禽呼肠孤病毒蛋白质启动PI3K/Akt信号通路的分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.09.017

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (9): 1613-1619.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.09.017

禽呼肠孤病毒蛋白质启动PI3K/Akt信号通路的分析

谢丽基，谢芝勋^*，黄莉，谢志勤，邓显文，刘加波，罗思思，黄娇玲，曾婷婷，张艳芳，王盛

（广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室，南宁 530001）

收稿日期:2014-12-19 出版日期:2015-09-23 发布日期:2015-09-22
通讯作者: 谢芝勋， E-mail: xiezhixun@126.com
作者简介:谢丽基（1981-），女，广西灵山人，副研究员，硕士，主要从事动物传染病病原分子生物学研究, Tel:0771-3120371, E-mail: xie3120371@126.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31160512）；广西特聘专家专项（2011B020）；广西科技重大专项（1222003-2-4）

The Study of the Activation of PI3K/Akt Pathway by the Protein of Avian Reovirus

XIE Li-ji，XIE Zhi-xun^*，HUANG Li，XIE Zhi-qin，DENG Xian-wen，LIU Jia-bo，LUO Si-si，HUANG Jiao-ling，ZENG Ting-ting，ZHANG Yan-fang，WANG Sheng

(Guangxi Veterinary Research Institute，Guangxi Key Laboratory of Animal Vaccines and Diagnostics，Nanning 530001，China )

Received:2014-12-19 Online:2015-09-23 Published:2015-09-22

摘要/Abstract

摘要：

旨在找出激活PI3K/Akt信号通路的禽呼肠孤病毒（ARV）蛋白质。选取ARV中潜在具有激活PI3K/Akt信号通路活性的σA、σNS、μA、μB和μNS蛋白作为研究对象，将这5个基因克隆到真核表达载体pcAGEN，成功构建重组质粒σA-pcAGEN、σNS-pcAGEN、μA-pcAGEN、μB-pcAGEN和μNS-pcAGEN。将构建的重组质粒转染Vero细胞，采用间接免疫荧光和Western blot检测目的蛋白质的表达，并通过流式细胞术和Western blot，检测转染后Vero细胞磷酸化Akt（P-Akt）的表达量。结果显示，5个目的蛋白质均得到表达。转染σA-pcAGEN或σNS-pcAGEN的Vero细胞，P-Akt的表达量明显升高，而使用PI3K特异性抑制剂LY294002则能抑制P-Akt的表达量明显升高。结果表明，ARV的σA蛋白和σNS蛋白能激活细胞的PI3K/Akt信号通路。

关键词: 禽呼肠孤病毒, PI3K/Akt信号通路, 蛋白质

Abstract:

This study was conducted to find out the avian reovirus (ARV) proteins which can activate the phosphatidylinositol 3-Kinase-dependent Akt(PI3K/Akt) pathway.According to the analysis of amino acid sequence of ARV proteins，the σA，σNS，μA，μB and μNS were selected as the putative proteins which mediated the activation of PI3K/Akt pathway.Reconbinant plasmids，σA-pcAGEN，σNS-pcAGEN，μA-pcAGEN，μB-pcAGEN and μNS-pcAGEN were constructed and transfected into Vero cells，and the expression of the target genes were identified by immunofluorescence test and Western blot.The phosphorylated Akt (P-Akt) profile of transfected cells were examined by flow cytometry and Western blot.The results showed that σA，σNS，μA，μB and μNS genes were expressed in the Vero cells，and the expression of P-Akt of σA-pcAGEN and σNS-pcAGEN groups increased markedly.The PI3K inhibitor LY294002 could inhibit the expression of the P-Akt of σA-pcAGEN and σNS-pcAGEN groups.The results indicate that σA and σNS protein could activate the PI3K/Akt pathway.

Key words: ARV, PI3K/Akt pathway, protein

中图分类号:

S852.659.4

谢丽基，谢芝勋，黄莉，谢志勤，邓显文，刘加波，罗思思，黄娇玲，曾婷婷，张艳芳，王盛. 禽呼肠孤病毒蛋白质启动PI3K/Akt信号通路的分析[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(9): 1613-1619.

