种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.016

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (8): 1317-1323.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.08.016

种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定

徐海鹏^#，孟凡峰^#，董宣，赵鹏，崔治中^*

（山东农业大学动物医学院，泰安 271018）

收稿日期:2014-01-25 出版日期:2014-08-23 发布日期:2014-08-22
通讯作者: 崔治中，博士生导师，E-mail：zzcui＠sdau.edu.cn
作者简介:徐海鹏（1986-），男，山东威海人，硕士生，主要从事分子病毒学研究，E-mail：xujianghaohaipeng@163.com；孟凡峰（1990-），男，山东临沂人，硕士生，主要从事分子病毒学研究，E-mail：fanfengmeng@126.com。两人对本研究有同等贡献，并列第一作者
基金资助:
国家公益性行业（农业）科研专项种鸡场禽白血病防控与净化技术的集成（＃201203055）

Detection and Identification of an Endogenous Subgroup E Avian Leukosis Virus in a Chicken Breeder Embryo

XU Hai-peng^#，MENG Fan-feng^#，DONG Xuan，ZHAO Peng，CUI Zhi-zhong^*

（College of Veterinary Medicine，Shandong Agricultural University，Taian 271018，China）

Received:2014-01-25 Online:2014-08-23 Published:2014-08-22

摘要/Abstract

摘要：

某祖代种鸡群临床表现正常，在开产后用商品化禽白血病抗体检测试剂盒（ALV-Ab）和禽白血病抗原检测试剂盒检测发现血清抗体阳性率及蛋清抗原阳性率均显著高于正常水平，但对种蛋中抗原阳性的23只种鸡分别接种DF1细胞和SPF鸡胚来源的成纤维细胞(CEF)后均未分离到病毒。为探明该鸡群是否存在内源性禽白血病病毒（ALV-E）以及能否干扰商品化抗体检测试剂盒的结果判定，将23只种鸡所产种蛋分别孵化后逐一制备成CEF培养，盲传3代后检测到其中1只鸡的细胞培养上清抗原检测为阳性。从该细胞培养上清液提取RNA， RT-PCR扩增其gp85基因，序列分析证明该检出病毒为E亚群ALV。将该E亚群ALV接种SPF鸡胚来源CEF后又可检出p27抗原，显示该内源性ALV具备传染性。同时，对该病毒gp85基因进行了原核表达，表达产物免疫鸡后部分鸡血清经ALV-Ab抗体检测试剂盒检测为阳性。本研究分离到1株对CEF具备传染性的内源性ALV-E，并证明其诱导产生的抗体能够干扰对外源性ALV的鉴别诊断，提示在进行临床类似情况的判定时要结合鸡群实际表现做全面分析。

关键词: 种鸡, E亚群禽白血病病毒, gp85基因, 血清交叉反应, p27抗原

Abstract:

A breeder chicken flock demonstrated 5%-6% positive rates in tests of antibodies to subgroups A/B avian leukosis virus (ALV) and egg albumen p27 antigen，although chickens were clinically health and their egg productivity was normal.However，no exogenous ALV was isolated when serum and egg albumen samples of more than 200 birds were inoculated in DF1 cell cultures.Then 23 breeders with high S/P values in ELISA for p27 antigen in their egg albumen were selected and kept from the breeder farms.Blood plasma and egg albumen samples were collected twice from each birds for inoculation of DF1 cells and SPF embryo-originated fibroblast (CEF)cultures，again there was no exogenous ALV isolated，in order to identify whether the virus is endogenous viruses.Fertilized eggs from these 23 breeders were incubated for 9-11 d and their CEF were prepared for each embryos，p27 antigen was detected in CEF supernatant from only one of the 23 breeder eggs.Its supernatant was further inoculated into DF1 and SPF embryo CEF culture，p27 was detected from only SPF embryo CEF but not DF1 cell cultures，indicating that there was endogenous but not exogenous ALV.By use of genomic RNA abstracted from viral particles in the supernatant with p27 detected as the template，gp85 gene was amplified by RT-PCR.Sequence comparison confirmed that the detected ALV belonged to subgroup E.After immunization with its gp85 protein expressed in E.coli，some chickens demonstrated antibody positive by ALV-A/B antibody detection ELISA kit.Influence or interference of ALV-E on results in tests with ALV antibody or p27 detection ELISA kits was discussed.

Key words: chicken breeder, subgroup E avian leukosis virus, gp85, serological response, p27 antigen

中图分类号:

S852.659.3

徐海鹏，孟凡峰，董宣，赵鹏，崔治中. 种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(8): 1317-1323.

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种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定

Detection and Identification of an Endogenous Subgroup E Avian Leukosis Virus in a Chicken Breeder Embryo

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