畜牧兽医学报

FSHβ亚基基因与繁殖性能及胎盘性状的关联分析

陈来华;王立贤;季跃光;颜华;程笃学;张龙超;王立刚;李勇

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1365-1370. doi:

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以117头大白猪为研究对象，以FSHβ亚基基因为候选基因，采用PCR产物直接电泳方法检测FSHβ亚基基因位点的多态性，检出3种基因型，分别为AA、AB和BB基因型。将基因座不同基因型与总产仔数（TNB）、产活仔数（NBA）、初生体质量（BW）和胎盘性状（PT）进行关联分析。结果表明：FSHβ亚基基因在该位点上，就初产母猪而言，AA和AB基因型比BB型个体的TNB分别多3.25和2.37头（P＜0.05），AA和AB基因型比BB型个体的NBA分别多3.31和2.49头（P＜0.05）。就经产母猪而言，AA和AB基因型比BB型个体的TNB分别多2.71和1.60头（P＜0.05），AA和AB基因型比BB型个体的NBA分别多2.95和1.74头（P＜0.05）。AA基因型比AB和BB型个体的胎盘效率（PE）分别高16.28%和23.09%（P＜0.05）。总体而言，FSHβ亚基基因在该位点的A等位基因对TNB、NBA和PE均表现为正效应。

猪DECR1基因cDNA的克隆、序列分析及原核表达研究

李步高;郭晓红;曹果清;杨晓奋;王效京;周忠孝

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1371-1378. doi:

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旨在研究猪2，4 -dienoyl–CoA reductase1 (DECR1)基因的结构，揭示该基因的原核表达规律。试验以山西马身猪的肝脏组织为材料，采用RTPCR与RACE技术克隆了DECR1基因的cDNA全序列，并将其重组于pET32a+原核表达载体中，经酶切、序列鉴定正确后，重组质粒转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。结果表明：猪DECR1基因的cDNA全长2 352 bp，包括987 bp 的开放阅读框(ORF)，53 bp的5′非翻译区(UTR)和1 312 bp 的3′UTR；编码区(CDS)编码328个氨基酸残基与猪(电子预测序列)、牛、人、猩猩、猴、马、犬、鼠相应序列的同源性分别为99%、88%、88%、87%、87%、87%、87%和83%；SDS-PAGE电泳结果显示，在IPTG诱导4 h时，外源蛋白表达效率最高；Western blot检测发现经诱导表达的蛋白产物大小约为35 ku，与预测的大小一致。猪DECR1基因的克隆和表达研究，为进一步探究该基因的生物学功能及其分子遗传机制提供了理论基础。

猪精氨酸-丝氨酸蛋白激酶1（SRPK1）克隆表达及功能初步分析

俄广鑫;刘娣;张冬杰;杨秀琴;崔羽;祝继原;杨少成;王嘉博;谢宇彤

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1379-1386. doi:

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本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象，利用 RT-PCR 技术克隆SRPK1 基因 CDS 区域，同时利用反向 PCR（inverse PCR，I-PCR）技术得到猪部分 SRPK1 的5′UTR序列；利用生物信息学方法分析 SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点；利用荧光定量 PCR（realtime PCR）检测SRPK1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况；构建猪骨骼肌损伤模型，研究在骨骼肌发育过程中SRPK1基因的表达特性。结果，将克隆片段拼接得到长2 499 bp 的大白猪 SRPK1 基因序列，包含了1 968 bp完整 CDS区域，分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质；包括2个P_Kc 结构域，猪SRPK1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高。通过生物信息学方法预测所得 5′UTR 含有多个转录结合位点：HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SP1 MyoD、USF、E47、p300、CP2、RREB-1、E2F和AP-1。利用荧光定量PCR研究发现，表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性，主要都是在胃、大肠和小肠中表达。SRPK1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低。5′UTR处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点，主要在消化系统组织表达，在骨骼肌修复中表达上调，推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关。

动态添加FSH对绵羊卵巢皮质组织体外培养的影响

彭夏雨;杨梅;陈童;汪立芹;郭志勤

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1387-1393. doi:

