为了验证传统中药方剂玉屏风散对鸡传染性法氏囊病(IBD)疫苗免疫效果的影响，将玉屏风散以高（A）（1%）、中（B）（0.75%）、低（C）（0.5%）剂量拌料饲喂7日龄雏鸡，连喂12 d；14日龄用法氏囊疫苗免疫，分别于21、28、35、42和49日龄用ELISA法测定外周血IBDV抗体；于21和35日龄用流式细胞术测定外周血CD4+和CD8+T细胞亚群；于21、35和49日龄用碳粒廓清试验测定外周血巨噬细胞的吞噬活性。结果表明，玉屏风散可显著提高血清IBDV抗体水平，28日龄后A组抗体水平显著高于其他各组（P<0.05），35日龄后B、C组抗体水平明显高于对照组（P<0.01）；CD4+数量及CD4+/ CD8+值在21日龄时A、B组显著高于C组和对照组（P<0.05或P<001），35日龄时A组显著高于其余各组（P<0.01）；玉屏风散也能提高鸡外周血巨噬细胞的吞噬活性，A组效果最好（P<0.05或P<0.01）。结果提示，玉屏风散可提高雏鸡的特异性体液免疫和非特异性细胞免疫水平。

为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测，作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法。在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后，选择后者作为包被抗原；以羊抗猪IgA为二抗，兔抗猪IgGHRP作为酶标三抗，并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化。最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接ELISA检测方法。批间与批内试验结果证明该方法具有很好的稳定性。初步应用表明，该方法可用于猪肺炎支原体感染或免疫状态的临床监测。

本研究旨在分析鸡脂肪型脂肪酸结合蛋白（AFABP）和腺苷一磷酸脱氨酶（AMPD1）基因的SNP位点对鸡肉肌内脂肪（IMF）和肌苷酸（IMP）含量的组合效应。试验以北京油鸡为材料，采用PCRSSCP技术对AFABP基因外显子1第51位碱基（P4位点）的C→T突变和AMPD1基因序列第129位（PB位点）的A→G突变进行单基因和多基因组合效应分析。结果表明，P4位点的突变纯合BB基因型和PB位点的突变纯合NN基因型分别是多态位点上IMF和IMP含量的优势基因型；组合效应分析结果表明，在9种组合中，BBNN和BBMN组合基因型个体的组合效应显著，其中BBMN基因型个体的IMF含量、腹脂率（AFP）和平均脂带宽（WFS）比组合前P4位点BB基因型和PB位点MN基因型个体的均值分别增加了7.80%、50.74%和4.92%，组合效应显著
（P<0.05），IMP含量比组合前增加了2.53%；2个基因位点间不存在显著的互作效应（P>0.05）。因此，可将BB与NN或MN基因型聚合，进行分子标记聚合育种，以辅助选择提高鸡肉IMP和IMF含量。

本研究旨在探究中国斗鸡的遗传多样性和起源。运用DNA测序的方法测定了河南斗鸡、鲁西斗鸡、吐鲁番斗鸡、西双版纳斗鸡和漳州斗鸡5个斗鸡品种40个个体的mtDNA细胞色素b（Cytb）的部分碱基序列(535 bp)。结果表明，这5个斗鸡品种共有6种单倍型；单倍型多样度为0.428 57～0.785 71；核苷酸多样度为0.000 80～0.006 54；漳州斗鸡与其它斗鸡的遗传距离均较远；基于单倍型构建的系统发生树分析表明中国斗鸡母系起源于多个红色原鸡亚种。结论，漳州斗鸡的遗传多样性最丰富，而西双版纳斗鸡和吐鲁番斗鸡最贫乏；中国斗鸡母系起源于多个红色原鸡亚种。

