猪伪狂犬病病毒gE蛋白单链抗体的制备及鉴定

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.027

畜牧兽医学报 ›› 2026, Vol. 57 ›› Issue (1): 317-326.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2026.01.027

猪伪狂犬病病毒gE蛋白单链抗体的制备及鉴定

顾小玉¹^,²(), 贾雪寅¹^,², 刘小惠¹^,², 于学祥¹^,²^,³^,⁴, 李文涛¹^,²^,³^,⁴^,⁵, 何启盖¹^,²^,³^,⁴()

^1.华中农业大学动物医学院，武汉 430070
^2.农业微生物资源发掘与利用全国重点实验室，武汉 430070
^3.农业农村部兽用诊断制剂创制重点实验室，武汉 430070
^4.国家伪狂犬病参考实验室，武汉 430070
^5.湖北江夏实验室，武汉 430200

收稿日期:2025-03-18 出版日期:2026-01-23 发布日期:2026-01-26
通讯作者: 何启盖 E-mail:guxiaoyu@webmail.hzau.edu.cn;he628@mail.hzau.edu.cn
作者简介:顾小玉，硕士生，主要从事猪伪狂犬病病毒研究，E-mail：guxiaoyu@webmail.hzau.edu.cn
基金资助:
国家生猪产业技术体系(CARS-35);湖北省自然科学基金(2024AFB172);国家重点研发计划(2024YFD1800500)

Preparation and Identification of Single Chain Variable Fragment Antibodies against gE Protein of Pseudorabies Virus

GU Xiaoyu¹^,²(), JIA Xueyin¹^,², LIU Xiaohui¹^,², YU Xuexiang¹^,²^,³^,⁴, LI Wentao¹^,²^,³^,⁴^,⁵, HE Qigai¹^,²^,³^,⁴()

^1.College of Veterinary Medicine，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China
^2.National Key Laboratory of Agricultural Microbiology，Wuhan 430070，China
^3.Key Laboratory of Development of Veterinary Diagnostic Products of the Ministry Agricultural and Rural Affairs，Wuhan 40030，China
^4.National Reference Laboratory for Pseudorabies，Wuhan 40030，China
^5.Hubei Jiangxia Laboratory，Wuhan 430200，China

Received:2025-03-18 Online:2026-01-23 Published:2026-01-26
Contact: HE Qigai E-mail:guxiaoyu@webmail.hzau.edu.cn;he628@mail.hzau.edu.cn

摘要/Abstract

摘要：

2011年以来，我国新流行的猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）变异毒株大大增加了该病毒抗体的检测工作量，阻断ELISA试剂盒的大量使用增加了对单克隆抗体的需求量，但杂交瘤细胞在传代过程中容易失去抗体分泌能力。本研究旨在基于单克隆抗体制备出具有良好结合活性、可在原核系统大量表达的单链抗体（scFV）。本研究将原核表达的PRV gE蛋白免疫小鼠，经细胞融合及筛选得到稳定分泌针对PRV gE蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，以阳性杂交瘤细胞的cDNA为模板扩增得到抗体可变区序列，将重链和轻链可变区序列由Linker连接得到scFv基因，克隆到pET-28a质粒进行原核表达，对得到的重组抗体进行鉴定。结果显示：本研究获得了一株特异性针对PRV gE蛋白的单克隆抗体7B7，以7B7杂交瘤细胞的cDNA为模板，成功制备了能够特异性与PRV gE蛋白反应的单链抗体，并且能够通过原核表达系统进行表达。本研究为猪伪狂犬病病毒新型检测方法的开发提供了基础。

关键词: 猪伪狂犬病, gE蛋白, 单链抗体

Abstract:

Since 2011，the new outbreak of pseudorabies virus（PRV）variant strain in China has greatly increased the detection workload of the virus. At present， the widely use of blocking ELISA kits has raised the greater demand for monclonal antibodies. However， hybridoma cells often lose antibody secretion capacity during passages. This study aimed to prepare single-chain fragment variable with good binding activity on the basis of monoclonal antibody and achieve large-scale production via prokaryotic expression system， providing a foundation for novel detection methods. The prokaryotically expressed PRV gE protein was used to immunize mice. Positive hybridoma cells stably secreting anti-PRV gE mabs were obtained through cell fusion and screening. The cDNA of the positive hybridoma cells was used as a template to amplify the variable region sequence of antibody，and the scFv gene was constructed by linking the variable regions of heavy and light chain with a Linker peptide. The scFv gene was cloned into pET-28a plasmid for prokaryotic expression to produce the recombinant antibody. A monoclonal antibody 7B7 specific to the gE protein of PRV was successfully screened. Using the cDNA of 7B7 hybridoma cells as a template，a single chain fragment variable capable of specifically reacting with PRV gE was successfully prepared which can be expressed by prokaryotic expression system， providing a basis for the development of new detection methods for PRV.

Key words: pseudorabies virus, gE protein, single chain fragment variable

中图分类号:

S852.659.1

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图/表 9

表1

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引物名称 Primer names	引物序列（5’→3’） Primer sequences
LF1	TGACCAAGCTTGCGGCCGCGGATACAGTTGGTGCAGCATC
LF2	GATRTTKTGATGACCCARASTCCACT
LR1	TACAHHATCCACGCGTACAAATTGTTCTCACCCAGTCT
LR2	CCGTTTGATTTCCAGCTTGGTGCC
LR3	CCGTTTTATTTCCAGCTTGGTCCC
LR4	CCGTTTTATTTCCAACTTTGTCCC
LR5	CCGTTTCAGCTCCAGCTTGGTCCC
HF1	GGCCAGTGGATAAAGCTTTGGGGGTGTCGTTTTGGC
HF2	TGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCCTTGGCCCC
HR1	GAATAGGCCATGGCGGAGGTCCAGCTGCAACAATCT
HR2	AGGTSMARCTGCAGSAGTCWGG

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Preparation and Identification of Single Chain Variable Fragment Antibodies against gE Protein of Pseudorabies Virus

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