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本研究旨在探索促卵泡素（FSH）对体外培养绵羊卵巢原始卵泡和组织活性的影响。通过稳定或动态方式添加不同浓度FSH（1、10、50、100 ng·mL^-1），用组织学和免疫组化PCNA方法来评估FSH对体外培养绵羊卵巢皮质组织中原始卵泡激活、生长、存活以及颗粒细胞增殖活性的影响；此外通过测定培养液中雌激素含量，评估卵巢组织体外培养过程中活性的保持。结果表明，先升后降动态添加FSH对于卵泡发育、存活和生长以及颗粒细胞的增殖具有全面的促进作用；同时组织分泌雌激素能力也高于其他组。以稳定方式添加时，50 ng·mL^-1 FSH在培养1 d时显示对卵泡发育的显著促进作用（P<0.05），添加10 ng·mL^-1以上浓度的FSH可以促进卵泡存活和生长（P<0.05）。在整个培养期内，各培养组中雌激素产量持续增加，说明卵巢活性在本培养体系中可以得到很好的维持。本试验结果表明FSH可能参与早期卵泡的发生，动态添加FSH更有利于体外培养卵泡的发育和组织活性的维持。

山羊Dkk1基因的结构、启动子区的多态性及其与生产性状的关联分析

曹贵玲;张渝洁;;李标;唐培荣;姜运良

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1394-1400. doi:

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本研究拟克隆山羊的Dkk1基因并对其多态性及其与山羊产绒量的关系进行分析，寻找与山羊产绒量有关的DNA标记。山羊Dkk1基因的获得采用同源克隆的方法，根据产绒量的高低混成2个基因组DNA池，PCR扩增测序寻找差异的核苷酸，然后采用PCR-SSCP方法检测Dkk1基因的多态性。结果，获得了山羊Dkk1基因3 491 bp的序列，由4个外显子和3个内含子组成，编码265个氨基酸残基，与其它哺乳动物的对应序列有较高的同源性。共发现33处单核苷酸替代和一处内含子2中四碱基的插入。对启动子区2个邻近的多态性位点（T593C-C603A）的分析表明，在所检测的5个山羊群体中，A均为优势等位基因，在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）；不同基因型的白绒山羊个体在产绒量、单位体表面积产绒量、初生体质量、出生到断奶体增质量上差异不显著（P>0.1），但A等位基因（T593-603C）对产绒量较为有利。结果表明，山羊Dkk1基因与其它哺乳动物相应序列高度同源，非编码区具有较高的多态性，启动子区的2个多态性与绒山羊的生产性状无显著关联。

中国美利奴羊不同MHC-DRB1/DQB1单倍型个体感染细粒棘球绦虫的免疫应答分析

杜迎春;贾斌;申红;蒋松;惠文巧;田永芝;温青娜;周其伟;吕利民;李仁燕

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1401-1406. doi:

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为探讨中国美利奴羊（新疆军垦型）不同单倍型个体感染细粒棘球绦虫的免疫应答变化。将8只抗性单倍型绵羊设为抗性组，8只非抗性单倍型绵羊设为对照组，在相同的饲养条件下进行人工感染攻虫。分别在攻虫前7 d（－7 d）、攻虫当天（0 d）、攻虫后第7、21、30、60 天用流式细胞仪分析外周血中CD4⁺ T、CD8⁺ T、B淋巴细胞亚群的变化，同时用ELISA方法定量分析血清中IgG、IgM、IgE、IFN-γ水平并进行粒细胞计数。结果表明，抗性组绵羊的发病率显著低于对照组（P=0.019）；CD4⁺ T细胞2组之间差异不显著（P>0.05），CD8⁺ T细胞在攻虫后第7 天抗性组显著高于对照组（P<0.05）；IgG水平在攻虫后第7 天2组均显著高于攻虫前7 d（P<0.05）。攻虫后第30 天抗性组IgM和IFN-γ水平均显著高于对照组（P<0.05）。抗性组的白细胞、淋巴细胞分别在攻虫后第7和21 天显著高于对照组（P<0.05），嗜中性粒细胞和总蛋白在攻虫后第21天抗性组极显著低于对照组（P<0.01）。结果显示，抗性单倍型绵羊对细粒棘球绦虫的抵抗力显著高于非抗性绵羊；抗性组绵羊体内的CD8+ T细胞、IgM、IFN-γ和白细胞、淋巴细胞水平在攻虫后不同时期显著高于非抗性组绵羊。