为了评价基因修饰对提高DNA 疫苗免疫效果的影响，将 NDV F48E9 株HN基因进行密码子优化和信号肽替换，修饰后的基因命名为SoptiHN，将HN和SoptiHN基因分别克隆至pVAX 1和含CpGODN刺激序列的载体pVAX 1CpG中，共获得pVSoptiHN、pVCSoptiHN、pVHN和pVCHN 4种质粒。将4种质粒股四头肌多点注射3周龄SPF鸡，每只鸡200 μg，以PBS为非免疫对照；一免后3周以相同的剂量加强免疫，二免后2周以103 EID50 NDV的F48E9强毒株进行攻毒，计算发病率、死亡率以及排毒情况。试验期间每周采集血清进行HI抗体的检测，同时采集抗凝血分离外周血淋巴细胞，分析免疫后各试验组IFNγ和IL18的变化情况。结果表明，疫苗免疫1周后，所有免疫组均能产生抗NDV的HI抗体，pVSoptiHN 和pVCSoptiHN 组最高，与其他组差异显著； pVCSoptiHN和pVCHN质粒免疫组IFNγ和IL18表达水平要略高于pVSoptiHN和pVHN质粒免疫组。攻毒结果显示，pVSoptiHN 与pVCSoptiHN免疫组的死亡保护率均为71%，排毒检出率均为25%，而pVHN 和pVCHN免疫组的保护率均为50%，排毒检出率分别为50%和44%，pVAX1、pVAX1CpG和PBS对照组攻毒后的死亡率均为100%，排毒检出率均为100%，pVSoptiHN 与pVCSoptiHN免疫组的排毒时间与其他5组相比有所缩短。以上结果表明，修饰后的HN基因可以诱导鸡产生更强烈的免疫反应，获得更好的保护效率。

本研究旨在系统分析国内外猪种SLADQB基因的多态性，以期为进一步研究猪SLADQB与疾病抗性的相关性提供理论依据。采用PCRRFLP方法，野猪、14个中国地方猪种和4个引进猪种SLADQB基因第2外显子经限制性内切酶HaeⅢ酶切后，共检测到5个等位基因，9种基因型。其中野猪中仅存在A、B 2种等位基因；家猪群体中出现了野猪群体中所没有的6种基因型和3种等位基因。中国地方猪种与引进猪种相比，RFLP带型较为丰富，五指山猪和淮猪中具有8种基因型，多态性最为丰富。除野猪群体中A等位基因为优势等位基因外，其它所有家猪群体中均以B和C基因为优势等位基因；临高猪中出现其它猪种所没有的D等位基因，表现出独特的特性。本研究结果提示，生态环境和遗传纯度均可能影响SLADQB等位基因的多样性，总体上，引进猪种、培育猪种和地方猪种SLADQB基因外显子2的基因型分布并不存在明显的差异，但PCRRFLP带型在具体的品种之间的差别较大。

仔猪运输能引起应激反应，从而增加对疾病的易感性，这与应激导致的免疫和抗氧化能力改变有关。本研究的目的是了解2 h运输对仔猪重要器官抗氧化功能和主要促炎细胞因子的影响，为进一步制定抗应激措施提供理论依据。将30头体质量约20 kg的仔猪平均分为试验组和对照组，试验组仔猪用卡车在公路上运输2 h，比较试验组和对照组仔猪肝脏和心脏抗氧化指标和血清IL1β和IL2的变化。结果显示，2 h运输对仔猪心脏抗氧化能力有一定的影响，试验组仔猪心脏活性氧（ROS）量［（14 536.0±4 313.5)AU·mg1］多于对照组仔猪［（12 778.0±2 589.6）AU·mg1］，但无统计学差异（P>0.05）；运输后仔猪肝脏总抗氧化能力（TAOC）和过氧化氢酶（CAT）活性显著下降(P<0.05)，脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量显著上升(P<0.05)；肝脏和心脏中主要抗氧化酶——铜锌超氧化物歧化酶（CuZn SOD）mRNA水平虽均有所降低，但与对照组相比差异不显著（P>0.05）；运输后仔猪主要促炎细胞因子IL1β和IL2在血清中的含量与对照组相比虽无显著性差异（P>0.05），但均有所升高。以上结果表明，2 h运输可从基因转录和表达水平上降低仔猪肝脏的抗氧化功能，使肝细胞脂质过氧化程度增强，血清中促炎细胞因子的升高也可直接损伤组织，因此，抗氧化能力的下降和促炎细胞因子的生成增加，是运输仔猪组织损伤的重要原因。

