鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.015

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (8): 1309-1316.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.015

鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究

孙永珍^1，2，赵妍^1,2，崔红玉^1,2，王云峰^1,2*

（1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，兽医生物技术国家重点实验室/禽呼吸道病创新团队，哈尔滨 150001；2.哈尔滨动物生物制品国家工程研究中心有限公司，哈尔滨 150001)

收稿日期:2014-01-09 出版日期:2014-08-23 发布日期:2014-08-22
通讯作者: 王云峰，E-mail：yfwang@hvri.ac.cn
作者简介:孙永珍（1988-），女，河南郑州人，硕士生，主要从事鸡传染性喉气管炎研究，E-mail：sunyongzhenhappy@163.com
基金资助:
中央级公益性科研院所基本科研业务费项目（0302012009）；国家自然科学基金青年基金（31302092）

Preparation of Polyclonal Antibodies against gC Protein of Infectious Laryngotracheitis Virus，and Intracellular Localization and Function Research of gC Protein

SUN Yong-zhen^1,2，ZHAO Yan^1,2，CUI Hong-yu^1,2，WANG Yun-feng^1,2*

（1.State Key Laboratory of Veterinary Biotechnology/Avian Respiratory Disease and Immunology Group，Harbin Veterinary Research Institute，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Harbin 150001，China；2.National Engineering Research Center of Veterinary Biologics，Harbin 150001，China）

Received:2014-01-09 Online:2014-08-23 Published:2014-08-22

摘要/Abstract

摘要：

为制备对鸡传染性喉气管炎具有诊断应用价值的抗体，并研究鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）gC蛋白在LMH细胞内的分布及gC蛋白对病毒在细胞间传播过程中的作用，本研究以ILTV-LJS09毒株基因组为模板，应用PCR方法扩增gC基因的主要抗原性片段，并克隆至原核表达载体pET-32a（+）构建pET-32a-gC质粒，经IPTG诱导表达并纯化，获得His-gC重组蛋白，免疫新西兰大白兔制备抗血清。Western blot结果表明，所制备的兔抗-ILTV gC抗体能与纯化的His-gC蛋白发生特异性反应且能检测到内源性gC蛋白。间接免疫荧光试验结果表明，所制备的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多抗能与ILTV LJS09、HLJ0507、 MDJ0442、SD0203、Zhj1298毒株反应，特异性良好。采用获得的抗gC抗体观测LJS09-gC蛋白在LMH细胞内的分布，发现gC蛋白主要存在于病毒感染细胞的胞质和胞膜上，细胞核和未感染的细胞中没有gC蛋白。利用抗体中和ILTV gC蛋白的试验结果表明，gC蛋白可能直接参与病毒在细胞间传播，从而影响病毒蚀斑的形成。本研究成功制备了具有诊断价值的兔抗ILTV-LJS09 gC蛋白的多克隆抗体，并证实LJS09 gC蛋白在分布及功能上具有α-疱疹病毒的保守性，为gC蛋白生物学特性和ILTV感染机制的研究提供了重要数据。

关键词: ILTV, gC蛋白, 多克隆抗体, 细胞定位, 功能

Abstract:

To prepare antibody with diagnosis value to infectious laryngotracheitis and to study the distribution of ILTV gC protein in LMH cells and the role of gC protein in the spread of ILTV among cells，the major antigen coded sequence of gC gene was amplified from ILTV-LJS09 genome by PCR.The prokaryotic expression vector pET-32a-gC was constructed by inserting the gC gene into pET-32a(+).The His-gC recombinant protein was purified，and then was used to immunize rabbits.The Western blot results demonstrate that the obtained polyclonal antibodies were specific to ILTV-LJS09 gC protein.The IFA results showed that the anti ILTV-LJS09 gC protein antibody could specifically response to ILTV-LJS09，HLJ0507，MDJ0442，SD0203，Zhj1298 strain.Intracellular localization of the ILTV gC protein in LMH cells using the anti-gC antibody showed that gC protein mainly located in cytoplasm and membrane of the virus infected cells.Antibody neutralization test indicated that the gC protein may be directly involved in virus transmission between the cells，thus affecting the virus plaque formation.In this study，we successfully prepared rabbit anti ILTV-LJS09 gC protein polyclonal antibody with diagnosis application value，and proved that LJS09 gC protein had the conservatism of α-herpesvirus on the distribution and function，which provided important data to the research of gC protein biological characteristics and ILTV infection mechanism.

Key words: infectious laryngotracheitis virus, gC protein, polyclonal antibodies, intracellular localization, function

中图分类号:

S852.659.1

孙永珍，赵妍，崔红玉，王云峰. 鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(8): 1309-1316.

SUN Yong-zhen，ZHAO Yan，CUI Hong-yu，WANG Yun-feng. Preparation of Polyclonal Antibodies against gC Protein of Infectious Laryngotracheitis Virus，and Intracellular Localization and Function Research of gC Protein[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(8): 1309-1316.

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鸡传染性喉气管炎病毒gC蛋白的多抗制备、细胞定位及功能研究

Preparation of Polyclonal Antibodies against gC Protein of Infectious Laryngotracheitis Virus，and Intracellular Localization and Function Research of gC Protein

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