畜牧兽医学报 ›› 2005, Vol. 36 ›› Issue (6): 536-539.doi:
吕文发; 赵 静;单雪松;王 恒; 吴 伟
Lv Wen-fa;ZHAO Jing;SHAN Xue-song;WANG Heng;WU Wei
摘要: 根据GenBank中鸡卵泡抑制素α亚基序列设计引物,对该序列按大肠杆菌嗜好密码子进行优化,在设计的引物两端分别加上限制性内切酶SacⅠ 和XhoⅡ的识别位点序列。利用RT-PCR技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出抑制素α亚基成熟区序列,经PCR扩增出354 bp片段,该片段与pMD18-T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行双酶切鉴定和PCR鉴定,并进行了测序分析,得到的克隆序列与设计的序列基本一致。表明成功地获得了抑制素α亚基编码序列的克隆载体。从阳性细菌中提取质粒,经SacⅠ 和XhoⅠ酶切,回收354 bp目的片段,定向克隆到pET28a中,转化DH5α受体菌,提取质粒,再转化到BL21(DE3)中,成功筛选出阳性克隆。阳性菌经IPTG诱导,通过SDS-PAGE,检测出溆浦鹅卵泡抑制素α亚基编码区的表达。