以pb101质粒为模板，PCR扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜糖蛋白env基因片段。构建原核表达质粒pGEX4T3env后，转化入宿主菌BL21，IPTG诱导表达env蛋白，对表达的蛋白进行SDSPAGE及Western blot分析。结果表明，表达的重组蛋白具有良好的反应原性，相对分子质量约66.4 ku。将表达产物纯化后作为包被抗原, 建立了检测REV抗体的间接ELISA方法（IenvELISA）。经应用表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性，与IFA及iREVELISA结果相比其准确率均超过90%。该方法为检测REV抗体提供了一种快速、准确、简便的技术手段。

为探索恩诺沙星（Enrofloxacin）压力下大肠杆菌（Escherichia coli，E. coli）生理状态的变化，从而为进一步研究细菌对药物压力的应答机制提供参考，作者将E.coli接种于加入恩诺沙星（浓度为1/2 MIC）的液体LB中，绘制生长曲线，分别以光镜和电镜进行形态学观察，取5 h培养菌，进行表达谱差异分析。结果显示，加入恩诺沙星后细菌生长速度明显降低（P<0.01），菌体形态呈长丝状，基因芯片检测发现519个差异点，其中239个上调，而280个下调，表达变化3倍以上的基因66个，其中34个上调，32个下调，主要涉及SOS应答、细胞分裂、压力应答、物质合成、新陈代谢、转录调控等生物学功能。上述结果表明，在恩诺沙星压力下，细菌启动SOS应答，细胞分裂被抑制，细菌生理机制发生了复杂的变化。

旨在研究反-10，顺-12CLA对山羊乳脂合成抑制作用的效果及机制。选用4只安装永久性真胃瘘管和做了颈动脉游离的崂山奶山羊，4×4拉丁方设计，4个试验处理为真胃灌注0、2、4和8 g·d1含有反10，顺12CLA的共轭亚油酸产品。结果表明：① 真胃灌注CLA对奶山羊产奶量、采食量无明显影响；与对照组相比，CLA灌注水平为4和8 g·d1时，奶山羊的乳脂率和乳脂产量均显著降低（P<0.01），乳蛋白含量显著升高（P<001），但乳蛋白产量变化不明显。CLA处理对乳糖、无脂固形物（SNF）含量和产量无显著影响（P>0.05）。② 与对照组相比，CLA处理显著降低了游离脂肪酸（NEFA）的乳腺吸收率（P<0.05）。乙酸乳腺吸收率随CLA灌注量增加有先上升后下降的趋势（P=0.07）。丁酸的乳腺吸收率有上升趋势（P=0.07）。③ 真胃灌注CLA显著提高了乳脂中C16脂肪酸的总含量（P<0.05），对乳腺从头合成脂肪（C4C14:1）的含量和血液吸收脂肪酸（C16以上）的含量无显著影响。随CLA添加量的升高，乳脂脂肪酸中顺9,反11CLA（P<0.01）、反10,顺12CLA（P<0.05）、顺9,顺11CLA（P<0.05）和反9,反11CLA（P<0.01）的含量逐渐升高。④ 真胃灌注CLA降低了C14:1、C16:1和>C16脂肪酸的产量（P<0.05），对C16:0脂肪酸的产量没有影响，但表观值随CLA灌注量的增加而降低（P=0.19）。与对照组比较，8 g·d1 CLA灌注组的C4C14:1、C16+C16:1和>C16脂肪酸的产量分别下降了42.68%、36.15%和55.59%。⑤ 与对照组相比，CLA真胃灌注升高了C14:0/C14:1（P<0.01）、C16:0/C16:1和反11C18:1/顺9, 反11CLA的比例（P<0.05），表明CLA真胃灌注降低了△9脱饱和酶的活性。⑥对8 g·d1 CLA灌注组与对照组(活体采样)乳腺组织中乙酰CoA羧化酶mRNA表达量的分析表明，CLA真胃灌注降低了乙酰CoA羧化酶mRNA的表达水平（P<0.01）。反10,顺12CLA既抑制血液NEFA用于乳脂合成，也抑制乳腺脂肪酸的从头合成。

