SLA-Ⅰα链和β链的原核表达与抗血清制备

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.07.020

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (7): 1224-1231.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.07.020

SLA-Ⅰα链和β链的原核表达与抗血清制备

刘莹，杜吉革，盖新娜，周磊，郭鑫^*，杨汉春^*

（中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人兽共患病重点实验室，北京 100193）

收稿日期:2014-10-13 出版日期:2015-07-23 发布日期:2015-07-20
通讯作者: 郭鑫，教授，Tel：010-62731296，E-mail：guoxin@cau.edu.cn；杨汉春，教授，E-mail：yanghanchun1@cau.edu.cn
作者简介:刘莹（1989-），女，江苏徐州人，硕士，主要从事动物病毒学与免疫学研究，E-mail：liuying8943@163.com
基金资助:
教育部博导基金（20120008110039）；国家973项目（2014CB542701）

Prokaryotic Expression of SLA-Ⅰ α Chain and β Chain and Antiserum Preparation

LIU Ying，DU Ji-ge，GE Xin-na，ZHOU Lei，GUO Xin^*，YANG Han-chun^*

（Key Laboratory of Animal Epidemiology and Zoonosis of the Ministry of Agriculture，College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

Received:2014-10-13 Online:2015-07-23 Published:2015-07-20

摘要/Abstract

摘要：

猪主要组织相容性复合体Ⅰ类分子又称猪白细胞抗原Ⅰ类分子（SLA-Ⅰ），参与内源性抗原在体内的递呈过程，其结构包括重链（α链）和轻链（β链）两部分。本研究首先采用RT-PCR从原代猪肺泡巨噬细胞（PAM）中扩增出SLA-Ⅰ α链胞外区基因和β链基因；继而利用原核表达系统获得包涵体形式表达的SLA-Ⅰ α链胞外区和β链重组蛋白质；将目的重组蛋白质洗涤、复性、纯化后，经Western blot及质谱技术进行验证。以纯化的重组蛋白质免疫兔制备抗血清，经间接ELISA检测其效价达1∶256 000。以制备的抗血清进行Western blot和间接免疫荧光试验，结果显示，所制备的抗血清能够特异性地识别原代及传代PAM表达的SLA-Ⅰ α链及β链蛋白。研究结果不仅为SLA-Ⅰ类分子的功能研究提供了有用的分析试剂，也为病毒感染的免疫机制研究奠定了必要的基础。

关键词: SLA-Ⅰ &alpha, 链, SLA-Ⅰ &beta, 链, 原核表达, 抗血清

Abstract:

The swine major histocompatibility complex class Ⅰ or swine leukocyte antigen class Ⅰ (SLA-Ⅰ)，made of the heavy chain (α chain) and light chain (β chain)，is involved in the process of endogenous antigen presenting.In the present study，we first amplified the genes of the extracellular region in SLA-Ⅰα chain and β chain from porcine alveolar macrophage (PAM) using RT-PCR.The two genes were then cloned into the prokaryotic expression vectors and induced to express in the form of inclusion bodies.After being washed，refolded and purified，the recombinant proteins were confirmed by western blot and mass spectrometer.Then，the rabbit antiserum against the recombinant proteins was prepared with titers of 1：256 000 by an indirect ELISA.Finally，the antiserum was used in Western blot and indirect immunofluorescence assay，showing that the antiserum can specifically react with SLA-Ⅰ α chain and β chain expressed in both PAM and PAM cell line 3D4/21.This study not only provides useful reagents for analyzing the function of SLA-Ⅰ，but also develops the basis for further study on the mechanisms associated with immune responses induced by viral infections.

Key words: SLA-Ⅰ &alpha, chain, SLA-Ⅰ &beta, chain, prokaryotic expression, antiserum

中图分类号:

S852.4

刘莹，杜吉革，盖新娜，周磊，郭鑫，杨汉春. SLA-Ⅰα链和β链的原核表达与抗血清制备[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(7): 1224-1231.

LIU Ying，DU Ji-ge，GE Xin-na，ZHOU Lei，GUO Xin，YANG Han-chun. Prokaryotic Expression of SLA-Ⅰ α Chain and β Chain and Antiserum Preparation[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(7): 1224-1231.

