兔出血症病毒RT-PCR 检测方法的建立及其临床应用

畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (11): 1442-1446.

兔出血症病毒RT-PCR 检测方法的建立及其临床应用

胡波，魏后军，王芳*，范志宇，徐鹏，徐为中，薛家宾，何孔旺

江苏省农业科学院兽医研究所农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京210014

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-11-25 发布日期:2010-11-25
通讯作者: 王芳

Establishment and Clinical Application of RT-PCR Assay for Detection of Rabbit Hemorrhagic Disease Virus

HU Bo, WEI Hou-jun, WANG Fang*, FAN Zhi-yu, XU Peng, XU Wei-zhong,
XUE Jia-bin, HE Kong-wang

Key Laboratory of Animal Diseases Diagnostic and Immunology of Ministry of Agriculture, National Center for Engineering Research of Veterinary Bioproducts, Institute of Veterinary Medicine, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing 210014, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-11-25 Published:2010-11-25

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒（RHDV）的RT-PCR方法，研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDV vp60基因保守序列，设计了1对特异性引物，经cDNA的合成和PCR扩增，目的片段大小为591 bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40 ng·μL^-1，敏感性为血凝试验（HA）的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测，结果显示，阳性样品为22份，阳性率为13.09%。试验表明：RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV，提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象，该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查，具有良好的应用前景。

关键词: 兔出血症病毒, RT-PCR, 鼻拭子, 病毒携带

Abstract: The RT-PCR assay for detection of Rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) in nasal swab specimens collected from rabbits was developed for the research of virus carrying in healthy immunized rabbit. A pair of primers were designed according to the conserved sequences of vp60 from RHDV published in GenBank, and a 591 bp segment was amplified by RT-PCR. The least amount of RHDV could be detected was 2.40 ng·μL^-1, and the sensitivity of the RT-PCR was 8×103 times higher than that of HA method. 168 nasal swabs collected from 5 provinces was detected by the assay, the results showed that the positive samples was 22 and the positive rate was 13.09%. These results indicated that the phenomenon of virus carrying in healthy immunized rabbit and the developed RT-PCR might be a promising approach in clinical screening, detection and carrying research of RHDV in a large number of immunized rabbit nasal swabs.

Key words: rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV), RT-PCR, nasal swab, virus carrying

胡波;魏后军;王芳;范志宇;徐鹏;徐为中;薛家宾;何孔旺. 兔出血症病毒RT-PCR 检测方法的建立及其临床应用[J]. 畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1442-1446.

HU Bo;WEI Hou-jun;WANG Fang;FAN Zhi-yu;XU Peng;XU Wei-zhong;XUE Jia-bin; HE Kong-wang . Establishment and Clinical Application of RT-PCR Assay for Detection of Rabbit Hemorrhagic Disease Virus[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2010, 41(11): 1442-1446.

[1]	俞演, 古玉, 王承东, 胡静, 杨瑷宁, 杨乔, 李德生, 张和民, 邓林华, 凌珊珊, 左之才, 彭广能, 钟志军, 马晓平. 石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1449-1457.
[2]	俞演, 古玉, 王承东, 胡静, 杨瑷宁, 杨乔, 李德生, 张和民, 邓林华, 凌珊珊, 左之才, 彭广能, 钟志军, 马晓平. 石膏样小孢子菌感染小鼠的Dectin-1、TLR-2和TLR-4及细胞因子动态变化[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(7): 1449-1457.
[3]	郑兰兰, 朱静静, 王盼, 舒燕, 梁青青, 李炳晓, 王超群, 魏战勇. 猪δ冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1261-1267.
[4]	范慧, 李亮, 姜平, 王先炜, 李玉峰, 白娟. 塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1312-1318.
[5]	郑兰兰, 朱静静, 王盼, 舒燕, 梁青青, 李炳晓, 王超群, 魏战勇. 猪δ冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1261-1267.
[6]	范慧, 李亮, 姜平, 王先炜, 李玉峰, 白娟. 塞内卡病毒A的RT-PCR检测方法的建立和应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(6): 1312-1318.
[7]	郭紫晶, 何琪富, 汤承, 张斌, 岳华. 检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 893-900.
[8]	郭紫晶, 何琪富, 汤承, 张斌, 岳华. 检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(4): 893-900.
[9]	段世豪, 路建彪, 李旭勇, 刘成, 张树金, 殷国政, 司振书, 李玉保. 鸡马立克病肝组织肿瘤病变与热休克蛋白转录、表达的相关性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 415-421.
[10]	杨显英, 熊显荣, 韩杰, 黄向月, 王艳, 阿果约达, 李键. 小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 446-453.
[11]	段世豪, 路建彪, 李旭勇, 刘成, 张树金, 殷国政, 司振书, 李玉保. 鸡马立克病肝组织肿瘤病变与热休克蛋白转录、表达的相关性研究[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 415-421.
[12]	杨显英, 熊显荣, 韩杰, 黄向月, 王艳, 阿果约达, 李键. 小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选[J]. 畜牧兽医学报, 2019, 50(2): 446-453.
[13]	杨艳玲, 程悦宁, 张萍, 周玉成, 张海威, 程世鹏. 羊布鲁菌体内诱导基因的筛选与初步鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(9): 1979-1986.
[14]	杨艳玲, 程悦宁, 张萍, 周玉成, 张海威, 程世鹏. 羊布鲁菌体内诱导基因的筛选与初步鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(9): 1979-1986.
[15]	刘迎春, 陈钰萌, 韩哲先, 高峰, 周欢敏. 荷斯坦奶牛乳腺干细胞的成神经诱导鉴定及催乳素对其增殖活性的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2018, 49(3): 542-548.