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2017年 第48卷 第12期 刊出日期:2017-12-23
中文目次
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  0-0.  doi:
摘要 ( 101 )   HTML( )    PDF (323KB) ( 146 )  
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英文目次
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  0-0.  doi:
摘要 ( 41 )   HTML( )    PDF (162KB) ( 131 )  
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2017年总目次
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  0-0.  doi:
摘要 ( 61 )   HTML( )    PDF (602KB) ( 201 )  
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封面封底
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  0-0.  doi:
摘要 ( 62 )   HTML( )    PDF (449KB) ( 130 )  
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2015年百种中国杰出学术期刊
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  0-0.  doi:
摘要 ( 61 )   HTML( )    PDF (319KB) ( 129 )  
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中国精品科技期刊证书
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  0-0.  doi:
摘要 ( 52 )   HTML( )    PDF (330KB) ( 135 )  
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综述
环境因素引起的哺乳动物跨代DNA甲基化修饰现象
甘麦邻, 杨大洪, 谭娅, 杨琼, 蒲红州, 张顺华, 朱砺
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2225-2231.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.001
摘要 ( 290 )   HTML( )    PDF (892KB) ( 324 )  
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经典遗传学认为生物的遗传信息是由基因决定的,DNA序列发生的改变可以传递给后代,而表观遗传修饰则由于细胞重编程作用不能被传递到后代。近年来的研究发现,一些环境因素引起的表观遗传修饰也可以传递给后代,而DNA甲基化是表观遗传修饰的主要机制之一,也是近年来研究跨代遗传的热点。本文对近年来环境因素在哺乳动物世代继承中的DNA甲基化修饰相关研究进行综述,为进一步研究跨代遗传中的表观遗传修饰机制提供参考。

磷酸酶Wip1基因敲除表型及机制研究进展
王冰源, 刘志国, 牟玉莲
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2232-2238.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.002
摘要 ( 246 )   HTML( )    PDF (971KB) ( 268 )  
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野生型p53诱导的磷酸酶1(Wild-type p53-induced phosphatase1,Wip1)是PP2C(The type 2C family of protein phosphatases)磷酸酶家族中的一员。在DNA损伤修复中起重要作用,并作为原癌基因受到越来越多的关注。Wip1敲除小鼠虽然能够存活,但寿命缩短,并出现多系统异常,包括生殖系统、免疫体系、内分泌系统、神经系统等,具体表现:雄性生殖器官萎缩及雄性不育、对病原体敏感、T细胞和B细胞功能受损、胰岛素抵抗、体重增长受限、脂肪量减少、焦虑和抑郁样行为增加等。相关机制研究发现,Wip1通过去磷酸化不同蛋白底物而在多种生理和病理过程中发挥重要作用。本文旨在对小鼠Wip1基因缺失所致表型及其初步的分子机制进行综述,为进一步研究Wip1的生物学功能以及哺乳动物体内生理和病理过程的发生机制提供参考。

转基因大动物常用载体频数分析及筛查策略
刘晓飞, 王勤, 李晓琳, 刘丹丹, 仇松寅, 林祥梅
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2239-2248.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.003
摘要 ( 213 )   HTML( )    PDF (1391KB) ( 247 )  
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构建重组表达载体是转基因动物生产制备研究中非常关键的一步,包括构建完整的外源基因表达盒,包含目的基因、调控序列(启动子、终止子)和筛选报告基因等。本文概述了转基因大动物制备技术,归纳统计了近10年转基因猪、牛、羊制备过程中常用的载体和频数,统计结果表明,转基因猪中启动子频数从多到少依次为酪蛋白、CAG、CMV启动子,终止子频数依次为兔β-globin poly A、酪蛋白poly A、SV40 poly A和BGH poly A;转基因羊中启动子频数从多到少依次为酪蛋白、BLG和CMV启动子,终止子依次为酪蛋白poly A、BLG poly A、BGH poly A、SV40 poly A和兔β-globin poly A;转基因牛中启动子频数从多到少依次为酪蛋白、CMV、人乳清白蛋白启动子等,终止子依次为SV40 poly A、BGH poly A和酪蛋白poly A。根据统计结果提出针对启动子和终止子的多重检测和筛查策略;分析了未来转基因动物检测可能存在的问题,以期对转基因动物的监管和筛查检测方法的建立提供参考。

