亚洲璃眼蜱P27基因的克隆和表达模式分析

畜牧兽医学报 ›› 2008, Vol. 39 ›› Issue (2): 201-205.

亚洲璃眼蜱P27基因的克隆和表达模式分析

王玉霞;周勇志;龚海燕;程天印;周金林

1．中国农业科学院上海兽医研究所，农业部寄生虫学重点开放性实验室，上海 200232；2湖南农业大学动物科技学院，长沙 410128

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2008-02-24 发布日期:2008-02-24

Molecular Cloning and Expression Patterns Analysis of the P27 Gene from Hyalomma asiaticum Ticks

WANG Yu-xia;ZHOU Yong-zhi;GONG Hai-yan;CHENG Tian-yin;ZHOU Jin-lin

1.Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200232，China；2.College of Animal Science and Technology,Hunan Agricultural University,Changsha 410128,China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2008-02-24 Published:2008-02-24

摘要/Abstract

摘要： 为了进一步研究蜱吸血时唾液腺的基因表达调控机制，并为蜱疫苗的制备筛选功能性抗原，本试验对从亚洲璃眼蜱雌蜱吸血前后唾液腺消减文库中筛选出的一个具有Poly（A）尾的EST序列P27进行了研究。首先运用RACE 技术扩增出该基因的5′端，在此基础上设计引物，扩增出该基因全长，此基因全长827 bp，其开放阅读框从第35个碱基始至第706个碱基止，预测分子量为2728 ku，等电点422。生物信息学结构分析表明该基因含有跨膜区及多个活性位点，可能与细胞内DNA的转录相关；该基因与现有其他基因同源性很小，为一新基因；RTPCR结果显示该基因在半饱血雌蜱的唾液腺、蜱壳、中肠均有表达，但在壳中表达丰度稍低。本研究克隆的P27基因序列已登录GenBank，序列号为EU180067。

关键词: 亚洲璃眼蜱, P27, 基因克隆, 表达模式

Abstract: In order to explore the regulation mechanism of the tick salivary glands by blood feeding, and screen vaccine candidates, a EST with poly(A) tail from the subtractive cDNA library of the hard tickHyalomma asiaticum was further studied. 5′ rapid amplification of cDNA ENDS (RACE) were used to clone the full length cDNA. The full length of the gene named P27 is 827 bp and the coding region is from 35 bp to 706 bp. The putative protein of P27 is 27 kDa,and the isoelectric point is 4.22. The structure analysis showed that it contain a cross-membrane region and many activated loci, which suggest its transcript action in cell. Comparison of deduced amino acid sequences showed low homology with reported protein in the database. Expression analysis by RT-PCR revealed that P27 was expressed in salivary gland, shell and midgut of fed tick, but not in the unfed tick, which indicates P27 is induced to express by tick blood feeding.

Key words: Hyalomma asiaticum, P27, gene cloning, expression patterns

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