XIE Li-ji，XIE Zhi-xun，HUANG Li，XIE Zhi-qin，DENG Xian-wen，LIU Jia-bo，LUO Si-si，HUANG Jiao-ling，ZENG Ting-ting，ZHANG Yan-fang，WANG Sheng. The Study of the Activation of PI3K/Akt Pathway by the Protein of Avian Reovirus[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(9): 1613-1619.

参考文献

［1］VIVANCO I，SAWYERS C L.The phosphatidylinositol 3-Kinase AKT pathway in human cancer［J］.Nat Rev Cancer，2002，2(7)：489-501.
［2］KAY B K，WILLIAMSON M P，SUDOL M.The importance of being proline：the interaction of proline-rich motifs in signaling proteins with their cognate domains［J］. FASEB J，2000，14(2)：231-241.
［3］PAWSON T.Protein modules and signalling networks［J］.Nature，1995，373(6515)：573-580.
［4］STREET A，MACDONALD A，CROWDER K，et al.The Hepatitis C virus NS5A protein activates a phosphoinositide 3-kinase-dependent survival signaling cascade［J］.J Biol Chem，2004，279(13)：12232-12241.
［5］SONGYANG Z，SHOELSON S E，CHAUDHURI M，et al.SH2 domains recognize specific phosphopeptide sequences［J］. Cell，1993，72(5)：767-778.
［6］SHIN Y，LIU Q，TIKOO S K，et al.Influenza A virus NS1 protein activates the phosphatidylinositol 3-kinase(PI3K)/Akt pathway by direct interaction with the p85 subunit of PI3K［J］.J Gen Virol，2007，88(Pt 1)：13-18.
［7］ZHANG B，SPANDAU D F，ROMAN A.E5 protein of human papillomavirus type 16 protects human foreskin keratinocytes from UV B-irradiation-induced apoptosis［J］.J Virol，2002，76(1)：220-231.
［8］LABRADA L，BODELÓN G，VIÑUELA J，et al.Avian reoviruses cause apoptosis in cultured cells：viral uncoating，but not viral gene expression，is required for apoptosis induction［J］.J Virol，2002，76(16)：7932-7941.
［9］SHIH W L，HSU H W，LIAO M H，et al.Avian reovirus sigmaC protein induces apoptosis in cultured cells［J］.Virology，2004，321(1)：65-74.
［10］LIN P Y，LIU H J，LIAO M H，et al.Activation of PI 3-kinase/Akt/NF-κB and Stat3 signaling by avian reovirus S1133 in the early stages of infection results in an inflammatory response and delayed apoptosis［J］.Virology，2010，400(1)：104-114.
［11］LIU H J，LEE L H，HSU H W，et al.Molecular evolution of avian reovirus ：evidence for genetic diversity and reassortment of the S-class genome segments and multiple cocirculating lineages［J］.Virology，2003，314(1)：336-349.
［12］TENG L，XIE Z，XIE L，et al.Sequencing and phylogenetic analysis of an avian reovirus genome［J］.Virus Genes，2014，48(2)：381-386.
［13］XIE Z，QIN C，XIE L，et al.Recombinant protein-based ELISA for detection and differentiation of antibodies against avian reovirus in vaccinated and non-vaccinated chickens［J］. J Virol Methods， 2010，165(1)：108-111.
［14］WANG X，ZHANG H，ABEL A M，et al.Role of phosphatidylinositol 3-kinase(PI3K) and Akt1 kinase in porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) replication［J］. Arch Virol，2014，159(8)：2091-2096.
［15］BARBER G N.Host defense，viurses and apoptosis［J］.Cell Death Differ，2001，8(2)：113-126.
［16］BENEDICT C A，NORRIS P S，WARE C F.To kill or be killed：viral evasion of apoptosis［J］.Nat Immunol，2002，3(11)：1013-1018.
［17］HAY S，KANNOURAKIS G.A time to kill：viral manipulation of the cell death program［J］.J Gen Virol，2002，83(Pt 7)：1547-1564.
［18］KRAJCSI P，WOLD W S.Viral proteins that regulate cellular signalling［J］.J Gen Virol，1998，79(Pt 6)：1323-1335.
［19］D’ANGLEMONT DE TASSIGNY A，BERDEAUX A，SOUKTANI R，et al.The volume-sensitive chloride channel inhibitors prevent both contractile dysfunction and apoptosis induced by doxorubicin through PI3kinase，Akt and Erk 1/2［J］.Eur J Heart Fail，2008，10(1)：39-46.