禽源呼肠孤病毒诱导宿主免疫应答研究进展
池晓娟, 邵文涵, 陈吉龙, 陈月香, 王松
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2249-2257.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.004
摘要 ( 212 )   HTML( )    PDF (1927KB) ( 321 )  
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禽源呼肠孤病毒是一类重要的禽类病原体,能引起感染家禽和水禽法氏囊、脾和胸腺等器官严重受损,造成免疫抑制,且易与其他病原体混合感染,极大地阻碍了全球养禽业的健康发展。天然免疫应答具有反应迅速、不针对特定抗原且作用范围广的特性,是当前免疫学和微生物学的研究热点。适应性免疫应答能够排除体内特异性抗原异物,抵抗相同病原体的再次入侵,是预防接种的免疫学基础。本文将从禽源呼肠孤病毒诱导宿主天然免疫应答和适应性免疫应答两方面,阐述此类病毒感染对宿主免疫系统的影响,以期为靶向病毒和宿主免疫反应的疫苗设计提供参考依据。

遗传育种
基于GBLUP与惩罚类回归方法的猪血液性状基因组选择研究
张巧霞, 张玲妮, 刘飞, 刘向东, 刘小磊, 赵书红, 朱猛进
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2258-2267.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.005
摘要 ( 230 )   HTML( )    PDF (1743KB) ( 271 )  
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旨在探讨GBLUP与惩罚类回归方法用于猪血液性状基因组选择的相关问题。以本实验室收集的免疫资源猪群体13个血液性状为分析对象,结合Illumina公司猪SNP60K基因芯片分型数据,以加性模型和加性-显性模型为基础,利用GBLUP和3种惩罚类回归方法(ridge、lasso与elastic-net)开展基因组选择分析。研究发现,基因组选择的准确性与性状芯片遗传力估计值呈正相关。交叉验证分析结果表明,4种方法对13个血液性状预测准确性最高的性状均是MCV(平均红细胞体积),而加性模型和加性-显性模型的预测准确性在不同性状中的表现不同。在多数性状中,lasso和elastic-net回归的预测准确性低于ridge回归和GBLUP法,但在NE%(嗜中性细胞百分比)等少数性状中则刚好相反。综上说明,没有适用于所有性状的最佳基因组预测方法,基因组预测方法的选择应考虑目标性状的遗传特性。本研究为猪免疫性状基因组选择的实际应用提供了重要参考信息。

从江香猪FoxO 4基因真核表达载体的构建及其在皮下脂肪前体细胞中的表达
孙成娟, 许厚强, 段志强, 陈伟, 赵佳福, 周迪
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2268-2276.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.006
摘要 ( 187 )   HTML( )    PDF (3863KB) ( 216 )  
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本研究旨在克隆从江香猪FoxO 4基因编码区序列,对FoxO 4基因功能进行初步探究。采用qRT-PCR技术对从江香猪(6月龄)不同组织中FoxO 4基因的相对表达量进行检测;PCR扩增FoxO 4基因CDS区,构建真核表达载体pEGFP-N3-FoxO4;利用脂质体法将重组质粒pEGFP-N3-FoxO4瞬时转染从江香猪皮下脂肪前体细胞,通过qRT-PCR方法,检测FoxO 4、PPARγ、LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL的表达水平。结果显示:FoxO 4基因在从江香猪脂肪组织中表达量最高;构建的重组真核表达载体pEGFP-N3-FoxO4在从江香猪皮下脂肪前体细胞中成功表达,与对照组相比,LPL、FAS、ACC、ATGL、HSL基因的表达均显著上调。综上表明,FoxO 4对脂质代谢具有一定的调控作用,可能是影响从江香猪猪肉品质的重要候选基因,为进一步了解从江香猪脂肪沉积机制提供理论基础。

