畜牧兽医学报

猪RBP2和CRABP2基因的定位、组织表达谱分析、单核苷酸多态性研究及其关联分析

公维华;唐中林;杨述林;崔文涛;李奎

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 881-887. doi:

摘要 ( 1460 )

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利用法国农业科学院－明尼苏达大学的辐射杂种克隆板（IMpRH），将猪细胞视黄醇结合蛋白基因2（RBP2）和细胞视黄酸结合蛋白基因2（CRABP2）分别定位在猪13、4号染色体上。利用RTPCR方法，克隆到了CRABP2的CDS全长。利用半定量的RT-PCR方法，对RBP2和CRABP2基因在成年五指山猪12种不同组织（肺、骨骼肌、脾、心脏、胃、大肠、淋巴结、小肠、肝、大脑、肾、脂肪）中的组织表达谱进行了研究。在这两个基因中共检测到了4个单核苷酸多态位点。在RBP2-C117T多态位点，利用基于聚合酶链式反应的限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法，对其在莱芜黑猪、五指山小型猪、贵州小型猪、广西巴马小型猪和通城猪群中的分布进行了研究。在通城猪群中，进行了不同基因型与性状间的关联分析，发现其不同的基因型与肌肉大理石纹评分、肌肉嫩度高度相关。在猪的生产和育种中，这一多态位点可能会成为有用的分子标记。

牛催乳素受体(PRLR)基因HinfⅠ多态性与奶牛生产性能相关性研究

张佳兰;昝林森;申光磊

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 888-892. doi:

摘要 ( 2060 )

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采用PCR-RFLP方法检测了牛催乳素受体（PRLR）基因intron 8多态性。结果表明：中国荷斯坦牛、加拿大荷斯坦和澳洲荷斯坦牛群体中Hinf Ⅰ酶切后均有A和B两个等位基因存在。利用最小二乘分析研究了该多态位点对奶牛305 d产奶成年当量、乳脂肪率、乳蛋白率、初次配种日龄和初次产犊日龄的影响。结果表明：不同基因型个体的乳脂率、初次配种日龄和初次产犊日龄的差异均未达到显著水平，但呈现出AA>AB>BB的趋势。BB型个体的305 d成年当量与AA型、AB型个体有显著差异（P<0.05），BB型个体的乳蛋白率与AA型、AB型个体有极显著差异（P<0.01）。对305 d成年当量、乳脂肪率、乳蛋白率、初次配种日龄和初次产犊日龄A基因的加性效应分别为296.00 kg/胎次、0.08%、-0.14%、4.55 d/头、15.10 d/头，A等位基因的显性效应为259.80 kg/胎次、0.07%、-0.10%、0.95 d/头和4.90 d/头。

牛FABGL基因的分离与染色体RH定位

马云;高雪;任红艳;许尚忠;张英汉;辛亚平;高树新

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 893-898. doi:

摘要 ( 822 )

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以中国西门塔尔牛血样为材料，提取基因DNA，运用同源序列克隆技术对牛FABGL基因DNA序列进行了克隆与分析，应用SUNbRH7000型辐射杂种板（RH）对分离的牛FABGL基因进行了染色体定位。结果显示，本研究所获得的长为1 925 bp的DNA序列为牛FABGL基因的包含全部9个外显子的基因组序列。该序列与人(NM- 014234 )和猪(AF-146398 )的FABGL基因序列的相似性分别为84%和90%；牛FABGL基因被定位于牛的23号染色体上，与该染色体上的标记BM47的距离为1.71 cR，两点评分值为31.05。

绿头野鸭与我国主要地方鸭品种遗传多样性研究

苏瑛;陈国宏;龙瑞军;万江虹;马龙

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 899-906. doi:

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利用17个微卫星标记,采用PCR扩增,8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,对绿头野鸭种群和我国9个主要地方鸭品种的遗传多样性进行了检测,统计了各群体的平均有效等位基因（Ne）、平均遗传杂合度（H）、多态信息含量（PIC）、群体间的遗传距离（Ds）和相似系数（I）。采用UPGMA和NJ法构建系统发生树。结果表明：17个微卫星座位在绿头野鸭种群和我国9个主要地方鸭品种中的多态信息含量均为高度多态,所有鸭种的平均PIC、H、Ne分别为0.650 6、0.689 6、4.1±1.5,基因多态性和遗传多样性相对较高;家鸭各品种间的遗传距离在0.163 1～0.684 4范围内,绿头野鸭与家鸭品种间的遗传距离分别在0.309 6～0.821 9之间。根据系统发育树推断中国主要地方鸭品种不是单一起源于绿头野鸭。中国主要地方鸭品种大致可以分为5支。一支为北京鸭、荆江鸭，一支为中山鸭、建昌鸭及高邮鸭，一支为靖西大麻鸭和金定鸭，连城鸭为一支，绍兴鸭为另一支。

