畜牧兽医学报

猪Cathepsin B基因cDNA分子克隆、序列分析及遗传多态性分析

陈磊;李学伟;朱砺;李强;李明洲

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 385-392. doi:

摘要 ( 1488 )

HTML( )

PDF (1027KB) ( 1556 )

相关文章 | 多维度评价

采用RT-PCR结合克隆测序的方法，从猪肌肉组织总RNA中克隆出了猪组织蛋白酶B（Cathepsin B，CTSB）基因的cDNA序列，并推导出其编码的氨基酸序列。猪CTSB基因开放阅读框（ORF）全长1 008 bp，编码335个氨基酸。同源性分析结果表明，猪与人、鼠、牛的CTSB基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为85%、81%、90%，推测的氨基酸序列同源性分别为81%、79%、91%。利用同源性结合序列特征预测表明该蛋白具有信号肽和前肽序列。蛋白质结构同源建模分析表明，该蛋白具有木瓜蛋白酶家族的典型空间结构，包括1个底物结合凹槽和3个相互靠近的活性位点。另外采用PCR-SSCP方法，在147头个体中分析了CTSB基因第6内含子内的SSCP位点多态性，检测到3个等位基因6种基因型。FF基因型个体的各项嫩度指标最高，其最大剪切力与硬度值分别为6.56 kg和23.55 kg·s，极显著地高于EE和EF基因型个体（P<0.01），平均剪切力为4.85 kg，显著地高于EF基因型个体（P<0.05）。

猪肺表面活性蛋白A的DNA全序列克隆与生物信息学分析

乔莉娟;王立贤;苏振环;颜华

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 393-398. doi:

摘要 ( 931 )

HTML( )

PDF (583KB) ( 741 )

相关文章 | 多维度评价

猪肺表面活性蛋白A（Porcine surfactant protein A，SP-A）是猪肺泡表面活性蛋白中含量最多、最先被发现具有炎症免疫调节功能的表面活性蛋白。本研究利用比较基因组学方法，设计了6对引物进行PCR扩增，克隆测序后进行拼接，获得了长为4 037 bp猪SP-A 基因的全序列(gi: DQ985806)。经生物信息学分析，此序列包含了猪SP-A基因启动子区，含有1个747 bp的完整开放阅读框，编码248个氨基酸；预测猪SP-A蛋白理论分子量约为26.37 ku，蛋白的等电点为5.20；在1～20位氨基酸可能是信号肽序列；在大约1～20、120～135、145～160位氨基酸存在疏水性区域；跨膜结构分析表明此蛋白所有氨基酸都位于膜表面；并且发现猪SP-A蛋白同人SP-A蛋白一样也含有保守的碳水化合物识别区、胶原样区域和茎区。本结果为进一步对SP-A与猪呼吸道疾病相关性的研究奠定了基础。

猪泛素-B基因的克隆及组织表达谱分析

谢水华;李加琪;陈瑶生;张豪;王翀;梅盈洁;莫德林;李泽月

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 399-404. doi:

摘要 ( 2087 )

HTML( )

PDF (1112KB) ( 834 )

相关文章 | 多维度评价

从人泛素-B（Ubiquitin B，UbB）基因mRNA序列出发，在猪的ESTs库中进行同源性搜索，通过电子克隆和进一步RT-PCR方法从猪肌肉组织总RNA中扩增出泛素-B基因部分cDNA序列（GenBank登录号：EF688558），长894 bp，其中在89～778 bp处包含一个完整的开放阅读框，编码229 个氨基酸。猪泛素-B基因由2个外显子和1个内含子构成（GenBank登录号：EF688559），内含子长657 bp，符合GT-AG规则。序列分析结果表明：猪泛素-B基因与已报道的人、黑猩猩、小家鼠、大鼠、鸡等物种的泛素-B基因高度同源，同源性分别为92％、91％、91％、91％、89％，氨基酸序列同源性为100％。半定量RT-PCR结果表明：泛素B基因在150日龄肥育猪心脏、肝脏、肾脏、小脑中的表达量较高，脾脏、肺脏、胃、膀胱、背最长肌、大脑次之，脂肪和下丘脑中的表达量最低，其在蓝塘与长白猪肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、膀胱、背最长肌等7个组织中的表达量存在差异。

猪CACNA1S基因的多态性与胴体及肉质性状的相关分析

方晓敏;郭晓令;徐宁迎;任守文

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 405-409. doi:

摘要 ( 954 )

HTML( )

PDF (865KB) ( 767 )

相关文章 | 多维度评价

以金华猪(40头)、皮特兰猪(30头)及其杂交产生的金皮F2代资源猪群(126头)为材料，对钙离子通道主亚基α1的编码基因(CACNA1S)第44外显子A187G突变、第37内含子A37G突变、T179C突变作PCR-RFLP检测(内切酶依次为Cfr 42Ⅰ、XbaⅠ、Eco 72Ⅰ)，分析其对胴体及肉质性状的遗传效应。结果表明：酶切位点Eco 72Ⅰ的AA基因型对眼肌面积和肉色(L)存在极显著影响(P＜0.01)，BB基因型对后腿肌肉重存在极显著影响（P＜0.01）和大腿pH存在显著影响(0.01＜P＜0.05)；位点XbaⅠ对背膘厚(中)存在显著影响(0.01＜P＜0.05)，但AA、AB、BB基因型间效应差异不显著(P＞0.05)；位点Cfr42Ⅰ仅在金华、皮特兰纯种猪群中存在多态性，而在屠宰猪群金皮F2代则表现为BB单态型。

7个牛品种PON2基因第9外显子SSCP分析及其外显子多态性扫描

姬爱国;许尚忠;淮亚红;高雪;周正奎;任红艳;陈金宝

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 410-416. doi:

摘要 ( 944 )

HTML( )

PDF (782KB) ( 665 )

相关文章 | 多维度评价

对氧磷酶2 (Paraoxonase-2, PON2) 产物是脂肪代谢过程中的抗氧化酶，被确定为影响相关重大心血管疾病和人类寿命的重要候选基因。本研究利用直接测序法对 PON2 基因所有外显子进行多态位点扫描，利用PCR-SSCP 技术对中国西门塔尔牛、鲁西牛、秦川牛、晋南牛、荷斯坦牛、摩拉水牛和尼里-拉菲水牛7个品种的478头个体PON2基因第9外显子T98C位点进行多态性分析。结果表明，PON2 基因外显子上共发现4个单核苷酸突变位点，但均未引起氨基酸的改变；第9外显子扩增大小为167 bp的片段存在单链构象多态性。除鲁西牛和荷斯坦牛外，其它5个品种牛在该基因座位都处于Hardy-Weinberg 平衡状态(P > 0.05)。鲁西牛、南阳牛、晋南牛和荷斯坦牛4个群体处于中度多态（0.25 < PIC < 0.50），其它3个牛种为低度多态。除摩拉水牛和尼里-拉菲水牛不存在AA基因型外，其它5个牛品种中均存在AA、AB、BB 3种基因型，但优势等位基因在7个品种牛群体中存在差异，基因型频率在鲁西牛和南阳牛中 AA>AB>BB；晋南牛则3种基因型频率之比约为1∶1∶1；中国西门塔尔牛则出现严重的偏态，B等位基因为绝对优势等位基因；2种水牛中，BB基因型为优势基因型，B等位基因为优势等位基因。利用 SAS 9.1 软件 GLM 过程分析基因型均值，用邓肯法（Duncan’s）进行基因型间的多重比较，将该基因座不同基因型与7个牛品种间和鲁西牛6个年龄组(n=238)进行了差异分析，结果表明，不同基因型在品种间存在极显著的差异（P < 0.01）；鲁西牛各年龄组与各基因型间差异不显著（P > 0.05），但各种基因型间存在有着极显著的差异（P < 0.01）。结合各种基因型个体在不同年龄组间的变化趋势，AA 型个体可能具有相对较长的使用寿命。

中国7个绵羊品种mtDNA D-loop区序列的系统发育与起源研究

赵倩君;关伟军;郭军;乔海云;何晓红;浦亚斌;傅宝玲;敖红;李奎;马月辉

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 417-422. doi:

摘要 ( 1509 )

HTML( )

PDF (641KB) ( 804 )