鹅ACSL1基因克隆及其在鹅肥肝形成中作用的初步研究

潘志雄;吕佳;卢立志;王继文

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1407-1413. doi:

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本研究旨在克隆鹅长链酯酰辅酶A合成酶1（ACSL1）基因，并研究其在填饲诱导鹅肥肝形成中的作用，为揭示ACSL1在鹅肥肝形成过程中的作用提供依据。以前期抑制消减杂交文库筛选的部分ESTs序列为基础，通过RT-PCR扩增鹅ACSL1基因CDS、并用实时定量等技术检测该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况及填饲对其在肝脏中表达的影响，同时与填饲后鹅肝脏总脂质、甘油三酯（TG）、肝质量等指标进行相关分析。结果发现：鹅ACSL1基因CDS全长2 100 bp，编码699个氨基酸。保守结构区预测发现，其蛋白质跟其他物种一样，也存在2个保守功能区（ATP/AMP motif和FACS motif）和1个跨膜结构域，它与鸡、牛、人、小鼠ACSL1基因的同源性分别为93%、80.4%、78.5%、77.3%；该基因主要表达于腹脂、皮脂、肝脏，而在其他组织表达相对较低；填饲能引起ACSL1 mRNA在鹅肝脏的表达丰度极显著增加（P<0.01），且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关；同时，填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅（P<0.05）。结果提示：填饲引起ACSL1 mRNA在鹅肝脏中极显著增加（P<0.01），且其增加幅度存在着品种间差异（P<0.05）。

不同钙磷水平及维生素D对生长前期北京鸭生产性能、血液生化指标及胫骨指标的影响

王爽;侯水生;谢明;黄苇;喻俊英

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1414-1420. doi:

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本试验旨在研究维生素D对北京鸭钙磷代谢的影响。试验采用2×6二因子完全随机试验设计。将720只1日龄健康的Z2型雄性北京鸭随机分为12个处理，每个处理6个重复，每个重复10只。配制钙/磷比例分别为0.8/0.4和0.4/0.2的基础日粮，在基础日粮中添加不同的维生素D构成试验日粮，维生素D设6个添加水平，分别为0、250、500、1 000、2 000、3 000 IU·kg^-1，饲养期为14 d。结果表明：日粮维生素D水平显著影响北京鸭的日增体质量、日采食量和料重比(P<0.05)。血浆钙含量在维生素D水平达到2 000 IU·kg^-1时达到最大值。随着维生素D水平的增加，北京鸭的血浆磷含量和碱性磷酸酶活性降低(P<0.05)。当维生素D水平由500 IU·kg^-1增加到1 000 IU·kg^-1时，胫骨灰分含量显著增加(P<0.05)，继续增加维生素D含量，对胫骨灰分含量没有显著影响(P>0.05)。维生素D水平达到2 000 IU·kg^-1时，胫骨灰分钙含量达到最大值。日粮维生素D水平对胫骨灰分中磷的含量没有显著影响。由此可见，日粮维生素D水平与钙磷水平均影响北京鸭的生产性能、血液生化指标及胫骨指标。0~14日龄北京鸭维生素D的需要量为1 000~2 000 IU·kg^-1。

基于CNCPS模型的14种饲料瘤胃非降解蛋白组分小肠消化率研究

张英学;林雪彦;苏鹏程;王云;王中华

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1421-1427. doi:

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CNCPS体系的氨基酸子模型是估计反刍动物十二指肠氨基酸流量的3种主要模型之一，该模型认为过瘤胃C蛋白组分在小肠中不能消化，但有研究表明一些非饲草类饲料的过瘤胃C蛋白组分具有较高的小肠消化率。本研究测定了14种饲料各蛋白组分的含量、各蛋白组分的瘤胃动态降解率和过瘤胃蛋白组分的CP小肠消化率，用这些数据按照推导的方程对各蛋白组分的小肠消化率进行了最小二乘估计。在以过瘤胃B1蛋白组分的小肠消化率100%为约束条件时得到了可信的估计结果，结果表明CNCPS模型设定过瘤胃B1、B2、B3蛋白组分小肠消化率分别为100%、100%和80%是可行的，但有8种饲料具有较高的过瘤胃C蛋白组分小肠消化率估计值，其中包括4种饲草类饲料，说明需要对CNCPS模型的过瘤胃C蛋白组分小肠消化率参数的合理性做进一步研究。

