鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白抗原表位的串联表达及间接ELISA方法的建立

畜牧兽医学报

鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白抗原表位的串联表达及间接ELISA方法的建立

孙罗美¹，易林¹，邹年莉¹，柳萍^1,2，黄勇^1,2*

（1. 四川农业大学动物医学院，雅安 625014； 2. 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室，雅安 625014）

收稿日期:2012-04-23 出版日期:2012-11-26 发布日期:2012-11-26
通讯作者: 黄勇，教授，E-mail: hyong601@163.com
作者简介:孙罗美(1986-)，女，四川彭州人，硕士生，主要从事家禽传染病的研究，E-mail: myslm@163.com
基金资助:
教育部《长江学者和创新团队发展计划》创新团队项目（IRTO848）

Development of an Indirect ELISA of Infectious Bronchitis Virus by Using Tandem Epitopes of S1

SUN Luo-mei¹, YI Lin¹, ZOU Nian-li¹, LIU Ping^1,2, HUANG Yong^1,2*

(1. College of Veterinary Medicine, Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China; 2. Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province, Sichuan Agricultural University, Ya’an 625014, China)

Received:2012-04-23 Online:2012-11-26 Published:2012-11-26

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在建立一种快速、简便的鸡传染性支气管炎抗体的检测方法。通过生物信息学软件对传染性支气管炎病毒（IBV）ZY3株的S1蛋白进行分析后，筛选出 4 段S1蛋白抗原表位优势区域（F1～F4），将4段表位串联成1条新基因F，对F基因编码的蛋白质进行二级结构预测，结果表明该蛋白抗原指数性高且具有良好的柔韧性。构建重组表达载体pET-32a(+)-F，并在原核表达系统中表达，获得大小为42 ku的融合蛋白，经Western blot分析表明表达的串联蛋白具有良好的反应原性。以纯化的串联蛋白作为包被抗原，建立了一种检测 IBV 抗体的间接 ELISA 方法。利用建立的ELISA方法对采集来175份血清样品进行检测，并与商品化试剂盒进行对比，显示其阳性符合率为90.2%，阴性符合率为85.7%，总体符合率为89.7%，表明建立的ELISA方法具有良好的特异性、重复性和敏感性。

Abstract: The aim of this study was to establish an indirect ELISA for detection of antibodies against avian infectious bronchitis (IB). The published amino acid sequences of S1 gene of avian Infectious bronchitis virus (IBV) strain ZY3 were analyzed by bioinformatics software, and four dominant epitopes named as F1, F2, F3 and F4 were selected and ligated together as a chimeric gene F. Bioinformatic analysis showed that this protein if highly antigenic and flexible. Then the chimeric gene was then inserted into expression vector pET-32a（+）for the expression of target gene and a 42 kD recombinant protein was obtained. The result of westernblot showed that the chimeric protein could react specifically with anti-IBV positive serum. An indirect ELISA was then developed using purified protein as coating antigen.175 sera samples were examined by this ELISA and commercial kit, the results showed that the positive coincidence rate could reached 90.2%, negative coincidence rate could reached 85.7%, and the total coincidence rate reached 89.7%. The results indicated that the indirect ELISA was sensitive and specific, and no cross-reaction with positive sera of other chicken diseases. The indirect ELISA for detection of chicken antibodies against Infectious bronchitis were successfully developed.

中图分类号:

S852.659.6

孙罗美，易林，邹年莉，柳萍，黄勇. 鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白抗原表位的串联表达及间接ELISA方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, doi: .

SUN Luo-mei, YI Lin, ZOU Nian-li, LIU Ping, HUANG Yong. Development of an Indirect ELISA of Infectious Bronchitis Virus by Using Tandem Epitopes of S1[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, doi: .

0
/ / 推荐

导出引用管理器 EndNote|Reference Manager|ProCite|BibTeX|RefWorks

链接本文: https://www.xmsyxb.com/CN/

https://www.xmsyxb.com/CN/Y2012/V43/I11/1780

参考文献

［1］王红宁．禽传染性支气管炎综合防治［M］．北京：中国农业科学技术出版社，2000.

［2］HISCOX J A, WURM T, WILSON L,et al.The coronavirus infectious bronchitis virus nucleoprotein localizes to the nucleolus［J］. J Virol, 2001, 75(1): 506.