相关文章 | 多维度评价

为探讨中国绵羊的起源、进化及遗传多样性，对新疆、内蒙古、西藏、云南、宁夏、山东等地区7个地方绵羊品种和1个外来品种共59个体的线粒体D-loop全序列进行了测序分析。7个地方绵羊群体的单倍型多样度（Hd）和核苷酸多样度（π）分别平均为0.996 0和0.030 6，表明我国地方绵羊品种的控制区遗传变异丰富。系统发育和网络进化分析均将中国绵羊分为3个明显的支系，揭示中国绵羊存在3个独立的母系起源；并发现欧洲摩佛仑羊与支系B聚在一起，表明摩佛仑羊与中国绵羊有较近的亲缘关系。对mtDNA D-loop的3个支系进行核苷酸不配对分布曲线分析和Fu’s中性检验，结果显示3个支系的分布曲线均呈单峰形，且中性检验差异显著，表明绵羊3个支系可能曾经历群体扩张。

南江黄羊GH基因的PCR-RFLP与早期生长发育的相关分析

张红平;张国俊;向德;刘成建;汪波;陈瑜;李利

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 423-428. doi:

摘要 ( 1111 )

HTML( )

PDF (533KB) ( 745 )

相关文章 | 多维度评价

本研究以90 只南江黄羊为材料，对山羊GH基因(gGH)部分片段进行了PCRRFLP分析，并对GH基因的PCR-RFLP与早期生长发育性状的相关性进行了研究。结果表明扩增产物片段长度为985 bp，包括gGH内含子3、4以及外显子3、4、5的全部序列。分别用限制性内切酶FokⅠ和AciⅠ酶切分析扩增产物，均具有多态性，其中内切酶FokⅠ酶切产生GG、GA和AA 3 种基因型，频率分别为0.522、0.289和0.189，等位基因G的频率（0.666）高于等位基因A (0.334)；AciⅠ酶切产生CC、TC和TT 3 种基因型，频率分别为0.467、0.322和0.211, 等位基因C的频率(0.628)高于等位基因T (0.372)。χ2检验结果表明2种限制性内切酶产生的基因型频率在群体中都处于Hardy-Weinberg非平衡状态。进一步对gGH的PCR-RFLP与早期生长发育的相关分析表明，FokⅠ酶切位点具有GA基因型的个体和AciⅠ酶切位点具有TC基因型个体的各年龄阶段体重、体高和体长的最小二乘均值均显著或极显著高于其它基因型的个体（0.05<P<0.01或P<0.01)。

山羊MSHR基因G676A突变在不同毛色群体中的变异

李兰会;李祥龙;周荣艳;王立泽

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 429-436. doi:

摘要 ( 1338 )

HTML( )

PDF (386KB) ( 676 )

相关文章 | 多维度评价

研究了MSHR基因G676A突变在22个山羊群体634个个体中的变异，发现白色山羊群体166个个体绝大多数为GG纯合子，G为优势等位基因，频率为0.99。以红棕色为主色调山羊群体的197个个体中A为优势等位基因，频率为0.33，且国外引入品种具有更高的A等位基因频率（0.89）。以黑色为主色调山羊群体的271个个体中，A等位基因频率为0.21，处于白色山羊群体（0.01）和以红棕色为主色调的山羊群体（0.33）之间。研究结果显示AA基因型可能与山羊的棕色皮毛形成有关，而GG基因型可能与白色被毛形成有关。遗传多样性分析表明，G676A突变位点表现出丰富的遗传多样性，只是在以黑色为主色调的建昌黑山羊、雷州山羊、武安山羊、都安山羊和青色的济宁青山羊中表现出遗传多样性的缺乏。遗传分化结果显示，国内外山羊群体间的基因分化（0.449）明显大于国内品种间的分化（0.237），国内南北地区山羊群体间分化程度较低，以黑色和棕红色为主色调的山羊群体间具有较大的基因流动。聚类分析结果也与毛色变异基本一致。

鸡CAST基因编码区的单核苷酸多态与肌纤维性状的相关研究

刘安芳;刘益平;蒋小松;李亮;杜华瑞;朱庆

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 437-442. doi:

摘要 ( 1479 )

HTML( )

PDF (678KB) ( 768 )