采用RTPCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区，进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET32a，将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET32aPG 转化BL21(DE3)，经1.0 mmol·L1 IPTG 诱导，外源基因获得高效表达。通过Westernblot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板，用已知中和抗体效价的OIE参考血清对该方法进行了标准化，建立了检测狂犬病病毒中和抗体的间接ELISA方法。结果表明，抗原的最佳包被量为3.74 μg，血清的最佳稀释度为1100，待检血清阳性临界值为0.50。用此方法检测了418份血清样品，并与荧光抗体病毒中和试验（FAVN）方法进行了比较，符合率为98.61％。

为了研究谷氨酰胺对13周龄肉仔鸡免疫功能的影响，本试验选用1日龄艾维因肉仔鸡300羽, 随机分为4组(每组3个重复),分别饲喂:基础日粮(对照组)、基础日粮+0.5% Gln（0.5%Gln组）、基础日粮+1.0% Gln（1.0%Gln组）和基础日粮+1.5% Gln（1.5%Gln组）, 试验期21 d。分别在试验的第7、14和21天屠宰取样。测定免疫器官指数和血清中补体、免疫球蛋白含量和各免疫器官中IL2和IL6的含量。结果表明:谷氨酰胺可以显著提高1周龄肉仔鸡C3和IgG水平;13 周龄肉仔鸡胸腺、脾脏指数；血清中IgA、IgM 和胸腺、法氏囊中IL2、IL6的水平(P<0.05)；对1周龄肉仔鸡血清中IL2和13周龄法氏囊指数无显著影响(P>0.05)。提示日粮中添加谷氨酰胺具有改善肉仔鸡免疫功能的作用。

为了对Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白进行抗原表位作图，设计了7个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个VP2蛋白的重叠短肽，经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用Asia1型口蹄疫感染血清对7个融合蛋白进行免疫印迹分析， 结果初步鉴定出VP2蛋白B细胞线性抗原表位位于氨基末端的第1-44氨基酸区域，并且证实O型、A型、C型口蹄疫标准血清和感染SAT2型口蹄疫康复期的牛血清也能识别融合蛋白F1(1-44 aa)。在此基础上，针对F1(1-44 aa)短肽，设计了6个相互重叠5个氨基酸的短肽片段，进一步鉴定出了VP2蛋白B细胞线性表位位于氨基末端的第6-15氨基酸区域。

本研究旨在探讨胰高血糖素样肽2（Glucagonlike peptide2，GLP2）对28日龄断奶仔猪的肠黏膜上皮细胞(IEC)损伤后增殖、代谢、凋亡的影响及可能的作用机理。试验首先采用单因子设计，分别用1.2和2.4 mg·mL1的β伴球蛋白对原代培养的断奶仔猪肠上皮细胞进行攻毒，通过测定细胞增殖、代谢及凋亡的变化而建立细胞损伤模型；然后再采用2×3因子设计，考察添加不同浓度的GLP2（1×109 、1×108、1×107 mol·L1）对致敏的肠上皮细胞的影响。结果表明，使用β伴球蛋白攻毒，细胞MTT OD值显著降低（P<0.05），细胞蛋白质沉积量和细胞总蛋白含量极显著降低（P<0.01），胞外LDH活力极显著增加（P<0.01），Na+K+ATP酶活力显著（P<005）或者极显著（P<0.01）降低，半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)酶活力极显著（P<0.01）升高；使用β伴球蛋白攻毒的同时添加不同浓度的GLP2，细胞MTT OD值、细胞蛋白质沉积量、细胞总蛋白含量和Na+K+ATP酶活力均显著或极显著（P<0.05或P<0.01）升高，且随着GLP2浓度的增加而升高，而胞外LDH活力则随着GLP2浓度的增加而逐渐下降（P<0.05或P<0.01），caspase3酶活力极显著（P<0.01）降低。提示β伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的增殖和细胞完整性有不利影响，而GLP2能够减轻或者避免β伴球蛋白对断奶仔猪小肠上皮细胞的不利影响，这种效应可能是通过调节细胞Na+K+ATP酶、caspase3等的活力变化并影响细胞代谢而实现。