［3］MOLENKAMP R, SPAAN W J M. Identification of a specific interaction between the coronavirus mouse hepatitis virus A59 nucleocapsid protein and packaging signal［J］. Virology, 1997, 239(1):78-86.

［4］刘胜旺．我国鸡传染性支气管炎流行现状及原因分析［J］．中国家禽，2010，32(16): 5-9.

［5］CAVANAGH D, DAVIS P J, MOCKETT A P. Amino acids within hypervariable region 1 of avian coronavirus IBV (Massachusetts serotype) spike glycoprotein are associated with neutralization epitopes［J］. Virus Res, 1988, 11(2):141-150.

［6］KOCH G, KANT A. Nucleotide and amino acid sequence of the S1 subunit of the spike glycoprotein of avian infectious bronchitis virus, strain D3896［J］. Nucleic Acids Res,1990，18(10):3063.

［7］徐辉， LOHR J．检测鸡传染性支气管炎病毒抗体的三种血清学方法的比较［J］. 中国畜禽传染病, 1998, 20(3):168-170.

［8］磨美兰，李孟，韦正吉，等．广西 1985年~2008年IBV分离株S1 基因高变区I和N基因的序列和系统进化分析［J］．中国预防兽医学报，2009,(10)：761-765.

［9］ZOU N L, ZHAO F F,WANG Y P,et al.Genetic analysis revealed LX4 genotype strains of avian infectious bronchitis virus became predominant in recent years in Sichuan area, China［J］. Virus Gen, 2010, 41(2): 202-209.

［10］田浪．禽传染性支气管炎病毒多表位嵌合 DNA 疫苗构建及免疫研究［D］．雅安：四川农业大学，2009.

［11］HAN Z, SUN C, YAN B, et al. A 15-year analysis of molecular epidemiology of avian infectious bronchitis coronavirus in China［J］. Infect Genet Evol, 2011, 11(1):190-200.

［12］王新卫，郝春丽，何宏轩，等．IBV NP基因的可溶性表达及间接ELISA方法的建立［J］. 中国兽医学报，2009，6：700-704.

［13］宋翥远，卿上田，肖朝庭，等．传染性支气管炎病毒结构蛋白研究进展［J］．动物医学进展，2010，31(6)：100-102.

［14］GOMAA M H, YOO D, OJKIC D, et al. Use of recombinant S1 spike polypeptide to develop a TCoVspecific antibody ELISA［J］. Vet Microbiol, 2009, 138(34): 281-288.

［15］阎隆飞．孙之荣，蛋白质分子结构［M］．北京：清华大学出版社，1999.

［16］贾莹，李岩，尹鑫，等．牛病毒性腹泻病病毒NS3表位串联蛋白表达及抗体间接 ELISA 方法的建立［J］．畜牧兽医学报，2011，42(8)：1120-1125.

［17］钱莺娟．串联表达GA株MDV gB主要表位基因重组鸡痘病毒的构建及其免疫保护作用［D］．南京: 南京农业大学，2003.

[1]	张松林，沈志强，刘磊，马永彪，刘吉山. 猪繁殖与呼吸综合征病毒结构和非结构蛋白生物学功能研究进展[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(11): 1683-1696.
[2]	付向晶，王丹阳，王兴龙，张渭东，宋祥军，刘阳坤，唐文雅，慕国辉，刘海金，贺生芳，杜恩岐，杨增岐. 1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(11): 1773-1779.
[3]	张宜娜，李珂，周永辉，等. 免疫复合物对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的PAM细胞因子转录的影响[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(10): 1589-1597.
[4]	吕健，韦祖樟，高飞，郑海红，童光志，袁世山. 猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株嵌合感染性克隆的构建及鉴定[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(10): 1598-1602.
[5]	安鹏丽，李娜，李丽敏，张丽，张雷，高云欢，王家鑫. 负载重组口蹄疫病毒VP4蛋白的树突状细胞启动的T细胞应答[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(10): 1651-1656.
[6]	宋菲菲, 康震, 齐艳君, 袁颖烁, 张守峰, 张乐萃, 扈荣良. 表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白重组腺病毒的构建及免疫原性的初步分析[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(9): 1449-1454.
[7]	吕军华, 刘宁宁, 赵钦, 马玉萍, 张冲, 王向鹏. 非肌肉肌球蛋白Ⅱ型重链A羧基端蛋白的真核表达及在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞中的作用[J]. 畜牧兽医学报, 2012, 43(9): 1455-1462.