牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.015

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (11): 2025-2031.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.11.015

牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究

郭金玉¹，张鹤晓²，吴丹²，高志强²，张冉³，张乐萃^1*

（1.青岛农业大学动物科技学院，青岛 266109；2.北京出入境检验检疫局，北京 100026；3.北京森康生物技术开发有限公司,北京101400）

收稿日期:2015-03-27 出版日期:2015-11-23 发布日期:2015-11-20
通讯作者: 张乐萃，E-mail：lczhang@qau.edu.cn
作者简介:郭金玉(1989-)，女，山东临清人，硕士生，主要从事动物检验检疫研究， E-mail:guojinyu.86@163.com
基金资助:
国家质检总局科研项目(2013IK026)

Preparation and Application of the Monoclonal Antibodies against Bovine Enterovirus Type 2

GUO Jin-yu¹， ZHANG He-xiao²，WU Dan²，GAO Zhi-qiang²，ZHANG Ran³，ZHANG Le-cui^1*

(1.Animal Science and Technology College，Qingdao Agricultural University，Qingdao 266109，China；2.Beijing Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Beijing 100026，China；3.Beijing Senkang Biotech Development Co.Ltd.，Beijing 101400，China)

Received:2015-03-27 Online:2015-11-23 Published:2015-11-20

摘要/Abstract

摘要：

旨在制备牛肠道病毒2型（BEV-2）单克隆抗体，建立检测BEV-2抗原的ELISA方法。将纯化的BEV-2 VP1⁺重组蛋白质接种BALB/c小鼠，取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0用PEG4000进行融合，对杂交瘤培养上清进行筛选,获得2株稳定分泌抗BEV-2 VP1⁺蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株（1G1、5G6）。用制备的单克隆抗体包被酶标板，通过一系列的优化，建立了BEV-2双抗夹心ELISA检测方法。建立的ELISA方法检测BEV-2病毒量的最低限为100 TCID₅₀•0.1 mL^-1，与BVDV、IBRV、BLV等病毒无交叉反应。本研究首次制备了牛肠道病毒2型单克隆抗体，建立了检测BEV-2抗原的双抗体夹心ELISA方法，该方法特异性强、敏感性高、重复性好，为进一步研究和开发快速诊断牛肠道病毒试剂盒奠定了基础。

关键词: 牛肠道病毒2型, 单克隆抗体, 夹心ELISA

Abstract:

The study was aimed to prepare monoclonal antibody against BEV-2 and develop ELISA for the detection of antigen of bovine enterovirus type 2 (BEV-2) based on the monoclonal antibody.The purified BEV-2 VP1⁺ recombinant protein was used to immunize BALB/c mice，of which splenocytes were fused with SP2/0 cells by PEG4000．The selection of positive hybridomas was conducted.Two hybridomas (designated as 1G1 and 5G6) secreting monoclonal antibodies(mAb) against BEV-2 VP1⁺ protein were selected.Based on the monoclonal antibodies against BEV-2，a sandwich ELISA was established to detect BEV-2 through a series of optimization.The sensitivity of the sandwich ELISA was 100 TCID₅₀•0.1 mL^-1，and this method had no cross-reaction with BVDV，IBRV and BLV.The results showed that the sandwich ELISA was specific，sensitive and reproducible.This is the first domestic report of establishment of sandwich ELISA for the detection of BEV-2 based on the preparation of the monoclonal antibodies，and it provided a basis for development of kit for rapid diagnosing BEV-2.

Key words: bovine enterovirus type 2, monoclonal antibody, sandwich ELISA

中图分类号:

S852.659.6

郭金玉，张鹤晓，吴丹，高志强，张冉，张乐萃. 牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(11): 2025-2031.

GUO Jin-yu， ZHANG He-xiao，WU Dan，GAO Zhi-qiang，ZHANG Ran，ZHANG Le-cui. Preparation and Application of the Monoclonal Antibodies against Bovine Enterovirus Type 2[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(11): 2025-2031.

