猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

畜牧兽医学报 ›› 2010, Vol. 41 ›› Issue (11): 1435-1441.

猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用

刘启文¹ ，李震^3,4，赵凯^2,4* ，于瑞嵩^3,4 ，唐雪明^2,4，朱宏^2,4，吴潇^2,4 ，谭芙蓉^2,4 ,王金斌^2,4 ，陶世如^2,4 ，蒋玲曦^2,4

1.上海师范大学生命与环境科学学院,上海 200234; 2.上海市农业科学院生物技术研究所,上海 201106; 3.上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海 201106; 4.上海市农业遗传育种重点实验室,上海 201106

收稿日期:1900-01-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2010-11-25 发布日期:2010-11-25
通讯作者: 赵凯

Preparation and Application of Swine Hepatitis E Virus Diagnostic ELISA Kit

1.College of Life and Environment Sciences, Shanghai Normal University, Shanghai 200234, China; 2.Biotechnology Research Institute, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106, China; 3.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106, China; 4.Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201106, China

Received:1900-01-01 Revised:1900-01-01 Online:2010-11-25 Published:2010-11-25

摘要/Abstract

摘要： 本试验旨在建立有效的针对猪戊型肝炎病毒（HEV）的诊断技术及试剂盒。作者建立了应用猪HEV ORF3筛选出来的一段序列合成肽swHEV11检测 HEV血清抗体的间接ELISA诊断方法，确定的抗原最适包被浓度为3 μg·mL^-1；血清最适稀释度为1∶10，作用时间为30 min；酶标抗体最适稀释度为1∶12 000，作用时间为60 min。用HEV ORF3合成肽swHEV11研制的猪HEV ELISA诊断试剂盒，与北京万泰试剂盒检测比较，符合率为73.4% (205/279)，灵敏度和特异性分别为73.3%(200/273)和83.3%(5/6)。该试剂盒批内重复的变异系数＜10%，批间变异系数＜20%。结果表明，该方法的建立和所研制的猪戊型肝炎诊断试剂盒灵敏度高，特异性强，稳定性合格，为猪戊型肝炎病毒抗体的检测和流行病学的调查提供了一种简便快速的血清学诊断方法。

关键词: 猪戊型肝炎病毒, 合成肽, 间接ELISA, 检测, 诊断试剂盒

Abstract: The objective of this study was to establish effective diagnostic technique and diagnostic kit for swine hepatitis E virus (HEV). An indirect ELISA assay was developed for detection of swine HEV using synthetic peptide swHEV11 screening from one sequence of the open reading frame (ORF) 3 of swine HEV. This assay was optimized for an antigen coating concentration of 3 μg·mL^-1 and a serum dilution of 1:10, with a standard incubation time of 30 min. The optimal dilution and reaction time of enzyme labeled antibody was 1:12 000 and 60 min, respectively. When the kit was applied to detect HEV antibodies in sera of pigs, the results were quite consistent with the HEV diagnostic kit from Wantai. The conformity rate reached 73.4% (205/279), the sensitivity rate and specificity rate reached 73.3% (200/273) and 83.3% (5/6), respectively. The coefficient of variation (CV) was less than 10% in the same batch, and less than 20% in different batches. The results indicated that the application of indirect ELISA and the HEV ELISA kit is specific, sensitive and stable, and may provide a simple and rapid method for monitoring serum antibodies against HEV infection and seroepidemiological surveys of HEV infection

Key words: swine HEV, synthetic peptide, indirect ELISA, detection, diagnostic kit

刘启文;李震;赵凯;;于瑞嵩;;唐雪明;朱宏;吴潇;;谭芙蓉;;王金斌;;陶世如;;蒋玲曦;. 猪戊型肝炎ELISA诊断试剂盒的研制及应用[J]. 畜牧兽医学报, 2010, 41(11): 1435-1441.

Preparation and Application of Swine Hepatitis E Virus Diagnostic ELISA Kit. Preparation and Application of Swine Hepatitis E Virus Diagnostic ELISA Kit[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2010, 41(11): 1435-1441.

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