克隆山羊成纤维细胞IGF2-H19基因座甲基化分析
刘孜斐, 邓明田, 任才芳, 万永杰, 王锋
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2277-2285.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.007
摘要 ( 189 )   HTML( )    PDF (2984KB) ( 240 )  
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旨在研究山羊体细胞核移植对克隆后代成纤维细胞IGF2-H19基因座甲基化的影响。以奶山羊耳成纤维细胞(GFC,对照组)和克隆山羊耳成纤维细胞(CFC,试验组)为试验材料,培养至第5代时,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR分析基因的表达差异,亚硫酸氢盐测序(BSP)分析差异甲基化区域的甲基化水平。结果显示,GFC和CFC组细胞的生长曲线均呈典型"S"型,但CFC组细胞的凋亡率显著高于GFC组(P<0.01);CFC组细胞中Dnmt1(P<0.01)、Dnmt3bP<0.01)、 Tet1(P<0.05)、Tet2(P<0.05)、H19(P<0.05)和IGF2(P<0.01)基因表达水平均显著低于GFC组,而Tet3、Dnmt3aIGF2R在2组间无显著性差异;CFC组细胞中IGF2两个差异甲基化区域(DMR1和DMR2)的甲基化水平均显著低于GFC组(74.1%vs.57.8%,P<0.01;76.8%vs.40.0%,P<0.01),但IGF2-H19印记基因控制区域甲基化水平显著高于GFC组(68.8%vs.84.0%,P<0.01)。体细胞核移植通过影响DnmtTet家族基因的表达引起IGF2-H19基因座甲基化的异常,导致基因印记紊乱,进而影响再克隆的效率。

基于Label-free技术的鹿角与鹿骨蛋白组分比较
张然然, 刘华淼, 王磊, 周永娜, 唐福全, 夏述忠, 邢秀梅
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2286-2292.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.008
摘要 ( 186 )   HTML( )    PDF (1138KB) ( 183 )  
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旨在利用Label-free技术对天山马鹿的鹿角与鹿骨蛋白组分进行比较分析。以脱盘后130 d的马鹿鹿角和鹿骨为研究对象,利用Label-free蛋白质组学技术和生物信息学方法解析比较鹿角与鹿骨的蛋白质组分。结果共成功鉴定1 138种蛋白质,其中鹿骨蛋白934种、鹿角蛋白835种。通过对成功鉴定到的蛋白质进行功能注释发现,鹿骨蛋白特异富集到了低密度脂蛋白受体代谢、黑质体发育、血管再生、细胞凋亡信号通路调节等过程;而鹿角特有蛋白富集到了肽类激素加工过程、活化T细胞增殖调节等生物学过程,其中肽类激素加工过程主要蛋白有CPE、CPN1、ECE1,活化T细胞增殖调节蛋白主要有IGF2、PRKAR1A、PYCARD。利用SPSS软件筛选鹿角与鹿骨显著差异表达蛋白(差异倍数>2,P<0.05),共筛选出差异蛋白质335种,其中75种蛋白在鹿骨中表达上调,260种蛋白在鹿角中表达上调,其中cathelicidin 1与cathelicidin 5在鹿角中为高表达,而cathelicidin 6在鹿骨中高表达。该试验结果弥补了鹿角与鹿骨蛋白质组分研究的空白,为进一步研究鹿角与鹿骨的有效成分奠定基础。

SSPOS:一个用于模拟、预测和优化社会性遗传效应的软件工具
王凯, 吴平先, 杨强, 唐国庆
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2293-2300.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.009
摘要 ( 213 )   HTML( )    PDF (3470KB) ( 159 )  
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旨在开发一款软件工具来研究畜禽经济性状的社会性遗传效应。利用QT、Fortran、R等语言根据前人研究的社会性遗传效应选择理论和课题组自主研发的优化选择方法,开发社会性遗传效应模拟、预测和优化系统(SSPOS),一款专门综合分析家畜经济性状社会性遗传效应,并且图形化展示结果的软件工具。结果,通过SSPOS软件我们能有效模拟不同情形下社会性遗传效应选择效果,对实际性状数据的社会性遗传效应进行快速预测,并给出目标性状社会性遗传效应最优选择决策。SSPOS能够快速分析家畜经济性状的社会性遗传效应,是研究畜禽社会行为互作的有效工具。

