单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.016

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (6): 998-1003.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.06.016

单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

谢堃¹，乔军^1* ，孟庆玲¹，彭叶龙¹，赵海龙¹，马玉¹，陈诚¹，才学鹏²，陈创夫¹

（1.石河子大学动物科技学院，动物疾病防控兵团重点实验室，石河子 832003；2.中国农业科学院兰州兽医研究所，家畜疫病病原生物学国家重点实验室，兰州 730046 ）

收稿日期:2014-09-01 出版日期:2015-06-23 发布日期:2015-06-19
通讯作者: 乔军，Tel：+86-993-2055036；E-mail：qj710625@163.com
作者简介:谢堃（1990-），女，硕士生，主要从事病原分子生物学研究，E-mail：xiekuns@gmail.com
基金资助:
国家国际科技合作专项（2014DFR31310）；国家自然科学基金（30960274；31360596）

Construction，Identification of ncRNA rli87 Gene Deletion Strains Listeria monocytogenes and Its Growth Characteristics

XIE Kun¹，QIAO Jun^1* ，MENG Qing-ling¹，PENG Ye-long¹，ZHAO Hai-long¹，MA Yu¹，CHEN Cheng¹，CAI Xue-peng²，CHEN Chuang-fu¹

(1.Key Laboratory of Prevention and Control of Animal Disease，College of Animal Science and Technology，Shihezi University，Shihezi 832003，China；2.Key Laboratory of National Veterinary Etiological Biology，Lanzhou Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Lanzhou 730046，China)

Received:2014-09-01 Online:2015-06-23 Published:2015-06-19

摘要/Abstract

摘要：

拟构建单核细胞增生李斯特菌（LM）非编码RNA ril87基因缺失株，对其进行分子鉴定，分析rli87基因缺失对LM生长的影响。用融合PCR方法构建LM-SB5 rli87基因缺失突变体，并构建pKSV7-Δrli87穿梭载体，将其转化入LM-SB5感受态细胞，利用温度（42 ℃）和氯霉素（10 μg•mL^-1）的抗性双重压力来实现同源重组，筛选同源重组菌进行分子鉴定，测定缺失株与母源野毒株37 ℃条件下生长曲线。结果显示：PCR和测序结果证实成功获得了LM-Δrli87重组菌。通过25代的连续传代，PCR鉴定结果显示，该缺失株具有良好的遗传稳定性。与野毒株进行对比，在37 ℃条件下缺失株与野毒株的生长差异不显著（P>0.05）。非编码RNA rli87基因在37 ℃条件下对LM生长没有明显的调控作用。

关键词: rli87基因, LM感受态细胞, 缺失株, 生长特性, 同源重组

Abstract:

In this study，non-coding RNA rli87 gene deletion strain of LM was constructed and identified，and growth characteristics of deletion strain was studied.The rli87 gene deletion mutant was constructed by fusion PCR method，and then pKSV7-Δrli87 shuttle vector was constructed，which was transformed into competent cells LM-SB5.Homologous recombination was conducted using temperature (42 ℃) and chloramphenicol (10 μg•mL^-1) resistance to achieve the rli87 gene deletion strain，and growth curves of wild strain and deletion strain were assayed at 37 ℃.The PCR and sequencing results confirmed that LM-Δrli87 was successfully obtained.PCR identification results showed that the deletion strain has good genetic stability through 25 generations of continuous passage.Comparison with the wild strain，there was no significant difference (P>0.05) in growth between deletion mutant and wild strain at 37 ℃.The results suggest that rli87 gene did not play significant role in regulatory growth under the conditions of 37 ℃.

Key words: rli87 gene, Listeria monocytogenes, deletion strain, growth characteristics, homologous recombination

中图分类号:

S852.61

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单核细胞增生李斯特菌非编码RNA rli87基因缺失株的构建、鉴定及其生长特性初步研究

Construction，Identification of ncRNA rli87 Gene Deletion Strains Listeria monocytogenes and Its Growth Characteristics

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