参考文献

［1］ZHANG Y，WILLIAMS D B.Assembly of MHC class I molecules within the endoplasmic reticulum ［J］.Immunol Res，2006，35(1-2)：151-162.
［2］寇恂，万瑛.MHCⅠ类分子胞内转运机制研究进展［J］.免疫学杂志，2013，29（4）：361-364.
KOU X，WAN Y.Recent developments in the intracellular transport of MHC classⅠmolecules ［J］.Immunological Journal，2013，29(4)：361-364.(in Chinese)
［3］MAHR J A，GOODING L R.Immune evasion by adenoviruses ［J］.Immunol Rev，1999，168：121-130.
［4］DASGUPTA A，HAMMARLUND E，SLIFKA M K，et al.Cowpox virus evades CTL recognition and inhibits the intracellular transport of MHC class I molecules ［J］.J Immunol，2007，178(3)：1654-1661.
［5］PANDE N T，POWERS C，AHN K，et al.Rhesus cytomegalovirus contains functional homologues of US2，US3，US6 and US11 ［J］.J Virol，2005，79(9)：5786-5798.
［6］REUSCH U，MURANYI W，LUCIN P，et al.A cytomegalovirus glycoprotein re-routes MHC class I complexes to lysosomes for degradation ［J］.EMBO J，1999，18(4)：1081-1091.
［7］LUNNEY J K，HO C S，WYSOCKI M，et al.Molecular genetics of the swine major histocompatibility complex，the SLA complex ［J］. Dev Comp Immunol，2009，33(3)：362-374.
［8］WANG X，EATON M，MAYER M，et al.Porcine reproductive and respiratory syndrome virus productively infects monocyte-derived dendritic cells and compromises their antigen-presenting ability ［J］.Arch Virol，2007，152(2)：289-303.
［9］WEESENDORP E，STOCKHOFE-ZURWIEDEN N，POPMA-DE GRAAF D J，et al.Phenotypic modulation and cytokine profiles of antigen presenting cells by European subtype 1 and 3 porcine reproductive and respiratory syndrome virus strains in vitro and in vivo ［J］.Vet Microbiol，2013，167(3-4)：638-650.
［10］张念之.猪SLA I 复合体和CD8分子晶体结构与结合病毒表位机理的研究［D］.北京：中国农业大学，2011.
ZHANG N Z.Crystal structures of SLA I complex and CD8 molecule and the mechanism of SLA I presenting viral epitopes ［D］.Beijing：China Agricultural University，2011.(in Chinese)
［11］高凤山，李新生，李云岗，等.巴马小型猪SLA-2和β₂m复合体蛋白的构建及二级结构测定分析［J］.畜牧兽医学报，2007，38（3）：263-270.
GAO F S，LI X S，LI Y G，et al.Cloning of SLA-2 and β₂m from Bama Miniature Pig and construction of the protein complex ［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2007，38(3)：263-270.(in Chinese)
［12］HANSEN T H，BOUVIER M.MHC class I antigen presentation：learning from viral evasion strategies ［J］. Nat Rev Immunol，2009，9(7)：503-513.

[1]	高俊莹, 张东超, 李璇, 王华琳, 姜宁. 弓形虫表面抗原SAG1黏附宿主细胞表面硫化肝素的特性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(9): 1874-1881.
[2]	王俊伟, 陈芳洲, 库旭钢, 李畅, 何启盖. 基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 454-460.
[3]	王俊伟, 陈芳洲, 库旭钢, 李畅, 何启盖. 基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 454-460.
[4]	乔传民, 刘为伟, 杨强, 江浩筠, 黄路生, 幸宇云. 编辑PFF细胞的P53基因及其信号通路中重要基因的表达分析[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(11): 2215-2225.
[5]	王艳芳, 周雅坪, 郭婷, 张新竹, 吴倩, 陈昕迪, 郝永清. 牛支原体EF-Tu基因的克隆表达、亚细胞定位及间接ELISA方法建立[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 134-142.
[6]	陈申申, 马家乐, 张新锋, 曲向阳, 潘子豪, 姚火春. 致仔猪脑膜炎猪链球菌的分离鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 143-150.
[7]	王艳芳, 周雅坪, 郭婷, 张新竹, 吴倩, 陈昕迪, 郝永清. 牛支原体EF-Tu基因的克隆表达、亚细胞定位及间接ELISA方法建立[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 134-142.
[8]	陈申申, 马家乐, 张新锋, 曲向阳, 潘子豪, 姚火春. 致仔猪脑膜炎猪链球菌的分离鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 143-150.
[9]	张媛媛, 许蓉, 何川川, 李肖纯, 程贵凤, 郭露, 刘金明, 李浩, 古少鹏, 金亚美. 日本血吸虫ELAV-like 2基因的克隆、表达及功能分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(9): 1987-1997.
[10]	张媛媛, 许蓉, 何川川, 李肖纯, 程贵凤, 郭露, 刘金明, 李浩, 古少鹏, 金亚美. 日本血吸虫ELAV-like 2基因的克隆、表达及功能分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(9): 1987-1997.
[11]	李成, 张雨迪, 黄小波, 刘浩宇, 刘志鹏, 赵玉佳, 曹三杰, 文心田, 文翼平, 赵勤, 伍锐. 猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(6): 1256-1264.
[12]	李成, 张雨迪, 黄小波, 刘浩宇, 刘志鹏, 赵玉佳, 曹三杰, 文心田, 文翼平, 赵勤, 伍锐. 猪丁型冠状病毒S1基因的克隆、原核表达及多克隆抗体制备[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(6): 1256-1264.
[13]	赵亚南, 杨康, 张宝江, 李斌, 苏艳. 马流产沙门菌鞭毛蛋白FliC对马腺疫链球菌SeM蛋白免疫效应分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(5): 1020-1026.
[14]	赵亚南, 杨康, 张宝江, 李斌, 苏艳. 马流产沙门菌鞭毛蛋白FliC对马腺疫链球菌SeM蛋白免疫效应分析[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(5): 1020-1026.
[15]	王金玉, 姜晓文, 王娜, 王婕然, 于苗苗, 钟秋, 于文会. 穿心莲内酯影响猪链球菌生物被膜形成[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(3): 629-636.

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