畜牧兽医学报 ›› 2008, Vol. 39 ›› Issue (3): 376-379.doi:
王颖;骆学农;郑亚东;马全英;丁军涛;景志忠;才学鹏
WANG Ying;LUO Xue-nong;ZHENG Ya-dong;MA Quan-ying;DING Jun-tao;JING Zhi-zhong;CAI Xue-peng
摘要: SLC10是以反式剪切引导序列为基础,通过RT-PCR从猪囊尾蚴中克隆到的一个未知基因。将猪囊尾蚴SLC10基因从重组克隆载体pGEM-SLC10扩增并酶切后,与相应酶切处理的毕赤酵母分泌性表达载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K-SLC10,转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切和测序鉴定,基因序列完全正确。纯化的重组质粒pPIC9KSLC10用内切酶SacⅠ线性化,电转化毕赤酵母,使重组表达载体与酵母染色体发生同源整合;采用G418抗性梯度法筛选多拷贝重组菌株,用甲醇进行诱导表达;通过SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物,结果表明目的蛋白得到了表达,但不具有免疫反应性。