为了探讨填饲对MTP基因表达的影响，本研究采用RTPCR法检测了填饲后MTP基因在朗德鹅肝脏和小肠组织中的表达情况,并对6种体组成参数和甘油三酯等4种血清生化指标进行了检测。结果表明：填饲后，各体组成参数和血清生化指标的水平都显著升高；MTP基因在朗德鹅的肝脏和小肠组织中都有表达；填饲后肝脏组织中MTP基因的表达无显著性变化（P>0.05），而小肠组织中的MTP基因的表达水平却显著升高（P<005）。结论：填饲引起MTP基因在小肠和肝脏中的变化差异可能与肝细胞中可利用脂类物质的水平、其它调控因子及填饲的高脂食物有关。

本研究旨在构建绵羊胰岛素样生长因子l（IGF1）毛囊特异表达载体pCDsRKI，并转染绒山羊胎儿成纤维细胞，最终获得稳定表达红色荧光并可用于核移植的转基因细胞克隆。通过RTPCR方法获得IGF1 cDNA，其与KAP61基因启动子片段以及红色荧光蛋白表达元件连接构成IGF1毛囊特异表达载体pCDsRKI（大小7.4 kb）。以组织块贴附法分离和培养绒山羊胎儿成纤维细胞，外源性表达载体以lipofectamineTM 2000介导转染所培养的第2代成纤维细胞，在DMEM/F12+10%FBS、37 ℃、5% CO2中培养，并添加G418筛选，获得了表达红色荧光蛋白的细胞克隆。经PCR法鉴定证实外源基因已经整合在细胞基因组中。通过分析转基因体细胞的生长曲线和染色体核型证明转基因细胞的生长状态良好、各项参数趋于正常。为下一步通过体细胞核移植技术获得转基因克隆绒山羊准备了核供体细胞。

旨在研究静脉注射不同水平53Cr标记吡啶甲酸铬（53Cr(pic)3）对仔猪肝细胞DNA的影响。选取体质量(15.0±1.0) kg、健康的瘦肉型三元杂交 (杜×长×大)公猪30头，按体质量、遗传背景相近的原则随机分成5组，每组6头，单笼个体饲养。每天早08：0010：00分别对各组猪进行静脉注射,Ⅰ（对照）、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别注射0、8、200、400和800 μg Cr·d1用53Cr标记的吡啶甲酸铬，试验期14 d。检测指标有肝脏中抗氧化酶活性、尿中8羟基脱氧鸟苷（8OHdG）浓度、肝组织中示踪剂铬的浓度及DNA链断裂（彗星试验）情况。随着静脉注射吡啶甲酸铬剂量的升高，肝脏中抗氧化酶活性、尿液中8OHdG的水平均未发生显著变化（P>0.05）；吡啶甲酸铬在肝脏中的蓄积量随着静脉注射吡啶甲酸铬水平的升高而增加，且在200 μg以上达到显著（P<0.05）；在肝细胞彗星形状指标上，除8和200 μg组彗星尾长显著低于对照组（P<0.05）外，各处理组彗星形状指标与对照组比较，差异均不显著（P>0.05），但400和800 μg组各项彗星复合指标显著高于8 μg组（P<0.05）；静脉注射吡啶甲酸14 d，800 μg Cr·d1剂量范围内，仔猪肝脏抗氧化酶活性未发生显著变化，肝细胞DNA未受到氧化损伤；但吡啶甲酸铬在肝组织的蓄积量显著升高，且肝细胞DNA完整性与肝铬蓄积量之间存在显著量效关系。

