畜牧兽医学报 ›› 2012, Vol. 43 ›› Issue (1): 105-111.
李炎鑫1,2,马贵平2*,杨汉春1*,刘全国2,史喜菊2,李冰玲2
LI Yanxin1,2, MA Guiping2*, YANG Hanchun1*, LIU Quanguo2, SHI Xiju2, LI Bingling2
摘要: 利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pETPrP中,构建原核表达载体pETPrPUPD。阳性质粒转化宿主菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得高效表达。Western blot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrPUPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点。利用纯化的PrPUPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性。