埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.03.027

畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (3): 615-619.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.03.027

埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

曹增国¹，王化磊^1，6，盖微微^1，2，郑学星^1，6，金宏丽^1，3，李岭^1，2，王丽娜^1，4，冯娜^1，6，赵永坤^1，6，王铁成^1，6，高玉伟^1，6，毕玉海⁵，杨松涛^1，6*，夏咸柱^1，6*

（1.中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，吉林省人兽共患病预防与控制重点实验室，长春 130122；2.吉林大学动物医学学院，长春 130062；3.长春西诺生物科技有限公司，长春 130012； 4.吉林农业大学动物科学技术学院，长春 130118；5.中国科学院微生物研究所，北京 100101；6.江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，扬州 225009）

收稿日期:2015-09-08 出版日期:2016-03-23 发布日期:2016-03-21
通讯作者: 杨松涛，E-mail:yst62041@163.com；夏咸柱，E-mail:xiaxzh@cae.cn
作者简介:曹增国（1989-），男，内蒙古莫旗人，硕士生，主要从事分子病毒学研究，E-mail：495876834@qq.com
基金资助:
国家新药创制重大专项（2015ZX09102025）

Development of an Indirect ELISA for Detecting Ebola Virus Antibody and Its Application

CAO Zeng-guo¹，WANG Hua-lei^1，6，GAI Wei-wei^1，2，ZHENG Xue-xing^1，6，JIN Hong-li^1，3，LI Ling^1，2，WANG Li-na^1，4，FENG Na^1，6，ZHAO Yong-kun^1，6，WANG Tie-cheng^1，6，GAO Yu-wei^1，6，BI Yu-hai⁵，YANG Song-tao^1，6* ，XIA Xian-zhu^1，6*

(1.Key Laboratory of Jilin Province for Zoonosis Prevention and Control，Institute of Military Veterinary Medicine，Academy of Military Medical Sciences，Changchun 130122，China；2.College of Veterinary Medicine,Jilin University，Changchun 130062，China；3.Changchun SR Biological Technology Co.，LTD，Changchun 130012，China；4.College of Animal Science and Technology，Jilin Agricultural University，Changchun 130118，China；5.Institute of Microbiology，Chinese Academy of Sciences，Beijing 100101，China；6.Jiangsu Co-innoration Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonosis，Yangzhou 225009，China)

Received:2015-09-08 Online:2016-03-23 Published:2016-03-21

摘要/Abstract

摘要：

为建立EBOV抗体间接ELISA检测方法，以纯化后的EBOV糖蛋白作为包被抗原，HRP标记山羊抗马IgG为二抗，EBOV阳性马血清和阴性马血清分别为阳、阴性对照，优化反应条件，以EBOV病毒样颗粒免疫获得的高免马血清评价其特异性和敏感性，并将检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相比较，进一步评价EBOV抗体ELISA检测方法在EBOV免疫血清抗体水平检测中的应用。优化后的间接ELISA方法可特异性检测EBOV抗体，与西尼罗病毒等的阳性血清均不发生反应，检测结果与基于假病毒的中和抗体检测结果相平行。批内、批间试验变异系数均小于8％。本研究成功建立了EBOV抗体间接ELISA检测方法，为EBOV免疫血清抗体水平检测提供了一种简便、快速的检测方法。

关键词: 埃博拉病毒, 糖蛋白（GP）, 间接ELISA, 抗体检测

Abstract:

An indirect ELISA which can detect EBOV antibody was established using the purified the envelope glycoprotein as coating antigen.We use the HRP labeled antibody as the secondary antibody，the positive and negative horse sera as controls.After the reaction conditions were optimized，we analyzed the specificity，sensitivity of the indirect ELISA using serum of horse which immunized with EBOV virus like particles.For further evaluation of application of the ELISA，the results were compared to the neutralization assay based on pseudo-type EBOV.The indirect ELISA could detect the antibody against EBOV specifically and showed no cross-reaction with the positive sera of West Nile Fever et al.The indirect ELISA also showed high coincidence with the neutralization assay based on pseudo-type EBOV in evaluation of the immune response after immunization.The coefficient of variation of inter-batch and intra-batch duplicative tests was less than 8％.The indirect ELISA was successfully developed.It provides an effective and convenient method to kinetic detection of antibody against EBOV after immunization.

Key words: Ebola virus(EBOV), envelope glycoprotein(GP), indirect ELISA, antibody detection

中图分类号:

S852.659.5

曹增国，王化磊，盖微微，郑学星，金宏丽，李岭，王丽娜，冯娜，赵永坤，王铁成，高玉伟，毕玉海，杨松涛，夏咸柱. 埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(3): 615-619.

CAO Zeng-guo，WANG Hua-lei，GAI Wei-wei，ZHENG Xue-xing，JIN Hong-li，LI Ling，WANG Li-na，FENG Na，ZHAO Yong-kun，WANG Tie-cheng，GAO Yu-wei，BI Yu-hai，YANG Song-tao，XIA Xian-zhu. Development of an Indirect ELISA for Detecting Ebola Virus Antibody and Its Application[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(3): 615-619.

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埃博拉病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

Development of an Indirect ELISA for Detecting Ebola Virus Antibody and Its Application

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