猪繁殖与呼吸综合征病毒5′ 非翻译区一茎环结构的功能解析

陆嘉琦;高飞;刘萍;袁世山

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1428-1434. doi:

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以猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）北美株感染性克隆为平台进行反向遗传操作，利用突变PCR 将5′非翻译区（5′ UTR）中部分一级序列进行系列突变，以改变5′ UTR二级结构中的一保守茎部结构，从而解析PRRSV 5′ UTR中结构与功能的关系。通过DNA转染MARC145细胞观察突变体克隆的感染性，并通过免疫荧光及Northern blot来研究拯救后突变病毒的复制、转录特性，以及通过空斑形态学分析突变病毒的生长特性。结果表明，PRRSV 5′ UTR中保守茎部结构的二级结构与病毒的拯救无直接关系，但其一级核苷酸序列却是PRRSV病毒复制所必需的，作者还找到直接调控病毒复制的核心位点。由此证实了5′ UTR中调控PRRSV复制过程的必需序列，为进一步解析PRRSV复制过程的调控元件奠定了基础。

猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

刘启文;李震;赵凯;;于瑞嵩;;唐雪明;朱宏;吴潇;;谭芙蓉;;王金斌;;陶世如;;蒋玲曦;

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1435-1441. doi:

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本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒（HEV）的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEV ORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测 HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法，确定的抗原最适包被浓度为3 μg·mL^-1；血清最适稀释度为1∶10，作用时间为30 min；酶标抗体最适稀释度为1∶12 000，作用时间为60 min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒，与北京万泰试剂盒检测比较，符合率为73.4% (205/279)，灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数＜10%，批间变异系数＜20%。结果表明，该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高，特异性强，稳定性合格，为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。

兔出血症病毒RT-PCR 检测方法的建立及其临床应用

胡波;魏后军;王芳;范志宇;徐鹏;徐为中;薛家宾;何孔旺

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1442-1446. doi:

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本研究旨在建立检测兔群鼻拭子中兔出血症病毒（RHDV）的RT-PCR方法，研究健康免疫兔群是否存在携带RHDV现象。根据GenBank上公布的RHDV vp60基因保守序列，设计了1对特异性引物，经cDNA的合成和PCR扩增，目的片段大小为591 bp。结果表明该方法能检出最小RNA浓度为2.40 ng·μL^-1，敏感性为血凝试验（HA）的8×103倍。通过对自5个省采集的168份健康免疫兔鼻拭子样品进行检测，结果显示，阳性样品为22份，阳性率为13.09%。试验表明：RT-PCR方法能快速、敏感地从健康免疫兔鼻拭子样品中检出RHDV，提示健康免疫兔群存在携带RHDV的现象，该方法适合临床进行大规模病原学检测和兔群携带病毒的调查，具有良好的应用前景。

基因ⅤⅡ型新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

孙军峰;刘华雷;王志亮;赵云玲;郑东霞;张维;刘文华;冯莉莉;常娓娓

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1447-1452. doi:

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根据基因ⅤⅡ型新城疫病毒F基因裂解位点特征设计一对引物和TaqMan探针，建立一种敏感、特异、重复性良好的基因ⅤⅡ型毒株荧光定量RT-PCR鉴别检测方法。以体外转录法制备的cRNA标准品为标准阳性模板，构建标准曲线，并进行各项指标的检测。结果表明，建立的方法特异性良好，最低可检测到102拷贝·μL^-1的模板RNA，敏感性比普通RT-PCR高100倍。本试验建立了基因ⅤⅡ型新城疫病毒荧光定量RT-PCR检测方法，且该方法能够鉴别检测常规方法不能区分的新城疫病毒基因ⅤⅡ型强毒株，表明本研究建立的方法可用于此种基因型毒株的快速鉴别检测。

雏鸡不同组织TLR1、TLR2、TLR4、TLR5和TLR15 mRNA转录水平相对定量研究

周作勇;聂奎;宋振辉;胡世君;周荣琼;郭智莉;刘丽琼;秦波

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1453-1459. doi:

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参考GenBank登录的ChTLRs基因序列设计实时定量PCR特异性引物，建立检测鸡Toll样受体（ChTLR）mRNA相对转录水平的实时定量PCR方法，分析ChTLR1、ChTLR2、ChTLR4、ChTLR5和ChTLR15在雏鸡不同器官组织中的转录水平。结果显示5种ChTLRs在脾脏、法氏囊、胸腺和各段肠道组织中均有转录。其中，ChTLR1 mRNA在法氏囊、肾脏和盲肠组织中转录水平较高；ChTLR2 mRNA在脾脏、法氏囊和肝脏等组织中转录水平较高，在肾脏、肺脏和皮肤未检测到转录；ChTLR4 mRNA在所检测组织中转录水平差异较小，在脾脏、十二指肠和胸腺转录水平较高；ChTLR5 mRNA在肾脏、脾脏和空肠中的转录水平较高；ChTLR15 mRNA在法氏囊中转录水平最高，其次为脾脏和盲肠。本研究建立了检测ChTLRs mRNA在不同器官组织中表达水平的实时定量PCR方法，ChTLRs mRNA在雏鸡各器官组织中转录水平差异较大，可能与雏鸡各器官组织对病原的识别和抵抗能力有关。

Orexin B在猪下丘脑-垂体-性腺轴的分布及对生殖调节的体外研究

苏娟;姚远;杨桂红;李珣;刘延鹏;寇芮;刘晶;雷治海

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1460-1466. doi:

摘要 ( 689 )

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本试验采用免疫组化和放射免疫测定的方法对Orexin B在1月龄健康苏钟猪和和性成熟青年母猪下丘脑—垂体—性腺（HPG）轴的分布定位及其在HPG轴各级水平的直接分子生物学作用进行了研究。结果显示，Orexin B在下丘脑、垂体和性腺均有分布。在下丘脑的分布比较广泛，其中以穹隆周区、外侧区、背内侧核和后区的 Orexin B 免疫阳性神经元分布最为密集，而下丘脑前区、视前区和视交叉上核的 Orexin B 免疫阳性神经元分布较少。在垂体Orexin B主要分布在腺垂体的远侧部和中间部的内分泌细胞内。在性腺器官，Orexin B 主要分布在初级卵泡、次级卵泡的颗粒细胞以及卵母细胞的细胞质和睾丸、附睾间质细胞内；用不同剂量的Orexin B处理体外培养的下丘脑脑片、腺垂体细胞和卵巢颗粒细胞，其中1 000 nmol·L^-1剂量组Orexin B能极显著的刺激GnRH的释放（P<0.01），100和1 000 nmol·L^-1剂量组能显著（P<0.05）刺激LH 和E2的释放。结果表明Orexin B在HPG轴各级水平直接参与猪生殖活动的调节。

丹参对链脲佐菌素糖尿病大鼠脾、肾组织结构的影响

李静;刘德义

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1467-1471. doi:

摘要 ( 897 )

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旨在探讨丹参对链脲佐菌素（STZ）糖尿病模型大鼠的血糖及脾、肾组织结构的影响，为临床预防和治疗糖尿病并发症提供参考。60 mg·kg^-1腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，将符合糖尿病诊断标准的大鼠，随机分为模型对照组、丹参治疗组，各15只。另外以20只正常大鼠设立正常对照组。丹参治疗组灌胃丹参水煎液5 g·kg^-1·d^-1，模型对照组和正常对照组灌胃相当剂量的蒸馏水，试验期为28 d。给药后的第7、14、21、28天眶后静脉丛采血，离心制备血清测血糖。试验结束后剖杀大鼠，取脾、肾组织，Bouin′s液固定，常规石蜡切片，HE染色，观察切片的组织结构。试验第28天，丹参治疗组的血糖极显著低于模型对照组（P＜0.01），极显著高于正常对照组（P＜0.01）；模型对照组脾小结数量较少，较难见到生发中心，动脉周围淋巴鞘较薄；肾小球体积增大，血管球扩张，肾小囊囊腔变小，肾小管腔里充有不等量蛋白渗出物，肾小管上皮细胞脱落。而丹参治疗组脾小结界限较清晰，可以见到生发中心，动脉周围淋巴鞘较薄，淋巴细胞排列相对较紧密；肾小球、肾小管排列规则，囊腔隙较正常，肾小管结构清晰、上皮细胞结构较正常，但管腔里内还有少量均质红染的蛋白渗出物。丹参在一定程度能够改善糖尿病大鼠糖代谢的异常，丹参对模型大鼠脾、肾组织结构病变有所缓解。