鸭生长激素(GH)基因编码区及调控区多态性分析

许盛海;包文斌;程金花;黄军;张红霞;陈国宏

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 907-912. doi:

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根据鸭生长激素基因编码区及调控区的序列设计8对引物,利用PCRSSCP方法对北京鸭、西湖野鸭、樱桃谷鸭、金定鸭、山麻鸭、荆江鸭、绍兴鸭、缙云麻鸭等8个鸭种进行单核苷酸多态性分析。结果共发现3个突变位点，分别为230处(C→G)、244处(C→A)和3 701处(C→T)。前两处突变位于5′调控区，3 701处突变位于编码区第4外显子,但该编码区的突变是沉默突变，3′调控区表现了高度的保守性。统计结果发现：⑴在5′调控区基因座上，金定鸭的等位基因B频率显著高于其他品种；⑵在外显子4基因座上，基因型频率的分布与品种有关，且肉用型鸭的CC基因型频率显著高于蛋用型。可以推测,本研究所检测到的基因座可能与生产性能相关。

鹅黑素皮质素受体-4基因的克隆与序列分析

张同燕;陈宏权;梁忠;李艳和;甘小伟

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 913-919. doi:

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黑素皮质素受体-4（Melanocortin receptor-4，MC4R）是其黑素皮质素受体MCR（MC1-5R）家族成员之一，属G蛋白偶联受体。它可与瘦蛋白、神经肽、α-黑素细胞刺激素等一起调节动物体重和采食量。参考鸡MC4R基因序列设计引物，克隆并测序了鹅MC4R基因。结果表明，鹅MC4R基因编码区全长996 bp，其核苷酸序列与鸡的同源性为95.3%，与人、牛、猪等哺乳动物同源性在75%~79%；其氨基酸序列与鸡的同源性达到98.5%。构建哺乳类、鸟类和鱼类MC4R基因核苷酸进化树显示，鹅较早地与哺乳类动物分化开来。分析MC4R蛋白的氨基酸残基特性参数表明，MC4R的7次跨膜结构与MC4R的亲水性区域、电荷密度以及氨基酸残基位于表面概率的变化规律相一致。

高效氯氰菊酯通过ERK1/2影响小鼠睾丸睾酮合成

王鲜忠;吴建云;孙燕;罗英;李冠华;袁遵雪;王曦鸣;张家骅

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 920-925. doi:

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为了阐明氯氰菊酯（CP）影响睾酮合成的机制，本研究以成年SPF昆白小鼠为试验动物，通过连续7 d灌喂不同浓度的高效氯氰菊酯（β-CP），采用RT-PCR、Western blot和放射免疫分析技术分析了β-CP对睾丸重量、血浆类固醇水平、类固醇合成酶、StAR蛋白以及ERK1/2活性的影响。结果显示：随着β-CP浓度的增加，小鼠睾丸的重量无明显变化，但小鼠血浆睾酮的水平逐渐降低； P450sccmRNA、3 β-HSDmRNA和StAR mRNA的水平则无明显变化，而P450 c17 mRNA的表达明显下降； StAR蛋白的水平也呈下降趋势，但ERK1/2活性则逐渐升高。以上结果表明，β-CP通过激活ERK1/2而级联抑制P450 c 17 mRNA的转录和StAR前体蛋白的裂解，从而降低睾酮的合成。

玉米秸秆不同部位碳水化合物组分体外发酵动态分析

薛红枫;闫贵龙;孟庆翔

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 926-933. doi:

