伏马菌素B1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2016.05.019

畜牧兽医学报 ›› 2016, Vol. 47 ›› Issue (5): 1009-1017.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2016.05.019

伏马菌素B₁单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用

姚静静¹，胡骁飞¹，韩俊岭²，李青梅¹，王方雨¹，邓瑞广¹，张改平^1，3*

（1.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室，郑州 450002；2.新乡医学院第一附属医院，新乡 453100；3.河南农业大学，郑州 450002）

收稿日期:2015-10-22 出版日期:2016-05-23 发布日期:2016-05-23
通讯作者: 张改平（1960-），男，河南内黄人，中国工程院院士，E-mail: zhanggaiping2003@163.com
作者简介:姚静静（1988-），女，河南禹州人，助理研究员，硕士，主要从事食品安全检测研究，E-mail:yaojinglucky8023@163.com
基金资助:
国家科技支撑计划课题（2014BAD13B05）；河南省农业科学院优秀青年基金项目（2013YQ29）；河南省基础与前沿项目（162300410135）

Development and Preliminary Application of the Monoclonal Antibody against Fumonisin B₁

YAO Jing-jing¹，HU Xiao-fei¹，HAN Jun-ling²，LI Qing-mei¹，WANG Fang-yu¹，DENG Rui-guang¹，ZHANG Gai-ping^1，3*

(1.Henan Academy of Agriculture Science/Key Laboratory of Animal Immunology，Ministry of Agriculture/ Henan Key Laboratory of Animal Immunology，Zhengzhou 450002，China；2.The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University，Xinxiang 453100，China；3.Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China)

Received:2015-10-22 Online:2016-05-23 Published:2016-05-23

摘要/Abstract

摘要：

拟制备灵敏高、特异性强的抗伏马菌素B₁（FB₁）单克隆抗体，并初步应用于FB₁的检测，以期为FB₁的免疫学快速检测提供技术支持。采用碳二亚胺法（EDC）制备人工抗原FB₁-BSA和FB₁-OVA。以免疫原FB₁-BSA免疫BALB/c小鼠，每四周免疫一次。四免后，小鼠脾B细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合后，采用ELISA筛选，建立分泌抗FB₁抗体的单克隆杂交瘤细胞株；采用动物体内诱生腹水方法制备出抗FB₁单抗，并鉴定单抗的各种性能；初步建立FB₁免疫学检测方法。结果得到1株稳定分泌抗FB₁单抗的杂交瘤细胞株2E11-H3，该细胞株分泌的 mAbs的效价高达1∶1.02×10⁶，亲和力常数平均值为7.98× 10¹⁰ L•mol^-1，亚型为IgG₃。FB₁ mAbs的工作浓度为1∶6.0×10⁴，与FB₁发生特异性反应，间接竞争ELISA测得IC₅₀=43.65 ng•mL^-1；与FB₁结构类似物FB₂和FB₃的交叉反应率分别为385% 和72.4%，与其他霉菌毒素及载体蛋白BSA和OVA均无交叉反应。样品回收率在85.85%~114.07%，平均值为98.81%；变异系数为10.11%。本研究制备出了灵敏度高、特异性强、亲和力高的FB₁单抗，并初步建立FB₁免疫学检测方法。

Abstract:

A monoclonal antibody against fumonisin B₁(FB₁) was developed and applied to establish rapid immunology detection method of FB₁.FB₁was successfully conjugated with BSA and OVA using EDC，respectively.Hybridoma cell line secreting monoclona antibodys (mAbs) against FB₁was produced by fusing murine SP2/0 cells with the spleen B cells of BALB/c mice which was immunized with FB₁-BSA for four times，every four weeks at a time.The mAbs against FB₁were obtained by inducing ascites in the mice body.The affinity，titer，substype and sensibility of the mAbs were assayed with ELISA.Furthermore，the mAbs were preliminarily applied in immunology detection of FB₁.The mAbs against FB₁ whose substype was tested as IgG₃ were secreted by hybridoma cell line (2E11-H3).The working concentration of the mAbs was 1∶6.0×10⁴，affinity constant was 7.98× 10¹⁰ L•mol^-1，IC₅₀was 43.65 ng•mL^-1.The cross reaction ratios with Fumonisin B₂ and B₃ were accordingly 385% and 72.4%，while none with other analogues and carrier protein.The recovery rate of sample was among 85.85%-114.07%，the average was 98.81% and the coefficient of variation was 10.11%.The monoclonal antibody against FB₁ with high affinity，specificity and sensibility was produced and preliminarily applied in immunology determination of FB₁.

中图分类号:

S859.8

姚静静，胡骁飞，韩俊岭，李青梅，王方雨，邓瑞广，张改平. 伏马菌素B₁单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(5): 1009-1017.

YAO Jing-jing，HU Xiao-fei，HAN Jun-ling，LI Qing-mei，WANG Fang-yu，DENG Rui-guang，ZHANG Gai-ping. Development and Preliminary Application of the Monoclonal Antibody against Fumonisin B₁[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2016, 47(5): 1009-1017.

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Development and Preliminary Application of the Monoclonal Antibody against Fumonisin B₁

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