猪圆环病毒2型-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建

畜牧兽医学报 ›› 2009, Vol. 40 ›› Issue (3): 371-375.

猪圆环病毒2型-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建

王印，郭万柱*，王新，徐志文，朱玲，王小玉

四川农业大学动物生物技术中心, 雅安 625014

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2009-03-24 发布日期:2009-03-24
通讯作者: 郭万柱

Construction and Characterization Analysis of the Recombinant Virus SA215(C) Strain of Pseudorabies Virus-Porcine Circovirus Type 2

WANG Yin，GUO Wan-zhu*，WANG Xin，XU Zhi-wen，ZHU Ling，WANG Xiao-yu

Animal Biotechnology Center,Sichuan Agricultural University，Ya’an 625014，China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2009-03-24 Published:2009-03-24

摘要/Abstract

摘要： 根据GenBank发表的猪圆环病毒2型（PCV2）序列设计一对特异性引物，采用PCR方法，扩增PCV2 ORF2基因，将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP，获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法，将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞，通过空斑纯化得到表达PCV2 ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测，重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同，表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪圆环病毒2型和伪狂犬病毒的候选疫苗毒株。

关键词: 猪圆环病毒2型, ORF2基因, 伪狂犬病毒, 重组病毒

Abstract: ORF2 gene of porcine circovirus type 2 were cloned by PCR with the specific primers designed according to genome of PCV2 in GenBank.Following extraction and digestion，PCR products were subsequently inserted into universal transfer vector pPI-2.EGFP to generate recombinant transfer plasmid pPI-2.EGFP-ORF2.The genomic DNA of PRV SA215 strain and pPI-2.EGFP-ORF2 were co-transfected into ST cells with lipofectin，and recombinant virus SA215(C) was selected by fluorescence and PCR with ORF2 gene primers respectively.The recombinant virus was analyzed with Southern blotting and Western blotting.The results indicated that ORF2 gene of PCV2 had been inserted into the genome of PRV SA215 strain and the expressed EGFP-ORF2 fusion protein could react with PCV2 positive sera.Result of virus titers detection showed that the insertion of ORF2 gene did not influence propagation of recombinant virus.

Key words: porcine circovirus type 2, ORF2 gene, pseudorabies virus, recombinant virus

王印;郭万柱;王新;徐志文;朱玲;王小玉. 猪圆环病毒2型-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建[J]. 畜牧兽医学报, 2009, 40(3): 371-375.

WANG Yin;GUO Wan-zhu;WANG Xin;XU Zhi-wen;ZHU Ling;WANG Xiao-yu. Construction and Characterization Analysis of the Recombinant Virus SA215(C) Strain of Pseudorabies Virus-Porcine Circovirus Type 2[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2009, 40(3): 371-375.

[1]	王俊伟, 陈芳洲, 库旭钢, 李畅, 何启盖. 基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 454-460.
[2]	王俊伟, 陈芳洲, 库旭钢, 李畅, 何启盖. 基于PCV3-Cap蛋白间接ELISA检测方法的建立及临床应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 454-460.
[3]	李畅, 李静, 何启盖. 猪圆环病毒2型感染PK-15细胞差异表达miRNA和mRNA互作网络[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 115-125.
[4]	李畅, 李静, 何启盖. 猪圆环病毒2型感染PK-15细胞差异表达miRNA和mRNA互作网络[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(1): 115-125.
[5]	陈洁, 吴利军, 陈夏冰, 刘晓丽, 金尔光, 邵志勇, 杨文海, 何斌, 童伟文, 刘武, 杨汉春. 牛蒡苷元对猪圆环病毒2型感染仔猪体内病毒复制及组织病理影响[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(12): 2672-2679.
[6]	陈洁, 吴利军, 陈夏冰, 刘晓丽, 金尔光, 邵志勇, 杨文海, 何斌, 童伟文, 刘武, 杨汉春. 牛蒡苷元对猪圆环病毒2型感染仔猪体内病毒复制及组织病理影响[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(12): 2672-2679.
[7]	袁旦一，金亚南，李玲，何谦，胡林，李晓琪，孙志勇. 猪圆环病毒2型交叉引物恒温扩增检测方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(9): 1905-1913.
[8]	袁旦一，金亚南，李玲，何谦，胡林，李晓琪，孙志勇. 猪圆环病毒2型交叉引物恒温扩增检测方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(9): 1905-1913.
[9]	常洪涛，刘慧敏，李永涛，贺秀媛，赵军，陈陆，王新卫，杨霞，王川庆. 猪圆环病毒2型合并感染脑心肌炎病毒对仔猪的致病性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(7): 1435-1442.
[10]	常洪涛，刘慧敏，李永涛，贺秀媛，赵军，陈陆，王新卫，杨霞，王川庆. 猪圆环病毒2型合并感染脑心肌炎病毒对仔猪的致病性分析[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(7): 1435-1442.
[11]	宋爽，曾磊，鲁绍芳，郭珍珍，鲁维飞，韩立强，王江，王月影，褚贝贝，杨国宇. 猪TRIM11基因克隆及其促进猪伪狂犬病毒在体外增殖的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(6): 1239-1246.
[12]	宋爽，曾磊，鲁绍芳，郭珍珍，鲁维飞，韩立强，王江，王月影，褚贝贝，杨国宇. 猪TRIM11基因克隆及其促进猪伪狂犬病毒在体外增殖的研究[J]. 畜牧兽医学报, 2016, 47(6): 1239-1246.
[13]	张辉，唐青海，黄立平，危艳武，刘长明. 猪肾细胞源三种蛋白质对猪圆环病毒2型复制的调节作用[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(11): 2040-2049.
[14]	张辉，唐青海，黄立平，危艳武，刘长明. 猪肾细胞源三种蛋白质对猪圆环病毒2型复制的调节作用[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(11): 2040-2049.
[15]	张亚群，韩俊源，郭华，陈萌萌，段滇宁，张书霞. 猪圆环病毒2型感染仔猪肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA转录的变化[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(5): 802-808.