[1]	赵畅, 张江, 白云龙, 孙书函, 宋玉锡, 夏成. 基于iTRAQ技术的卵巢静止奶牛血清差异蛋白分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 972-982.
[2]	郝庆玲, 景炅婕, 侯淑宁, 许冬梅, 赵成萍, 朱芷葳, 吕丽华, 李鹏飞. 基于Label-free技术分析牛卵泡蛋白质组分及关键调控蛋白[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 983-992.
[3]	于可响, 刘存霞, 宫晓, 路晓, 胡峰, 郭效珍, 马秀丽, 李玉峰, 黄兵, 宋敏训. 一株肉鸡呼肠孤病毒变异株的分离鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1039-1047.
[4]	朱可蒙, 谨瑾, 王宁, 辛九庆, 刘恒贵. 蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1073-1081.
[5]	郝庆玲, 景炅婕, 侯淑宁, 许冬梅, 赵成萍, 朱芷葳, 吕丽华, 李鹏飞. 基于Label-free技术分析牛卵泡蛋白质组分及关键调控蛋白[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 983-992.
[6]	赵畅, 张江, 白云龙, 孙书函, 宋玉锡, 夏成. 基于iTRAQ技术的卵巢静止奶牛血清差异蛋白分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 972-982.
[7]	于可响, 刘存霞, 宫晓, 路晓, 胡峰, 郭效珍, 马秀丽, 李玉峰, 黄兵, 宋敏训. 一株肉鸡呼肠孤病毒变异株的分离鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1039-1047.
[8]	朱可蒙, 谨瑾, 王宁, 辛九庆, 刘恒贵. 蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(5): 1073-1081.
[9]	周玉成, 郭梦楠, 程世鹏, 张海威, 周曼莉, 乔连江, 杨艳玲. 布鲁菌16M感染后宿主免疫相关蛋白质泛素化修饰的差异分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(11): 2290-2301.
[10]	韩硕, 王宇轩, 刘娟, 邹紫雯, 李鑫丽, 罗林, 沈冰蕾. Bta-miR-223靶基因及调控网络的生物信息学分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(10): 2171-2174.
[11]	张然然, 刘华淼, 王洪亮, 李洋, 邢秀梅. 基于label-free技术的梅花鹿(Cervus nippon)茸角蛋白组分比较[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(10): 2005-2012.
[12]	黄文琴, 祁敏丽, 吕小康, 崔凯, 王世琴, 刁其玉, 张乃锋. 饲粮能量和蛋白质水平对21～60日龄湖羊生长、消化性能及血清指标的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 105-114.
[13]	黄文琴, 祁敏丽, 吕小康, 崔凯, 王世琴, 刁其玉, 张乃锋. 饲粮能量和蛋白质水平对21～60日龄湖羊生长、消化性能及血清指标的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 105-114.
[14]	徐梦飞, 卢平萍, 马勋, 张艳艳, 王炜烨, 孟季蒙, 王正荣, 薄新文. 细粒棘球绦虫蛋白质组学研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(3): 466-476.
[15]	王文龙, 赵学亮, 孙柯, 冯陈晨, 白丽艳, 王姝懿, 王梦雅, 刘春霞. 斯氏副柔线虫CAMK/TSSK蛋白激酶基因的克隆及其蛋白质结构与抗原表位预测分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(3): 644-651.

禽呼肠孤病毒蛋白质启动PI3K/Akt信号通路的分析

The Study of the Activation of PI3K/Akt Pathway by the Protein of Avian Reovirus

PDF

可视化

摘要/Abstract

引用本文

使用本文

参考文献

相关文章 15

编辑推荐

Metrics

本文评价