摘要： 本试验旨在构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）GP5蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株。PCR克隆除去信号肽序列的PRRSV ORF5基因，将其插入到表达载体pYA3341中，构建重组质粒pYA3341-ORF5。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550（缺失Asd、Cya、Crp基因），获得重组疫苗菌株X4550（pYA3341-ORF5）。鉴定重组菌GP5蛋白的表达；测定重组菌定居特性及安全性；检测免疫小鼠血清抗体；流式细胞仪检测重组菌对小鼠T淋巴细胞CD4⁺和CD8⁺亚群的影响；最后进行免疫猪血清抗体检测。结果表明，酶切鉴定证实重组质粒构建成功；Western blot证实重组菌表达的GP5蛋白能与PRRSV阳性血清特异性结合；重组菌在体内可较稳定地定居于小鼠的肠系膜淋巴结和脾脏中，并在其中表达出GP5蛋白；小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用；重组菌口服免疫小鼠可以产生抗GP5蛋白抗体且抗体具有中和活性；重组菌株能不同程度地使CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺升高，而使CD8⁺下降，表明重组菌对细胞免疫功能具有调节作用；淋巴细胞增殖试验表明，重组菌能诱发小鼠产生较强的细胞免疫应答；重组菌口服免疫猪可以产生抗GP5蛋白抗体。本试验成功构建了能稳定表达PRRSV GP5蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株，为研究PRRSV口服基因工程疫苗奠定基础。