相关文章 | 多维度评价

为了探讨CAST基因作为影响鸡肌肉嫩度性状候选基因的可能性，本研究以四川大恒家禽育种有限公司培育的优质鸡新品系为试验材料，采用PCR-SSCP方法对鸡钙蛋白酶抑制蛋白（Calpastatin，CAST）基因的部分编码区进行单核苷酸多态性(SNPs)检测。结果发现了1个多态性位点（G→T），且在试验鸡群中检测出AA、BB和AB 3种基因型。利用SAS（8.01）软件统计分析了3种基因型与优质鸡肌纤维性状的相关性。结果表明：CAST基因的多态性对鸡肌纤维密度和直径有着显著的影响（P＜0.05），同日龄鸡群AA型个体的肌纤维密度高于AB型、肌纤维直径低于AB型，且均达到显著水平（P＜0.05），而AA与BB型、BB与AB型间差异不显著（P＞0.05）；同体重鸡群BB型个体的肌纤维密度高于AB型、肌纤维直径低于AB型，且均达到显著水平（P＜0.05），而AA与BB型、AA与AB型间差异不显著（P＞0.05）。试验结果提示：CAST基因对鸡肌纤维性状具有重要作用，推测可以利用该位点对鸡肌肉嫩度性状进行标记辅助选择。

籽鹅GH基因内含子3多态性及其与体重和屠体性状的关联分析

赵文明;陈清;程金花;吴信生;陈国宏

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 443-448. doi:

摘要 ( 896 )

HTML( )

PDF (692KB) ( 928 )

相关文章 | 多维度评价

根据鸭生长激素基因内含子3的序列设计引物，利用PCR-SSCP方法对籽鹅进行了单核苷酸多态性分析,并检测其多态性。结果表明，籽鹅生长激素基因内含子3长约364 bp，共发现了7个突变位点，分别为A160G、C167G、T264C突变，以及AA型个体在176、177位点G、A碱基缺失和BB型个体在231、232位点C、T碱基缺失。产生AA、AB和BB 3种基因型，其中BB基因型为优势基因型，且基因型频率表现为BB >AB>AA；卡方检验结果表明，基因型分布符合 Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）。不同基因型与体重和屠体性状的关联分析结果表明：BB基因型个体的7周龄体重、9周龄体重、10周龄体重、胸肌重、胸肌率及心脏重显著高于AA型个体（P<0.05）；BB基因型个体8周龄体重显著高于AB型个体（P<0.05）；在所分析的性状中，BB基因型个体的均值最大，AB型次之，AA型最小。

大豆油对瘤胃培养液中共轭亚油酸及氢化中间产物累积规律的影响

侯俊财;刘艳平;桂仕林;霍贵成;贾志远;姜宁;张永忠

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 449-454. doi:

摘要 ( 926 )

HTML( )

PDF (352KB) ( 718 )

相关文章 | 多维度评价

试验采用批次培养法研究了体外条件下添加大豆油对山羊瘤胃培养液中共轭亚油酸及氢化中间产物累积规律的影响，大豆油的添加量为0和100 mg/瓶。结果表明大豆油组cis-9, trans-11 CLA含量始终显著高于对照组（P<0.05），且在培养8 h时含量达到最高，为6.05 mg/g干物质；大豆油组trans-10, cis-12 CLA含量显著高于对照组（P<0.05），其含量随培养时间的延长而逐渐升高；在培养16 h时，大豆油组总共轭亚油酸含量达到最大，为11.61 mg/g干物质；大豆油组的trans-10C18∶1和trans-11C18∶1含量显著高于对照组（P<0.05），在培养过程中，二者含量始终增加。大豆油组总反式C18∶1脂肪酸含量随着培养时间的延长而逐渐增加，而总顺式C18∶1脂肪酸含量随着培养时间的延长而逐渐下降。

不同精粗比日粮对奶牛机体氧化应激和瘤胃内环境稳定性的影响

侯志高;王振勇;柴同杰;贾玉东;巩庆亮;马健;王允田

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 455-459. doi:

摘要 ( 1424 )

HTML( )

PDF (339KB) ( 924 )

相关文章 | 多维度评价

为了探讨不同精料浓度对奶牛机体氧化应激和瘤胃内环境稳定性的影响，选用5头临床健康体重为（502±20）kg的荷斯坦奶牛，饲喂9种不同精料水平日粮（精粗比分别为30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、55∶45、60∶40、70∶30、100∶0）对奶牛瘤胃内pH、抗氧化指标以及血清中抗氧化指标变化的影响。连续进行9期饲喂试验，前8期每期30 d，全精料组试验期为3 d。结果表明，全精料日粮条件下奶牛瘤胃内pH显著低于其他精料浓度组（P＜0.05），精料浓度为55%日粮条件下，瘤胃内SOD的活力极显著高于其他精料浓度日粮（P＜0.05），MDA及OH·含量显著低于其他精料浓度日粮（P＜0.05），GSH-Px活力极显著低于其他精料浓度日粮（P＜0.05），T-AOC的活力显著高于精粗比为30∶70、35∶65、40∶60、45∶55、50∶50、100∶0的日粮组，和其他组差异不显著（P＞0.05）；精料浓度为55%日粮条件下，血清内SOD、T-AOC的活力显著高于其他精料浓度组（P＜0.01），GSH-Px活力显著低于其他精料浓度组（P＜0.01），MDA含量与精粗比为50∶50、60∶40的日粮组差异不显著（P＞0.05），而显著低于其他日粮组（P＜0.05），OH·含量与精粗比为60∶40的日粮组差异不显著（P＞0.05），而显著低于其他日粮组（P＜0.05）。说明不同精料浓度的日粮对瘤胃内环境稳定性和机体氧化应激有明显的影响。