瘦素受体在小尾寒羊神经内分泌和生殖器官的表达

肖欢;崔亚利;成玉宝

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1472-1477. doi:

摘要 ( 615 )

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为了观察瘦素受体（leptin receptor, OB-R）在小尾寒羊组织的定位和表达。本试验通过免疫组织化学SABC 染色和Western Blot方法对瘦素受体在小尾寒羊神经内分泌和生殖系统中的表达进行研究。免疫组织化学SABC染色显示：下丘脑、脑垂体的腺垂体、卵巢中处于不同发育阶段卵泡和子宫黏膜固有膜的子宫腺均有深浅不等的大量棕黄色OB-R阳性细胞；Western Blot 试验发现：下丘脑、脑垂体、卵巢和子宫在120、110和98 ku均有深浅不等的3条蛋白表达带，组织不同表达量略有差异。瘦素受体在小尾寒羊体内多组织的大量表达，说明瘦素及其受体在小尾寒羊的繁殖功能中具有重要作用。

内皮素受体B在不同毛色羊驼皮肤中的表达与定位

耿建军;穆晓丽;孙乐天;姜俊兵;张杰;李宏全;张映;董常生

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1478-1484. doi:

摘要 ( 699 )

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研究内皮素受体B（endothelin recepter B，EDNRB）在羊驼皮肤中的表达与定位，以及在不同毛色中的差异比较，探讨其在羊驼毛色形成中的作用及其相关机制。以不同毛色的成年羊驼为研究对象，用RT-PCR法检测EDNRB基因在不同毛色皮肤中的表达，并使用实时荧光定量PCR技术分析不同毛色羊驼皮肤EDNRB基因的相对表达量，采用Western blot法和免疫组织化学法对EDNRB在羊驼皮肤中的表达进行定位和半定量分析。荧光定量PCR结果显示棕色羊驼中EDNRB基因的相对表达量是白色羊驼的2.165 1倍；Western blot结果显示EDNRB蛋白在棕色组的表达显著高于白毛组（P<0.05）；免疫组化试验结果显示，EDNRB在羊驼皮肤的毛乳头、毛根鞘及表皮细胞中均有表达，且在棕色皮肤组织中显著表达（P<0.05）。试验结果提示，EDNRB与羊驼黑色素细胞的活动密切相关，并参与了羊驼毛色和肤色的形成。

酵母硒对夏季柴鸡血液生化指标及内分泌机能的影响

郭云霞;郝庆红;黄仁录

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1485-1489. doi:

摘要 ( 1006 )

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旨在探讨夏季柴鸡日粮中添加酵母硒对其血液生化指标及内分泌机能的影响。试验选用30周龄河北柴鸡360只，随机分成5组，每组3个重复，基础日粮含硒（Se）0.08 mg·kg^-1，试验组Se的添加水平分别是0、0.15、0.3、0.5、1 mg·kg^-1；预试期7 d，试验期为50 d。结果表明：随着酵母硒的添加量的增加，清/球蛋白比差异不显著（P>0.05），但呈上升趋势，饲喂0.3 mg·kg^-1硒的柴鸡体内清/球蛋白比最高；血糖呈下降趋势，但各组差异不显著（P>0.05）；可不同程度地降低血清谷丙转氨酶（GPT）和肌酸激酶（CK）活性（P<0.05），提高乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（ALP）活性（P<0.05）,使T3、T4和血清皮质醇（CORT）活性显著下降（P<0.05）。试验结果表明，柴鸡日粮中添加0.3～0.5 mg·kg^-1的硒可以缓解机体热应激反应，提高机体免疫力，同时改善机体物质代谢，进而提高柴鸡的生产性能。

奶牛亚临床酮病血液生化指标消长规律的研究

贾宗菲;石建朋;韩一超;庞全海

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1490-1496. doi:

摘要 ( 1072 )