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通过体外产气曲线相减法来评价“农大108”玉米秸秆7个部位，即叶片（Leaf blade，LB）、叶鞘（Leaf sheath，LS）、茎皮（Stem bark，SB）、茎髓（Stem pith，SP）、茎节（Stem node，SN）、全株（Whole stalk，WS）和苞叶（Ear husk，EH）碳水化合物组分（A、B1、B2和NDS）体外动态发酵情况。结果表明，玉米秸秆不同部位之间碳水化合物含量存在着极显著差异（P < 0.000 1）。碳水化合物组分A 含量由高到低的顺序为茎皮>茎节>叶片>全株>叶鞘>苞叶>茎髓；碳水化合物组分B1含量由高到低顺序为苞叶>叶鞘>全株>茎节>叶片>茎髓>茎皮；碳水化合物组分B2含量以茎髓最多，茎皮最少。这三个组分各部位产气量高低顺序也与其含量一致。碳水化合物组分中性洗涤可溶物（Neutral detergent soluble, NDS）含量以茎皮、茎节中含量最高，茎髓最少，但其产气量却以茎节最高，苞叶次之，茎髓最少。提示应用产气曲线相减法能够有效地评价玉米秸秆中各部位碳水化合物各组分的动态发酵情况。

日粮能量水平对生长育肥猪肌内脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的影响

刘作华;杨飞云;孔路军;周晓容;辜玉红;王孝友

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 934-941. doi:

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选择初始体重约20.7 kg的长白×荣昌杂交猪72头，随机分为3组，研究日粮能量水平对肥育猪肌内脂肪含量的影响及其与脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的关系。日粮的消化能分别为11.75 MJ／kg(低能组) 、13.05 MJ／kg(中能组) 、14.36 MJ／kg(高能组) 。试验猪体重达到100 kg时，进行屠宰。结果表明：①提高日粮能量水平，对猪的日增重、日采食量没有显著影响(P>0.05)，但提高了饲料转化率(P<0.05)，缩短了育肥时间(P<0.05)，增加了背膘厚、外周脂肪和肌内脂肪含量(P<0.05) ；②14.36 MJ/kg的能量水平提高了背膘中脂肪酸合成酶mRNA的表达(P<0.05)，降低了激素敏感脂酶mRNA的表达，从而增加了背膘中肌内脂肪酸合成酶与激素敏感脂酶mRNA 的比值；③日粮能量水平与肌内脂肪含量、脂肪酸合成酶mRNA丰度以及脂肪酸合成酶与激素敏感脂酶mRNA的比值呈显著正相关(P <0.05) ，脂肪酸合成酶与激素敏感脂酶mRNA比值和肌内脂肪含量也呈显著正相关(P <0.05) ，激素敏感脂酶mRNA表达量与能量水平呈极显著负相关(P <0.01) ，与肌内脂肪含量呈显著负相关(P <0.05) 。本研究表明，提高日粮能量水平能增加脂肪沉积；能量水平影响脂肪(尤其是肌内脂肪)沉积可能是通过调节脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶两种酶mRNA表达量实现的，而不是单独调节其中之一实现的。

用间接免疫荧光染色法检测鸭病毒性肠炎病毒在人工感染鸭体内的侵染过程和分布规律

程安春;韩晓英;汪铭书;袁桂萍;徐超;廖永洪

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 942-946. doi:

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用鸭病毒性肠炎病毒（DEV）CHv强毒株感染成年鸭复制鸭病毒性肠炎急性病例，分别于接种后不同时间，取心、肝、脾、肺、肾、胸腺、食道、十二指肠、胰腺、法氏囊和脑组织，制作切片，应用间接免疫荧光染色法（IFA）检测DEV在鸭体内的侵染过程和分布规律。结果显示：感染后4 h可在脾脏、胸腺和法氏囊中检测到DEV抗原；感染后6 h可在肝脏、食道、十二指肠、直肠及肺脏检测到DEV抗原；IFA对各组织器官中DEV的平均检出率为肝脏46/50、脾脏48/50、肺脏46/50、肾脏0/50、肠道46/50、法氏囊46/50、胸腺47/50、胰腺0/50、大脑0/50、食道44/50、心脏0/50。研究表明：在急性病例中，脾脏、法氏囊、胸腺、食道、肠道、肝脏和肺脏为DEV的主要靶器官；接种后，病毒首先在脾脏、胸腺、法氏囊中出现，然后病毒迅速传播到肝脏、消化道和肺脏中；IFA检测石蜡切片中DEV的方法具有直观、特异性强的优点，是对DEV进行检测和抗原定位的较好方法。

