猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白翻译起始位点的研究

畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (7): 847-853.

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白翻译起始位点的研究

谭菲菲，张荣，韦祖樟，袁世山*

中国农业科学院上海兽医研究所猪传染病防治研究室，上海 200241

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-07-20 发布日期:2010-07-20
通讯作者: 袁世山

Translational Control of Nucleocapsid Protein of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

TAN Fei-fei, ZHANG Rong, WEI Zu-zhang, YUAN Shi-shan*

Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy ofAgricultural Sciences, Shanghai 200241, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-07-20 Published:2010-07-20

摘要/Abstract

摘要： 猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein，N蛋白）的表达是通过非连续性转录合成的亚基因组（Subgenomic，sg）mRNA翻译而来。但位于亚基因组前导序列中的2个AUG均不能作为N蛋白翻译的起始位点，其翻译使用的是N开放阅读框（ORF）中的首个AUG，因此，本研究旨在感染性克隆的基础上研究N蛋白的翻译起始位点。作者实验室已有在ORF6和ORF7之间插入酶切位点的感染性克隆pORF673，该突变克隆中含有3个潜在的AUG，分别构建了pORF673中N蛋白的其中2个潜在的起始密码子AUG突变的全长克隆，转染Marc-145细胞。这些突变体都能够拯救出子代病毒，其中2个突变病毒的N蛋白的前11个氨基酸完全改变，这些突变病毒都能够在Marc-145细胞上稳定传代。经RT-PCR分析子代病毒的N基因序列及其亚基因组序列，结果表明N蛋白的翻译偏向于使用其ORF的第1个潜在的AUG。如果后者移码，则病毒可以自身修复，这是首次发现病毒有矫正ORF的功能。本研究为N蛋白N端插入标签作为标记疫苗以及进一步研究N蛋白结构与功能奠定了基础。

关键词: PRRSV, 反向遗传操作, 核衣壳蛋白, 翻译调控

Abstract: The structural genes of PRRSV are expressed from a nested set of subgenomic mRNAs (sgmRNA). Nucleocapsid (N) protein is expressed from sgmRNA7, but the initiation site of translation is the first AUG in N coding region, not the AUG in leader sequence of sgmRNA. This experiment is designed to study the translational initiation site of N protein. pORF673 is a former constructed full-length infectious cDNA clone that separated ORF6 & ORF7 and inserted three restriction sites, the conjunction sequence contains three potential AUGs. Three full-length cDNA clones encompassing ATG mutation were conducted to estimate their effects on virus replication. Viable viruses could be recovered and stably passaged on Marc-145 cells. The first 11 residues of two recovered viruses were fully changed. The result indicates that the expression of N protein prones to choose the first AUG. This study lays a foundation for the genetically tagged vaccine and further molecular dissection of the roles of N protein in PRRSV replication cycle.

Key words: porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), reverse genetic manipulation, nucleocapsid protein, translational control

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