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本文以血清β-羟丁酸（BHBA）含量大于1.2 mmol·L^-1的12头奶牛为试验组，另挑选年龄、胎次、体况与试验组奶牛相近的血清BHBA含量小于或等于1.2 mmol·L^-1的12头奶牛为对照组。分别于产前14、7、1 d，产后第1、7、14、21、28天测定2组奶牛各血液生化指标的含量，并分析各组指标在试验期间的动态变化趋势。结果表明：试验组奶牛血清BHBA含量极显著高于对照组（P＜0.01），非酯化脂肪酸（NEFA）水平显著高于对照组（P＜0.05），葡萄糖（GLU）浓度极显著低于对照组（P＜0.01）；尿素氮（BUN）含量极显著高于对照组（P＜0.01）；其它指标在不同时间差异均不同。试验组和对照组奶牛血清BHBA含量在产后第7-21天处于高水平，NEFA含量在产后第21天达最高，丙氨酸氨基转移酶（ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性在产后第7天最高。试验证明，奶牛亚临床酮病在产后7 d即可发生，在产后21 d左右处于易发期。

中国11个地方鸡种中鱼腥味敏感基因FMO3基因型频率分布研究

王晓亮;徐桂云;郑江霞;姚俊峰;曲鲁江;杨宁

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1497-1501. doi:

摘要 ( 672 )

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本试验旨在研究影响鸡蛋鱼腥味的FMO3基因T329S突变在11个中国地方鸡种中的分布。所选的11个地方鸡种包括：北京油鸡、河北柴鸡、固始鸡、溧阳鸡、如皋鸡、太湖鸡、淮南麻黄鸡、丝羽乌骨鸡、东乡绿壳蛋鸡、文昌鸡、藏鸡，采用PRCRFLP方法对FMO3基因及基因型频率进行检测。试验结果表明东乡绿壳蛋鸡全部表现为TT基因型，不表现鱼腥味综合症，具有较好的蛋品质；而其他10个地方鸡种中均有SS基因型的鱼腥味综合症易感个体，其中北京油鸡SS基因型频率最高，为8.8%，藏鸡的SS基因型频率最低,为0.7%。地方鸡种中鱼腥味综合症易感基因型频率都不高，可以通过PCRRFLP的方法予以剔除。

猪膜联蛋白A2多克隆抗体的制备、亲和纯化与鉴定

陈江涛;王光祥;吉艳红;尚佑军;刘艳红;刘湘涛

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1502-1509. doi:

摘要 ( 645 )

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本研究旨在制备并亲和纯化兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。通过PCR从质粒pA2EGFP中将编码猪膜联蛋白A2与增强型绿色荧光蛋白融合基因（Annex A2-EGFP）亚克隆到pET30a(+)，构建了原核表达质粒p30a/AE，转化大肠杆菌Rosetta (DE3)，经IPTG诱导以包涵体形式表达了猪ANNXA2-EGFP融合蛋白，用NiResin HP树脂对表达的目的蛋白进行亲和纯化。用纯化的ANNXA2-EGFP融合蛋白免疫兔，制备兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。将以前纯化的猪可溶性GST-ANNXA2融合蛋白偶联NHS活化琼脂糖凝胶FF，亲和纯化多克隆抗体。用GST-ANNXA2亲和纯化的多抗效价达到1∶12 800，Western blot和免疫组化结果证实具有高特异性。制备的高效价和高特异性兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体，为进一步研究膜联蛋白A2在病毒感染中的作用奠定了基础。

己烯雌酚对幼年香猪睾丸细胞的影响

田兴贵;李江森;;主性;冯会利;刘若余

畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1510-1514. doi:

摘要 ( 660 )

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为了认识己烯雌酚（DES）对幼年雄性香猪睾丸生殖细胞和支持细胞数的影响，将20只20~25日龄幼年雄性香猪分成4组，对照组只注射生理盐水，试验组连续9 d（每天1次）经腹腔分别注射不同剂量(0.03、0.3、3 mg·kg^-1)己烯雌酚后，最后一次注射24 h后取左侧睾丸，入40 g·L^-1多聚甲醛固定24 h，常规制备5 μm石蜡切片，用免疫组织化学方法对睾丸支持细胞特异性蛋白生长转录因子4(GATA4)进行检测。显微镜下分别计数支持细胞和生殖细胞数，并统计分析。结果发现：己烯雌酚用量为0.3和3 mg·kg^-1能促使睾丸生殖细胞数显著增多（P<0.05）；而使睾丸支持细胞数量显著减少（P<0.05）；首次发现DES能促进幼年香猪睾丸生殖细胞增殖而抑制其支持细胞增殖。DES的作用因细胞类型不同而有所不同，但其机制还需进一步研究。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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