基于18S rRNA和HSP70基因序列的隐孢子虫种系发育分析

王进产;菅复春;张龙现;宁长申;闫文朝;孙铭飞;仇书兴;卢庆斌

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 947-953. doi:

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为阐明河南区域隐孢子虫分子流行病学特点，用PCR技术扩增分离虫株的18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列，并对扩增片段进行测序。用PAUP 4.0和TREEPUZZLE 4.1构建进化树，试图从分子水平证明河南省不同地区不同宿主来源隐孢子虫的遗传特征，以阐明隐孢子虫病的分子流行病学特点。通过18S rRNA基因全序列和HSP70基因序列分析，其结果：河南人源隐孢子虫分离株为Cryptosporidium parvum鼠基因型；河南鹿源隐孢子虫分离株为C. parvum鹿基因型；河南猪源隐孢子虫的2个分离株均为C.parvum猪基因I型，即C. suis；河南鹌鹑源的隐孢子虫2个分离株分别为C. baileyi和C. meleagridis；河南乌鸡源隐孢子虫和鸵鸟源隐孢子虫分离株均为C. baileyi；河南牛源隐孢子虫分离株为C. andersoni。

捻转血矛线虫免疫调节型DNA疫苗的构建及在山羊体内表达研究

严若峰;赵光伟;徐立新;孙延鸣;李祥瑞

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 954-958. doi:

摘要 ( 831 )

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为构建免疫调节型DNA疫苗，将山羊IL2基因分别与捻转血矛线虫H11-1、H11-2和H11-3基因串联构建融合表达载体pcDNA/IL-2-H11-1、pcDNA/IL-2-H11-2和pcDNA/IL-2-H11-3。为检测疫苗在山羊体内的表达情况，将纯化的疫苗质粒肌肉注射山羊后取注射部位肌肉组织，于首次免疫7 d后和二次免疫10 d后分别用RT-PCR和Western Blot等方法检测H11抗原的转录和翻译情况。结果发现H11基因和IL-2基因均能在注射部位肌肉获得转录和翻译。

雌激素对去卵巢大鼠小脑ER、ChAT、NGF表达的影响

罗启慧;陈正礼;范光丽

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 959-965. doi:

摘要 ( 827 )

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本研究旨在探讨雌激素对大鼠小脑内雌激素受体（ER）、神经生长因子（NGF）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）表达的影响。建立去卵巢SD大鼠模型，以小脑为研究对象，运用免疫组织化学SP法，通过补充17β-雌二醇对ER、NGF和ChAT在小脑中的表达和分布变化进行研究。结果表明： ER、NGF和ChAT免疫阳性反应物在小脑皮质主要分布于蒲肯野氏细胞，而在小脑核中主要定位于小脑顶核、间位核和齿状核；ER阳性产物主要定位于细胞质和突起中，也存在于胞膜和胞核中。去卵巢大鼠小脑中3种阳性物质的表达强度及阳性细胞数量总体呈显著降低趋势，在补充17β－雌二醇后，3种阳性物质的表达强度和阳性细胞数目显著回升。本试验证实雌激素可促进小脑中NGF和ChAT的表达；另外ER、NGF和ChAT表达变化的相似性提示三者在雌激素对小脑的作用中是相互调节和影响的，同时表明雌激素可能既通过基因组机制，也通过非基因组机制途径在小脑发挥作用。

妊娠期奶山羊下丘脑GnRH和OT免疫反应双标记细胞的分布

陈树林;林磊;蒋田园;雷治海;李文献;曾明华;张艳;范光丽;隋治国

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 966-971. doi:

摘要 ( 840 )

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为了探讨促性腺激素释放激素（GnRH）和催产素（OT）是否在下丘脑细胞中共存，采用免疫组织化学双标记法对妊娠期奶山羊下丘脑中GnRH与OT的分布进行了检测。结果显示：室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等核团（区）有GnRH和OT免疫反应双标记细胞，在妊娠的不同时期，GnRH和OT免疫反应双标记细胞数量有显著差异。这些结果为GnRH与OT相互调节提供了形态学证据。

单色光对肉鸡睾丸形态结构的影响

曹静;陈耀星;王子旭;李俊英;谢电;贾六军;李艳红

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 972-976. doi:

摘要 ( 850 )

