畜牧兽医学报 ›› 2008, Vol. 39 ›› Issue (12): 1715-1720.doi:
杨春晓，王小娥，刘冠华，肖海君，崔金生，朱瑞良*
YANG Chun-xiao,WANG Xiao-e,LIU Guan-hua, XIAO Hai-jun,CUI Jin-sheng, ZHU Rui-liang*
摘要： 采用改良的Wooldridge法提取了禽波氏杆菌外膜蛋白（OMP），通过Bradford方法测定禽波氏杆菌OMP含量为320 μg/mL，SDSPAGE电泳检测发现禽波氏杆菌P5株OMP含有5种成分，相对分子质量分别为58、47、41、36、24 ku；P8株OMP含有6种成分，相对分子质量分别为58、47、41、38、21、16 ku。将提取的禽波氏杆菌OMP免疫健康青紫兰兔，每周免疫1次，共免疫4次,获得了兔抗禽波氏杆菌OMP高免血清，以此高免血清建立了检测禽波氏杆菌的间接ELISA和间接免疫荧光（IFA）方法，并对其工作条件进行了优化和筛选，试验结果表明间接ELISA抗原、抗血清最佳工作浓度分别为10 μg/mL、1∶12 800，酶标二抗工作浓度为1∶5 000，最佳包被条件为4 ℃、24 h，最佳封闭条件为37 ℃、1 h；间接免疫荧光（IFA）兔高免血清释释度为1∶20，FITC标记羊抗兔IgG稀释度为1∶10，感作时间为45 min时，禽波氏杆菌特异性黄绿色荧光最清晰，非特异性荧光最弱。经临床检测证明该两种方法均具有简便、快速、特异性强的特点，为禽波氏杆菌病的流行病学、血清学调查和临床快速诊断奠定了基础。