体外鉴定的禽流感病毒T细胞表位的免疫效果研究

李新生;陈红英;高凤山;夏春;崔保安

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 460-465. doi:

摘要 ( 1438 )

HTML( )

PDF (705KB) ( 787 )

相关文章 | 多维度评价

为验证来源于禽流感病毒的、可与鸡MHC Ⅰ类分子结合的九肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV的免疫原性，使用TIGECPKYV、LLLAIVSLV和KILTIYSTV 3条多肽免疫BALB/c小鼠，加强免疫时和加强免疫1、2、3、4、5周后分别采血，流式细胞术测定免疫前后小鼠外周抗凝血中CD8+淋巴细胞的变化情况；加强免疫后14 d进行MTT试验；首次免疫3周后进行DTH试验；ELISA检测免疫前后小鼠分泌IFNγ的变化情况。结果表明，KILTIYSTV、LLLAIVSLV、TIGECPKYV免疫后分别引起CD8⁺ T淋巴细胞4.2%、4.0%和0.2%的额外增殖。KILTIYSTV和LLLAIVSLV免疫组的IFNγ的增长和迟发型变态反应均显著高于对照组。简言之，与重建的MHC Ⅰ类分子结合的多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV可以刺激小鼠产生特异性CTL反应，而不结合的多肽TIGECPKYV刺激小鼠未产生特异性CTL反应。

牛分枝杆菌三价组合及融合DNA疫苗免疫效果的研究

宫强;刘思国;王春来;王勇;刘建东;刘慧芳;施远祥;阿曼古丽;李发斌;孔宪刚

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 466-471. doi:

摘要 ( 1556 )

HTML( )

PDF (881KB) ( 688 )

相关文章 | 多维度评价

分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原，在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体，构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗：3基因融合（pcDNA－MPB64－Ag85B－ESAT-6，pCMAE）DNA疫苗和三价（pcDNA－Ag85B+pcDNA－MPB64+pcDNA－ESAT-6）DNA疫苗，评价各种DNA疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫及以BCG攻毒后的免疫保护水平。试验结果表明，多基因融合DNA疫苗免疫后的小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖（SI值）、gamma interferon （IFN-γ）和interleukin-2（IL-2）水平明显高于其他各组（P<0.05），攻毒保护效果也优于多价DNA疫苗，达到了BCG疫苗的免疫保护水平，表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景。

95个猪场大肠杆菌耐药表型及氨基糖苷类药物耐药基因型调查

汤景元;王红宁;张鹏举;冮婷婷;曾博

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 472-477. doi:

摘要 ( 945 )

HTML( )

PDF (405KB) ( 1094 )

相关文章 | 多维度评价

为调查我国规模化猪场大肠杆菌细菌耐药性及其氨基糖苷类药物耐药基因的流行状况，采用K－B(Kirby-Bauer)法检测2006-2007年从四川、重庆、湖北等19个省95个规模化猪场分离的480株大肠杆菌对19种抗生素的耐药性。结果表明：仅有多黏菌素B(85.6%)、头孢噻肟(85.3%)、阿米卡星(84.8%)和大观霉素(65.0%)相对敏感。480株大肠杆菌以多重耐药菌株为主，其中13、14、15、16和17重耐药较多，并且有26株18重耐药，14株19重耐药。采用WHONET5.4软件分析大肠杆菌耐药性，对阿米卡星、头孢噻肟和多黏菌素B耐药的猪场相对较少，分别是29、26和24个。采用PCR方法检测氨基糖苷类相关耐药基因，耐药基因检出率分别是aadA1(65.89%)、aaC2(52.35%)、aaC4(12.91%)和aphA3(10.95%)。耐药基因型检出率较高的是 aadA1/aaC2(29.61%)、aadA1(18.04%)。Excel软件统计相关耐药基因的猪场分布，表明耐药基因型aadA1/aaC2(43)、 aadA1/aaC2/aaC4(20)和aadA1/aaC2/aaC4/aphA3(20)在猪场分布较普遍。耐药基因和耐药性比较表明大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药表型与耐药基因型符合率较高的是阿米卡星(68.39%)。本研究表明猪肠道内常在大肠杆菌菌群不仅产生较高的多重耐药性，也成为耐药基因的储存库，对猪场环境中耐药基因在致病菌和非致病菌间传播发挥重要作用，能够作为检测细菌耐药性的指示菌。

稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立

田宏;吴锦艳;龚真莉;郑海学;孙世琪;尚佑军;刘湘涛;谢庆阁

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 478-482. doi:

摘要 ( 844 )

HTML( )

PDF (579KB) ( 739 )

相关文章 | 多维度评价

从猪水疱病全长感染性cDNA中，应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因，并在目的片段的5′ 端引入Kozak序列(Kozak, 1987)，定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定，获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞，收获假型病毒，在Polybrene的介导下感染PK-15细胞，嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞，发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达，而且表达的蛋白可被SVD阳性血清所识别；同时应用PCR技术，可从体外反复传代阳性细胞基因组中扩增到SVD P1基因。表明本次所筛选的阳性细胞克隆不但能持续稳定地表达SVD P1蛋白，而且可携带外源基因进行传代，具有良好的遗传稳定性。

L-精氨酸和L-氨基胍在兔斯氏艾美耳球虫感染中作用的研究

尹逊河;邱建华;王树迎;王翠梅;孙义东;陈丙峰;李伟

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 483-487. doi:

摘要 ( 942 )

HTML( )

PDF (366KB) ( 657 )

相关文章 | 多维度评价

为了探讨兔斯氏艾美耳球虫（E.stiedai）感染兔肝脏诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性和血清NO浓度变化以及NO对兔球虫的抑制或杀伤作用，以腹腔注射途径给予球虫感染家兔一氧化氮合酶（NOS）底物 L-精氨酸（L-Arg）和iNOS抑制剂L-氨基胍（L-AG），对家兔球虫感染时肝脏iNOS活性、血清NO浓度、每克粪便的球虫卵囊数（OPG）、肝的剖检和镜下病变及其病变计分进行了研究。试验结果表明：①家兔感染E.stiedai后，肝匀浆的iNOS活性和血清中NO浓度逐渐升高，感染对照组、添加L-Arg组和添加L-AG组3组均在感染后第12天达到最高值,而后逐渐下降，于23 d左右下降到感染前的水平；②L-Arg可增强iNOS的活性，促进体内大量生成NO，进而提高家兔对球虫的抑制作用，减轻球虫感染引起的病变；L-AG则降低iNOS的活性，使体内生成的NO减少,从而加重球虫感染引起的病变。结果提示：NO及iNOS确实参与了家兔E.stiedai的感染过程，并且NO在球虫感染过程中起到了抑制或杀伤兔球虫的作用。

鸡源Bursin-ScFv噬菌体展示文库的构建及初步筛选

邬向东;曲悦;谌南辉;王萍;何后军

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 488-493. doi:

摘要 ( 858 )

HTML( )

PDF (747KB) ( 621 )

相关文章 | 多维度评价

本研究利用抗三肽囊素(Bursin)单克隆抗体免疫SPF来航鸡，获得产生抗独特型抗体的脾细胞，从中提取总RNA，经反转录合成cDNA第一链。以cDNA第一链为模板，根据来航鸡IgG抗体重链（V_H）、轻链（V_L）可变区基因FR设计引物，进行PCR扩增。在体外扩增出该抗体的可变区VH和VL基因（大小分别约为370和320 bp）。通过重叠延伸反应(SOE)，以（Gly₄Ser）₃为连接肽，将V_H和V_L基因连接成为V_H-Linker-V_L ScFv，将ScFv DNA与噬菌粒载体pHEN1的连接产物转化于大肠杆菌TG1，经辅助噬菌体M13K07感染后，获得重组的鸡源抗三肽囊素独特型抗体全套单链噬菌体抗体库。并测得该库容量约为5×10⁵，噬菌体中ScFv基因的插入率为80%，用辅助噬菌体援救后，得到滴度为10¹¹ PFU/mL的初级噬菌体抗体库。用抗Bursin单克隆抗体（2F9-4/HU2）进行4轮“吸附洗脱扩增”的淘筛，出现特异性富集。经ELISA、动物试验表明所筛选的5个阳性克隆可与抗Bursin单克隆抗体（2F9-4/HU2）特异性结合，并能促进抗体的生产。

