 pfu/mL。对噬菌体抗体库的18个克隆进行ELISA分析, 结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时，有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体，而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时，有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体Fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。

RNAi表达载体对avUCP基因表达的抑制作用

仲明;张宏福;董枫岚;王润平;刘燕;刘维全;杨琳

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 352-355. doi:

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研究RNA干扰（RNA interference, RNAi）表达载体对UCP基因的抑制作用。针对鸡解耦联蛋白（avian uncoupling protein，avUCP）基因，构建4种RNAi质粒表达载体（分别称为A、B、C和D号载体）。再经过脂质体法转染成肌纤维，应用荧光定量PCR及流式细胞术检测其对avUCP mRNA及蛋白表达的影响。构建的4种表达载体均抑制了avUCP的mRNA及蛋白的表达，其中转染C号载体的成肌纤维细胞avUCP mRNA表达相当于空白对照组的14.6%，蛋白抑制率达93.7%。RNAi表达载体可以有效的抑制avUCP基因的表达。

添喂葵花籽油对山羊瘤胃消化代谢与瘤胃液脂肪酸组成的影响

王喜乐;沈向真;杨俊花;陈秀霞;王小静;陈杰

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 356-361. doi:

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为研究亚油酸底物葵花籽油对山羊瘤胃消化代谢和瘤胃液脂肪酸组成的影响，以5只装有永久性瘤胃瘘管的雌性成年徐淮白山羊为试验动物，采用自身对照设计，对照期和试验期（添喂葵花籽油7mL/d）各15d，低精料日粮常规饲养。每期结束后采集瘤胃液进行分析。结果表明，添喂葵花籽油后，瘤胃液pH无显著变化；而氨氮（NH3-N）水平和TVFA显著升高（P<0.05）；乙、丙酸含量显著增加（P<0.05），而乙、丙、丁酸比例（C2 + C4）/ C3比值和微生物粗蛋白（MCP）均无明显变化；C18:1和c9，t11-CLA（P<0.05）浓度均明显升高。表明在山羊日粮中添加一定量的葵花籽油，可在不改变瘤胃发酵类型和不影响瘤胃微生物本身的情况下促进瘤胃消化代谢，调节瘤胃液脂肪酸组成。

双肌肉皮埃蒙特牛胴、分割肉特点与市场发展方向

曹兵海;孙宝忠;李海鹏;陈幼春

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 362-368. doi:

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皮埃蒙特牛作于1986年为具有双肌肉特征的牛引入中国后与当地牛杂交表现出父本的双肌肉显性特征，在胴体分割上，如肩胛部、背通脊部、臀尻部，及分割肉最佳部位，如T-骨排、前腰脊、后腰脊、上脑、胛后肉都特别发达，呈现出一个不用借其他相邻肌块，由本肌块完整切块就可以加工成足够成为独立切块的特征，如米龙肉可做软菲力、后腿眼肉可开发精细牛排等，而提供高价部位肉和切块肉。在中国东方式和西方式牛肉餐饮业都在发展中，皮埃蒙特牛胴兼有分割为日式和欧美式两种牛胴肉的优点，并生产高档和高价位切块。目前制订适用于东方和西方餐饮业牛胴分割的国家标准很有必要，而且已经具备条件。

伪狂犬病毒UL14基因缺失突变株的构建及其生物学特性研究

张辉;方六荣;赵骞;薛念波;江云波;肖少波;陈焕春

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 369-375. doi:

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UL14在α-疱疹病毒中相当保守，但其在伪狂犬病毒中的功能尚不清楚。本研究以伪狂犬病毒鄂A株（PRV-Ea）为亲本株，通过同源重组，将编码EGFP的真核表达盒插入到伪狂犬病毒基因组的UL14基因中，PCR检测和荧光观察证实获得了能稳定表达EGFP的UL14插入失活突变株PRV-UL14D。将PRV-UL14D感染IBRS-2，发现该突变株较PRV-Ea野毒株增殖缓慢，而且PRV-UL14D突变株感染细胞后形成的蚀斑也明显小于PRV-Ea野毒株，但在稳定表达UL14的IBRS-2细胞系中，PRV-UL14D与PRV-Ea野毒株的增殖速度、形成的蚀斑大小均无明显差异。进一步将PRV-UL14D感染BALB/c小鼠，发现与相同剂量的PRV-Ea野毒株感染相比，小鼠平均死亡时间明显延缓。上述研究结果表明，UL14并非伪狂犬病毒增殖必需的，但其缺失可延缓病毒增殖，推测UL14可能与病毒粒子在细胞间的扩散有关。

猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

赵战勤;吴斌;向敏;胡睿铭;陈利苹;杨明柳;金梅林;陈焕春

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 376-381. doi:

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通过生化试验、药敏试验、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离的猪源链球菌进行药物敏感性、血清型和分子流行病学初步研究。从不同省份猪链球菌病疑似病例猪的心血、肝、淋巴结、脑和关节液组织分离出97株链球菌，药敏试验结果表明各菌株对13种抗菌素的耐药谱不同，但对先锋霉素V和环丙沙星的耐药率均低于5℅。通过对分离菌株进行PCR鉴定和分型，确认26株为猪链球菌，其中1株为1型，16株为2型，4株为7型，没有9型，另5株为其它型。进一步对1型、2型和7型猪链球菌mrp、epf和sly 3种毒力基因的分布情况进行了PCR检测。动物试验表明能100℅致死小白鼠的猪链球菌基因型均为epf+mrp+sly+2型猪链球菌，1株2型和1株7型猪链球菌均能复制出典型的猪链球菌病例。

PRRSV和PCV2共感染对猪肺泡巨噬细胞细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ mRNA转录的影响

李焕荣;杨汉春;郭鑫;施开创;盖新娜;陈艳红;查振林

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 382-387. doi:

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用猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV2）共感染40日龄健康仔猪，利用实时荧光定量PCR技术对共感染仔猪肺泡巨噬细胞（PAM）细胞因子IL-10、IL-12p40和IFN-γ的mRNA转录水平的变化进行了定量分析。结果表明，IL-12p40 mRNA 转录从3d开始显著上调（P<0.05），7d达高峰，14d开始下降但仍显著高于对照组，28d和42d低于对照组；IL-10 mRNA在 3d显著上调（P<0.05），14d达到转录高峰（P<0.01），之后逐渐下降，42d接近对照组水平；IFN-γ mRNA 转录水平尽管在3d和28d时出现两次转录低峰，14d和42d时出现两次高峰，但只在3d和7d差异显著（P<0.05）。由此表明，PRRSV和PCV2共感染可导致PAM细胞因子IL-12p40和IL-10 mRNA的转录在感染早期被激活，而IFN-γ mRNA转录则表现较复杂的动态变化，提示PRRSV和PCV2共感染猪PAM的免疫应答、免疫调节和抗感染功能均受到不同程度的影响。

猪CD58分子基因克隆、表达及其结构功能预测

窦永喜;景志忠;侯俊玲;骆学农;张强;刘奇;左志林;才学鹏

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 388-394. doi:

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CD58在机体免疫系统中具有重要作用，本研究通过对人、绵羊CD58 mRNA序列比对，设计兼并引物，应用反转录PCR技术克隆猪CD58基因并在大肠杆菌中进行原核表达，同时运用生物信息学方法对其核苷酸序列、编码的氨基酸序列以及蛋白结构进行预测。结果表明：克隆的猪CD58 cDNA全长为800bp，ORF为735bp；将其在大肠杆菌中进行表达，产物可被CD58抗血清识别；序列比对结果显示猪、羊和人的CD58核苷酸序列及氨基酸序列同源性并不高，但蛋白结构预测表明三者蛋白结构非常相似，尤其是V区三维结构，这是异种动物淋巴细胞和红细胞发生黏附的分子基础。该研究为CD58作为疫苗佐剂或免疫调节药物在临床中的应用、进一步研究CD58分子结构及CD2-CD58复合物激活免疫系统的机理奠定了基础。

基于RNA复制子GHRH基因表达载体的构建及在293细胞中的表达

任晓慧;乔继光;刘松财;张明军;章倩倩;侯峰;吕铁钢;周立光;吴琼;欧阳松应;张永亮

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 395-399. doi:

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本研究将GHRH基因克隆到塞姆利基森林病毒（SFV）复制子质粒型表达载体pCMV-Rep-lacZ，构建了真核表达载体pCMV-Rep-GHRH。采用脂质体介导将表达质粒pCMV-Rep-GHRH转染293细胞，经RT-PCR、IFA、Tricine-SDS-PAGE和Western Blot检测，证明表达质粒pCMV-Rep-GHRH在293细胞中正确地表达了GHRH多肽分子。本研究还利用放免法检测质粒载体转染细胞培养上清中GHRH浓度，初步比较了RNA复制子载体pCMV-Rep-GHRH和普通载体（pIRES-GHRH和pCDNA3-GHRH）的表达效率，结果表明，转染后48h，RNA复制子载体表达GHRH的含量显著高于普通载体，分别比pIRES-GHRH和pCDNA3-GHRH高出36.12%（P<0.05）和67.94%（P<0.05）。结论：构建的真核表达载体pCMV-Rep-GHRH能够在真核细胞293中表达GHRH多肽分子，且表达水平显著高于普通载体，为下一步更好地调控动物生长以提高动物生产性能打下基础。

凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊染色体畸变研究

李小勤;吴登俊;陈圣偶;冷向军

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 400-406. doi:

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以凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊为研究对象，以微量全血培养法制备染色体，经对大量分裂相的分析得出如下结果：凉山半细毛羊、山谷型藏绵羊二倍体细胞核型均为公羊2n=54，XY，母羊2n=54，XX；两品种羊染色体数目变异频率分别为33.00%，32.25%；结构变异频率分别为12.00%，17.60%，染色体结构变异主要表现为染色体断裂、染色单体臂断裂及着丝粒处变异等；将染色体或染色单体断裂位点与Ag-NoRs特殊位点作比较发现部分位点间存在一一对应情况；同源染色体不等长现象在两品种羊中均有发现，且凉山半细毛羊较山谷型藏绵羊明显。

应用端粒酶逆转录酶基因使猪血管内皮细胞永生化的初步研究

苏正元;张彦明;洪海霞;刘建玲

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 407-411. doi:

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为寻求使猪主动脉血管内皮细胞增殖寿命延长的方法，本试验将含有的人类端粒酶催化亚基端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase, hTERT)基因的真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过脂质体介导法导入猪主动脉血管内皮细胞(porcine arterial endothelial cell , PAEC)。对转染后的血管内皮细胞进行Ⅷ因子和CD34鉴定，利用PCR-ELISA方法检测hTERT导入后细胞端粒酶活性表达情况，探讨了转染后细胞的生长特性。结果显示，转染后的细胞Ⅷ因子和CD34均呈阳性，证明转染后细胞仍表达血管内皮细胞的特异性蛋白；导入hTERT后, 细胞有较高的端粒酶活性, 增殖寿命较对照细胞延长了20代。表明hTERT导入细胞能重建细胞端粒酶活性, 从而延长细胞在体外培养的寿命。

猪内源性反转录病毒囊膜蛋白基因的克隆及其蛋白二级结构和B细胞表位预测

吴健敏;孙建华;吕茂民;陈忠伟;阳玉彪;赵武;陈凤莲;黄红梅;章金刚

畜牧兽医学报, 2007, 38(4): 412-416. doi:

摘要 ( 749 )

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猪内源性反转录病毒(PERV)是与猪-人异种移植病原安全性密切相关的一类病毒。env基因编码病毒的囊膜蛋白，它与病毒的亚型分类、宿主感染范围、细胞的嗜性以及对宿主细胞的感染机制、诱导宿主产生中和抗体等密切相关。本研究利用RT-PCR的方法，从五指山小型猪外周血淋巴细胞中，扩增PERV的囊膜蛋白基因并进行测序，随后以生物信息学相关软件和方法，对PERV-Env蛋白二级结构及B细胞表位进行预测。经综合分析评价，结果发现PERV-Env蛋白有18个可能的B 细胞优势抗原表位区域，7个可能的糖基化位点。该分析预测结果不但有利于PERV疫苗的设计、单抗及诊断试剂研制，而且将有助于分析Env蛋白的功能及PERV对人源细胞的感染机制。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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