参考文献

［1］SMYTH M S，MARTIN J H.Structural，biochemical and electrostatic basis of serotype specificity in bovine enteroviruses［J］.Arch Virol，2001，146(2)：347-355.
［2］MCCARTHY F M，SMITH G A，MATTICK J S.Molecular characterisation of Australian bovine enteroviruses［J］.Vet Microbiol，1999，68(1-2)：71-81.
［3］侯强，彭伍平，孙元，等.猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备［J］.中国兽医科学，2008，38(1)：1-5.
HOU Q， PENG W P， SUN Y，et al.Expression of the truncated E2 protein-encoding gene of classical swine fever virus in Escherichia coli and preparation of a monoclonal antibody against E2 protein［J］.Chinese Veterinary Science，2008，38(1)：1-5.(in Chinese)
［4］KÖHLER G，MILSTEIN C.Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity［J］.Nature，1975，256(5517)：495-497.
［5］郭金玉，高志强，张鹤晓，等.牛肠道病毒2型VP1⁺表达和间接ELISA方法的建立与应用［J］.中国兽医杂志， 2014，50(11)：40-43.
GUO J Y， GAO Z Q， ZHANG H X，et al.Development and application of indirect ELISA for the detection of antibodies against bovine enterovirus type 2 based on VP1⁺ protein expression［J］. Chinese Journal of Veterinary Medicine，2014，50(11)：40-43.(in Chinese)
［6］张小兵，吴萌，闫静辉.ELISA法快速测定McAb培养上清中鼠源IgG质量浓度［J］.河北省科学院学报， 2008，25(2)：49-52，76.
ZHANG X B， WU M， YAN J H.Rapid measurement of the mouse IgG concentration by a sandwich ELISA［J］.Journal of the Hebei Academy of Sciences，2008，25(2)：49-52，76.(in Chinese)
［7］吴丹，吴涛，张鹤晓，等.牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立［J］.中国预防兽医学报，2012，34(11)：903-906.
WU D， WU T， ZHANG H X，et al.Establishment of real-time RT-PCR method for detection of bovine enterovirus［J］.Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine，2014，34(11)：903-906.(in Chinese)
［8］BLAS-MACHADO U，SALIKI J T，SÁNCHEZ S，et al.Pathogenesis of a bovine enterovirus-1 isolate in experimentally infected calves［J］.Vet Pathol，2011，48(6)：1075-1084.
［9］侯佩莉，程洪兵，刘晓，等.牛肠道病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用［J］.山东农业科学，2014，46(2)：13-16.
HOU P L， CHENG H B， LIU X，et al.Establishment and application of RT-PCR for detection of bovine enterovirus［J］.Shandong Agricultural Sciences，2014，46(2)：13-16.(in Chinese)

[1]	王盼举, 樊新丽, 张梦圆, 宋晶晶, 李敏, 吾力江, 巴音查汗. 地方株马驽巴贝斯虫Bc48截短体单克隆抗体的制备及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1882-1887.
[2]	唐泽群, 罗海燕, 葛铭, 郭荣, 许丹蕾, 张瑞莉. 抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1292-1300.
[3]	唐泽群, 罗海燕, 葛铭, 郭荣, 许丹蕾, 张瑞莉. 抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1292-1300.
[4]	梁文花, 贾云慧, 许程志, 吴运谱, 陈艳, 杨焕良, 乔传玲, 陈化兰. 两株H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗病毒活性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(7): 1460-1466.
[5]	梁文花, 贾云慧, 许程志, 吴运谱, 陈艳, 杨焕良, 乔传玲, 陈化兰. 两株H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白中和性单克隆抗体的制备及抗病毒活性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(7): 1460-1466.
[6]	张永宁，宋姗姗，吴绍强，林祥梅. 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的表达及单克隆抗体制备[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(6): 1280-1286.
[7]	张永宁，宋姗姗，吴绍强，林祥梅. 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的表达及单克隆抗体制备[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(6): 1280-1286.
[8]	姚静静，胡骁飞，韩俊岭，李青梅，王方雨，邓瑞广，张改平. 伏马菌素B₁单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(5): 1009-1017.
[9]	姚静静，胡骁飞，韩俊岭，李青梅，王方雨，邓瑞广，张改平. 伏马菌素B₁单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(5): 1009-1017.
[10]	刘月，张宇飞，孙晓林，刘淑英. 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(5): 800-807.
[11]	刘月，张宇飞，孙晓林，刘淑英. 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(5): 800-807.
[12]	郭金玉，张鹤晓，吴丹，高志强，张冉，张乐萃. 牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(11): 2025-2031.
[13]	张改梅，贾红，侯绍华，鑫婷，郭晓宇，袁维峰，刘淑清，吴竞，高新桃，李明，董瑞凯，朱鸿飞. 检测牛IFN-γ双抗体夹心ELISA的建立及在牛结核病诊断上的初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(10): 1693-1698.
[14]	张改梅，贾红，侯绍华，鑫婷，郭晓宇，袁维峰，刘淑清，吴竞，高新桃，李明，董瑞凯，朱鸿飞. 检测牛IFN-γ双抗体夹心ELISA的建立及在牛结核病诊断上的初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(10): 1693-1698.
[15]	贺生芳，付向晶，刘阳坤，慕国辉，刘海金，王兴龙，杜恩岐，杨增岐. 1种高效纳米抗体生产方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2013, 44(9): 1487-1493.

牛肠道病毒2型单克隆抗体的制备及其应用研究

Preparation and Application of the Monoclonal Antibodies against Bovine Enterovirus Type 2

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价