摘要： 本研究旨在建立新霉素（Neomycin，NEO）免疫学检测试剂盒。以制备的抗NEO单克隆抗体(NEO mAb)为基础，建立阻断ELISA分析方法，组装新霉素阻断ELISA试剂盒，并对试剂盒的性能进行鉴定。结果表明，NEO试剂盒(NEO-kit)标准曲线呈典型的S型，符合4参数logit曲线拟合，相关系数R2=0.990 3 ；检测范围为1.0~64.0 μg·L1，半数抑制浓度(IC50)为2.59 μg·L1，灵敏度为0.75 μg·L1，检测限为1.0 μg·L1。试剂盒除了和NEO阳性样品反应呈阳性外，与庆大霉素、链霉素、土霉素、沙丁胺醇、环丙沙星、二氟沙星、磺胺嘧啶及磺胺甲噁唑等其他药物均无交叉反应性。奶样、饲料样及肉样的平均添加回收率为89.50%、89.58%和87.92%；平均批内和批间变异系数均小于15%，而且批间变异系数小于批内变异系数；基质对NEOKit的检测结果影响比较小；NEOKit在4 ℃可保存6个月以上。试剂盒和HPLCMSMS对牛奶中新霉素回收率没有显著差异（P≥0.05）。试剂盒和HPLCMSMS对饲料样检测结果也无显著差异（P≥0.05）。本研究成功研制出敏感、特异、准确的NEO检测试剂盒。