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采用LED（Lightemitting diodes）灯作为光源，比较单色光对雄性AA肉鸡睾丸形态结构的影响，并对其内在机理进行探讨。将48只刚出壳的AA肉鸡分为4个处理组，试验组为红光组（660 nm）、绿光组（560 nm）和蓝光组（480 nm），对照组为白光组（400～760 nm），每组12只，自由采食。光照强度为15 lx，光照制度23 h∶1 h（L:D）。49日龄利用放射免疫法检测血清中甲状腺激素和睾酮的含量，并测量体重、睾丸重、睾丸体积、曲精细管面积和生精细胞百分数。结果表明，蓝、绿光对睾丸的影响较显著，蓝、绿光组的体重、睾丸重、睾丸体积、曲精细管面积和生精细胞百分数显著高于红、白光组7.22%～32.37%（P<0.05），且蓝光组T3、T4和睾酮水平比其他光组高14.36%～26.20%。结果提示蓝光比其他单色光更能促进甲状腺激素和睾酮的分泌，进而影响肉鸡睾丸的形态结构。

不同浓度氟对山羊成骨细胞周期和凋亡的影响

钟代彬;冯丽芳;曲伟杰;苏敬良;韩博

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 977-982. doi:

摘要 ( 1621 )

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为了探讨氟化物对反刍动物成骨细胞的细胞周期和凋亡的影响，本研究以初生山羊股骨骨膜为材料分离成骨细胞，接种于含15％FBS的DMEM培养液，于37℃、5％CO2的培养箱中培养。通过形态观察（Hoechst33342/PI 双重染色）、DNA ladder电泳、透射电镜、流式细胞仪等方法检测氟对成骨细胞的调控作用。结果表明，高氟（1.0×10－3及2.5×10－3mol/L）使成骨细胞G0/G1期减少，S期细胞增多，抑制成骨细胞周期由合成DNA的S期向G2M期转化，使细胞停滞在S期。1.×10－5～2.5×10－3mol/L氟可使DNA断裂，诱导成骨细胞凋亡，其中1.0×10.4mol/L氟所致早期和晚期凋亡率最高，分别为3.33％和2.92％。本试验证实氟可诱导成骨细胞凋亡。

黄芩苷对小鼠的保胎作用及其对细胞因子的影响

马爱团;钟秀会;孟立根;刘占民;张铁;周帮会

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 983-988. doi:

摘要 ( 884 )

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本试验旨在研究黄芩苷的促孕保胎作用及其对母胎界面细胞因子的影响。取怀孕小鼠分成5组，除对照组外，其它4组于孕5-7天皮下注射溴隐亭建立流产模型，孕1-7天分别灌服蒸馏水、0.1、0.5、1 mg黄芩苷。孕3、5、7、10、12天采样，计算流产率，酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清及子宫匀浆中干扰素-γ（IFNγ）、白介素-10（IL-10）、孕酮的含量。结果孕12天时1 mg黄芩苷组流产率降低，接近对照组，与模型组均有显著差异。孕5天各组血清和子宫匀浆中IFN-γ含量显著上升，其中1 mg黄芩苷组最高。孕酮含量随孕期延长而提高，以0.5和1 mg黄芩苷组最高。表明黄芩苷可剂量依赖性上调孕酮的含量，促进着床期IFN-γ分泌，胚泡附植后又降低IFNγ的含量，调节着床和妊娠期Th1/Th2 细胞因子平衡，影响内分泌免疫网络，有利于胚胎着床和妊娠维持。

孟德尔分离群体验证候选基因遗传效应的策略

姜润深;李俊英;杨宁

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 989-992. doi:

摘要 ( 807 )

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由候选基因法得到的基因变异目标性状的关联性，其准确性和可靠性受群体遗传背景、连锁不平衡和样本含量大小等因素的影响，所以变异性状关联性在某群体建立后，应进一步在其它群体中加以验证。在存在低等位基因频率的情况下，如果想得到一定数量低频率等位基因纯合子基因型个体的表型记录，就需要维持很大的试验群体，且试验费用和工作量非常大。本研究提出了一个解决群体内纯合子频率低的策略，即利用杂合子交配产生孟德尔分离群，不但可以获得符合要求的群体规模，而且群体的遗传背景更为相近，同时可以充分考虑家系效应，可以提高验证候选基因遗传效应的准确性。本研究以验证鸡垂体特异转录因子基因POU1F1-6位点对鸡生长性状的遗传效应为例，表明此策略在低等位基因频率情况下验证候选基因遗传效应是可取的，且大大降低了工作量和试验成本。