肺炎克雷伯氏菌对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞黏附和侵袭的体外研究

王亨;孟霞;邱昌伟;马翀;吴培福;韩超;齐长明

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 494-498. doi:

摘要 ( 894 )

HTML( )

PDF (1195KB) ( 783 )

相关文章 | 多维度评价

肺炎克雷伯氏菌是否黏附和侵袭乳腺上皮细胞可能是其导致乳房炎的致病机理之一。本试验从荷斯坦奶牛乳腺中分离纯化乳腺上皮细胞，并通过免疫组化和透射电镜观察，证实纯化细胞为乳腺上皮细胞。采用从临床乳房炎病例分离的肺炎克雷伯氏菌攻击原代培养的乳腺上皮细胞，以沙门氏菌和大肠杆菌DH5α为阳性和阴性对照。结果发现，肺炎克雷伯氏菌能够黏附乳腺上皮细胞，且具有时间和剂量依赖性，达到饱和黏附后，不再增加。肺炎克雷伯氏菌能够侵入乳腺上皮细胞，且其活力未受到明显影响，但侵入细菌的数量没有明显的增加，说明一定数量的细菌能够侵入乳腺上皮细胞。肺炎克雷伯氏菌黏附和侵入乳腺上皮细胞并在细胞内保持活力，可能是临床肺炎克雷伯氏菌导致的乳房炎难于治愈的原因之一。

小檗碱、绿原酸和黄芩苷对LPS损伤大鼠肠黏膜微血管内皮细胞表达ICAM-1的影响

张涛;黄会岭;胡格;段慧琴;滕可导;穆祥

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 499-502. doi:

摘要 ( 869 )

HTML( )

PDF (751KB) ( 798 )

相关文章 | 多维度评价

为研究中药有效成分小檗碱、绿原酸和黄芩苷的抗炎机制，通过体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞 (Rat intestinal mucosa microvascular endothelial cells，RIMMVECs)建立LPS损伤模型，采用免疫细胞化学方法观察了3种中药成分对LPS损伤RIMMVECs表达ICAM-1的影响，并对染色结果进行了图像灰度分析与统计学检验。研究发现，RIMVECs正常状态下低水平表达ICAM-1，用LPS刺激后ICAM-1的表达明显升高，而中药有效成分小檗碱、绿原酸和黄芩苷能够抑制LPS诱导的RIMVECs强阳性表达ICAM-1。结果表明，小檗碱、绿原酸和黄芩苷的抗炎作用与其下调ICAM-1的表达密切相关，为阐明其抗炎机制提供了数据。

不同品种绵羊TGF-β1基因单核苷酸多态性及其与繁殖力关系的研究

高丽霞;李宏滨;杜立新;宋雪梅;李珍祖;李善刚;魏彩虹

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 503-507. doi:

摘要 ( 842 )

HTML( )

PDF (405KB) ( 647 )

相关文章 | 多维度评价

以小尾寒羊、滩羊、同羊、欧拉羊共计196头为研究材料,采用PCR-SSCP 技术,对绵羊TGF-β1基因6-7外显子区间内的805 bp序列进行多态性分析,发现了一个多态位点。经克隆测序分析发现,第6内含子区内存在一个突变,该突变位点为第7外显子上游的第294位碱基处缺失了AGAC（序列:gi76871756中的14 201位）。对不同绵羊群的基因型和等位基因频率统计结果表明,多胎品种小尾寒羊以AB基因型为主。χ2检验结果表明，单胎品种滩羊、同羊、欧拉羊以BB基因型为主，所有品种都处于Hardy-Weinberg平衡状态。

内蒙古绒山羊CDK2基因的克隆与序列分析

关泽红;旭日干;赵燕芳;毕力格

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 508-512. doi:

摘要 ( 1276 )

HTML( )

PDF (492KB) ( 682 )