为了探索湖羊多胎分子机理，筛选影响湖羊多胎性状的特有候选基因，本试验选取16只经产湖羊母羊，分为单羔组和多羔组，同期发情后屠宰观察卵巢排卵数，并利用RTPCR和荧光定量PCR技术对湖羊BMPRIA和BMPRII基因的组织表达特征以及在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达水平进行分析。结果表明：BMPRIA和BMPRII基因除了在湖羊卵巢组织中有表达外，在下丘脑、垂体、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管等组织内也均有表达；单羔组和多羔组间卵巢组织BMPRIA基因mRNA表达水平差异不显著（P>005），且与排卵数间没有显著相关性（P>005）；但是，多羔组卵巢组织BMPRII基因mRNA表达水平显著高于单羔组（P<005），且与排卵数呈显著正相关（r= 0.722，P<0.05）。结果说明BMPRII基因可能对湖羊排卵数起作用，是影响湖羊排卵数的候选基因。

本研究旨在克隆山羊Sox2 基因，构建pGEXSox2原核表达重组质粒，从大肠杆菌中获得纯化的GSTSox2融合蛋白。应用RTPCR方法从6周龄胎山羊生殖嵴扩增Sox2基因编码全序列，将其克隆到pMD18T载体，然后再亚克隆到pGEXKG表达载体。重组质粒pGEXSox2 转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导，用SDSPAGE电泳及Western blotting检测GSTSox2融合蛋白表达，用谷胱甘肽 Sepharose 4B 介质分离纯化该融合蛋白。结果表明,山羊Sox2 基因编码序列全长为960 bp；在优化的表达条件（1 mmol·L1 IPTG，22 ℃诱导16 h）下，重组质粒（pGEXSox2）在大肠杆菌得到了高效表达；谷胱甘肽 Sepharose 4B颗粒纯化蛋白得到预期大小的融合蛋白(约60 ku)。结论，本研究克隆了山羊Sox2基因，获得了纯化的GSTSox2 融合蛋白，为制备其多克隆抗体奠定了基础，为进一步研究山羊iPS细胞（Induced pluripotent stem cells）创造了条件。

摘要： 为研究影响猪后腿质量的QTL，采用分布于猪全基因组19对染色体上的183个微卫星标记，对白色杜洛克（♂）×二花脸（♀）资源家系群体1 028头F2代个体及其亲本进行基因型检测，利用最小二乘线性回归分析，通过置换试验确定显著性域值，对影响猪后腿质量的数量性状位点（QTL）进行了定位分析。共检测到10个QTL位点，其中在猪2、4、7、8、18号染色体上检测到5个1%基因组显著水平的QTLs，在5和7号染色体上检测到2个5%基因组显著水平QTLs。影响效应最大的QTL位于7号染色体58 cM处，置信区间仅为5 cM，这些结果为下一步的精细定位和位置候选基因的分离奠定了基础。

GPAT、AIRC和PURH基因作为肌苷酸合成过程中的酶系基因，它们对鸡肌肉肌苷酸含量均具有显著的效应。为了进一步验证这3个基因对肌苷酸含量的遗传效应，本研究以白耳鸡为试验材料，采用PCRSSCP和测序相结合的方法，分析了这3个基因的单基因以及合并基因型对鸡胸肌肌苷酸含量的影响。结果表明：GPAT、AIRC和PURH基因均对白耳鸡胸肌肌苷酸含量的差异产生影响，均与鸡肌肉IMP含量存在显著关联(P<0.05)，这3个位点可作为影响鸡肌肉肌苷酸含量的分子标记；合并基因型的遗传效应要高于最优秀的单个基因型效应。因此，可以利用合并基因型对鸡的肉质风味性状进行标记辅助选择。