免疫抑制剂环磷酰胺对肉仔鸡生产性能及其内分泌的影响

董晓芳;汪仕奎;萨仁娜;张琪;佟建明

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 993-998. doi:

摘要 ( 856 )

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本研究观察了免疫抑制剂环磷酰胺对肉仔鸡生产性能及其内分泌的影响，旨在探讨免疫抑制状态下肉仔鸡营养代谢的变化特点。120只20 d体重相近的健康AA雄性肉仔鸡随机分为2组：生理盐水组和环磷酰胺组，分别一次性腹腔注射等体积的生理盐水和环磷酰胺（10 mg/kg BW）。每日记录采食量和收集全部粪样，分组后第1、3、5、8、13 天随机从每组取4只鸡，称重、心脏无菌采血后处死，迅速摘取脾脏、法式囊及左侧胸腺，剔除脂肪后称重，然后立即置于液氮保存。实验室进行饲料表观代谢能、粗脂肪和粗蛋白表观消化率、T、B淋巴细胞增殖能力、血清糖皮质激素（GC）、胰岛素（insulin）和甲状腺激素（T3和T4）水平及脾脏、法式囊和胸腺中IL-1β、IL-2和IFN-γ mRNA含量的测定。结果：处理后第1天环磷酰胺组，（1）肉仔鸡法式囊指数、B细胞增殖能力、法氏囊中IL-1β mRNA和脾脏、法式囊中IFN-γ mRNA的含量显著降低（P<0.05）。（2）肉仔鸡体重显著增加（P<0.05），肉仔鸡采食量、粗脂肪和粗蛋白表观消化率显著降低（P<0.05）。（3）血清GC水平极显著降低（P<0.01），血清insulin水平显著升高（P<0.05）。（4）除处理后第3天环磷酰胺组体重仍显著升高（P<0.05）外，其它时间各项指标都没有显著变化（P>0.05）。这些结果表明，环磷酰胺诱发了肉仔鸡的免疫抑制，在这种免疫抑制状态下肉仔鸡生产性能得到了提高，糖皮质激素分泌降低而胰岛素分泌升高。

柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA表达文库的构建

林青;才学鹏;窦永喜;翟军军;闫鸿斌;张彦明;田广孚;景志忠

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 999-1002. doi:

摘要 ( 1488 )

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在无RNase污染的环境下，提取柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）子孢子RNA，进而纯化mRNA，采用Oligo（dT）引物反转录合成cDNA第一链和第二链，并在其两端加EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoR Ⅰ/Hind Ⅲ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装，形成完整的噬菌体，并用该噬菌体转染大肠杆菌ER1647，进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的DNA为模板，利用已知基因引物克隆E. tenella 3-1E基因，并进行测序。结果表明，成功构建了E. tenella孢子化卵囊子孢子的cDNA文库，文库原始库容量约为4×106 pfu/mL，插入片段约100～3 000 bp，扩增得到特定的E. tenella 3-1E基因，说明文库质量高、代表性强，为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。

猪IL-2真核表达质粒构建及对PRRSV-ORF 5基因疫苗免疫佐剂作用的研究

希尼尼根;程安春;汪铭书;陈希文;豆文波;李雪梅;刘伍梅;张平英;刘菲;陈孝跃

畜牧兽医学报, 2007, 38(9): 1003-1008. doi:

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本研究应用真核表达载体pcDNA3.1(+)和猪白细胞介素2(IL-2)基因成功构建了IL-2的真核表达质粒（pcDNA-IL-2），探讨了pcDNA-IL-2作为分子免疫佐剂对猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）ORF5基因疫苗（pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5）免疫猪的增强作用。经间接ELISA法、MTT比色法及流式细胞仪分别对pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪、pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪、pcDNA3.1(+)空载体和灭菌水免疫对照猪的血清抗PRRSV抗体IgG、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD+4和CD+8细胞比例进行检测，结果表明pcDNA-IL-2与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5共同免疫猪的IgG含量、外周血T淋巴细胞的增殖活性、CD+4和CD+8细胞比例与pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5单独免疫猪相比有显著差异(P <0.05)。说明pcDNA-IL-2能显著增强pcDNA-PRRSV-SC2-ORF5基因疫苗免疫猪的体液和细胞免疫应答，可作为PRRSV基因疫苗的良好佐剂。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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