相关文章 | 多维度评价

采用同源序列克隆技术结合RT-PCR和RACE技术，首次从内蒙古绒山羊睾丸组织中克隆出羊CDK2基因的全长cDNA序列（GenBank登录号为EF035041）。结果显示：羊CDK2基因的cDNA序列长为1 355 bp，5′端非翻译区为174 bp，3′端非翻译区为266 bp，开放阅读框为894 bp，编码298个氨基酸。与牛CDK2基因cDNA序列同源性为98%，氨基酸序列完全一致；和其他哺乳动物CDK2基因的cDNA序列同源性也达92%以上；氨基酸序列同源性为93%以上。说明CDK2在结构和功能上有很高的保守性。

供体细胞状态对牛重组胚发育的影响

李向臣;跃华;刘鹏;乌云其其格;关伟军;马月辉

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 513-516. doi:

摘要 ( 880 )

HTML( )

PDF (319KB) ( 654 )

相关文章 | 多维度评价

本试验通过比较供体成纤维细胞的不同血清饥饿培养天数、传代次数、冻存复苏等方面试验条件对重组胚发育的影响因素进行了深入的研究。结果表明：供体细胞血清饥饿0、1~3、4~6、7~9 d之间重组胚卵裂率没有显著差异（P＞0.05），但囊胚率以饥饿1~3 d的最高，与4~6和7~9 d组别差异显著（P＜0.05）；以传代0、1~3、4~6、7~9代的细胞作为供体细胞，卵裂率没有显著差异（P＞0.05），桑椹胚率以传1~3代最高，差异显著（P＜0.05）；2代细胞解冻后的卵裂率显著高于4和8代细胞，而以2和6代冷冻解冻后细胞为供体，卵裂率并无明显差异，8代细胞的桑椹胚率显著低于其它组。本试验为提高供体成纤维细胞在卵母细胞中重新程序化及后续重组胚发育等相关研究提供参考。

鸭疫里默氏菌病和大肠杆菌病鉴别诊断双重PCR方法的建立和应用

覃宗华;蔡建平;吕敏娜;余劲术;吴彩艳;温列娜;谢明权

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 517-521. doi:

摘要 ( 1002 )

HTML( )

PDF (444KB) ( 874 )

相关文章 | 多维度评价

本研究从鸭疫里默氏菌提取基因组DNA，采用细菌16S rRNA基因的通用引物，用PCR方法成功扩增出鸭疫里默氏菌的部分16S rRNA基因，克隆及测序结果表明其全长1 512 bp，G+C含量为51%，该序列已登入GenBank，登录号为DQ078779。同时利用生物软件对GenBank收录的鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的16S rRNA基因序列进行分析后，设计了鸭疫里默氏菌和大肠杆菌的种特异性引物，分别能从各自的16S rRNA基因中扩增出长度为342和718 bp的DNA片段。并据此建立了一种能快速准确鉴别诊断鸭疫里默氏菌和大肠杆菌病的双重PCR方法，该方法能从肝脏组织悬液煮沸后的上清、细菌培养物或提取的细菌基因组DNA中快速扩增出相应的片段，进行鉴别诊断。

水泡性口炎病毒血清型特异LUX 实时荧光RT-PCR检测方法的建立

陈茹;刘中勇;曾碧健;曹永长;陈俊伟;赵吟;林志雄;毕英佐

畜牧兽医学报, 2008, 39(4): 522-528. doi:

摘要 ( 1462 )

HTML( )

PDF (801KB) ( 788 )

相关文章 | 多维度评价

采用LUX荧光核酸扩增技术原理，以水泡性口炎病毒（VSV）NJ、 IND型NS基因为模板分别设计并合成单标记LUX荧光引物，建立血清型特异的VSV荧光RT-PCR检测方法。试验表明，两种型特异的LUX荧光RT-PCR能分别特异地鉴定VSV血清型，对口蹄疫、猪水泡病等病毒以及对照细胞、健康动物组织RNA样品的检测结果均为阴性。对比检测试验表明，LUX荧光RT-PCR的检测敏感性比常规RT-PCR提高达10倍以上，对VSV细胞增殖病毒液的检测灵敏度可达1 TCID50。对人工感染豚鼠样品以及临床样品的检测试验证实，该LUX 荧光RT-PCR可有效检测到人工感染动物组织以及进口牛临床样品中的水泡性口炎病毒，并能鉴定感染病毒血清型。所报道的检测方法，包括样品核酸提取、LUX荧光RT-PCR以及熔解曲线分析，可在3 h内完成。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

当期目录