生物技术与繁殖
基于转录组数据的蒙古牛皮肤组织抗寒相关信号通路及候选基因的筛选
齐昱, 邢燕平, 潘静, 凌宇, 曹宇, 周欢敏
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2301-2313.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.010
摘要 ( 218 )   HTML( )    PDF (1345KB) ( 294 )  
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本研究旨在通过对冬夏两季蒙古牛皮肤组织进行转录组测序和生物信息学分析,找到与蒙古牛抗寒性状相关的信号通路及候选基因。用Ion ProtonTM Sequencer分别对冬季和夏季成年蒙古牛的皮肤组织进行转录组测序,随后对转录组数据进行处理、与参考基因组比对、差异表达分析、GO和KEGG富集分析以及候选基因筛选,并用Real-time PCR方法对转录组数据进行可靠性检测。结果显示,冬季组和夏季组分别得到86 954 060和69 837 009条reads;冬季组与参考基因组的唯一比对率为73.21%,夏季组为75.55%;冬夏两组共有182个差异表达基因(DEGs),与夏季组相比,其中117个在冬季组中上调,65个在冬季组中下调;Real-time PCR分析显示,转录组测序结果可靠;GO分析结果显示,细胞组分、分子功能、生物学过程分别富集到21、39和224个term;KEGG分析结果显示,差异表达基因(DEGs)显著地富集在脂类代谢、凝血、酪氨酸代谢、类固醇合成和视黄醇代谢相关通路上;共筛选出8个候选基因。综上表明,脂类代谢、凝血、黑色素合成相关通路和基因,以及与毛发发生相关的基因可能在蒙古牛抗寒过程中发挥重要作用。

过表达Gata6诱导分离猪胚外内胚层干细胞样细胞
张伟, 张少鹏, 李恩宏, 曹安, 刘志宇, 韩建永, 曹素英
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2314-2322.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.011
摘要 ( 165 )   HTML( )    PDF (8726KB) ( 230 )  
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本研究对Gata6(G6)在猪诱导多能性干细胞(iPS细胞)以及胚外内胚层干细胞(XEN细胞)样细胞分离中的作用进行深入解析。从农大香猪的胎儿组织提取mRNAs,反转录为cDNAs,以此为模板克隆所需基因,构建逆转录病毒质粒pMXs-pOct4、pMXs-pSox2、pMXs-pKlf4、pMXs-pMyc、pMXs-pGata6、pMXs-pLin28、pMXs-pTbx3以及pMXs-pNanog,运用不同的基因组合感染猪胎儿成纤维细胞(PEF)。结果表明,Gata6与Oct4、Sox2、Klf4和mMyc(简称G6OSKM)共转染可以提高早期重编程效率,Gata6代替Oct4,与Sox2、Klf4和mMyc(简称G6SKM)可以诱导猪胎儿成纤维细胞为iPS(Induced pluripotent stem)细胞,但与OSKM(Oct4、Sox2、Klf4和mMyc)组相比,重编程效率下降。Gata6的过表达使获得的猪iPS细胞在重编程后期发生了分化,形态类似XEN细胞,这些细胞在小鼠胚外内胚层干细胞培养液培养可以维持XEN细胞的形态,表达胚外内胚层干细胞的标记基因,如Gata4、Gata6和Sox17。OSKM 4因子获得的猪iPS细胞过表达Gata6后,也可以产生胚外内胚层干细胞样细胞。综上表明,过表达Gata6可以进行猪胚外内胚层干细胞样细胞的分离,为从正常胚胎对猪XEN细胞的分离与建系,以及猪早期胚胎调控机制的解析提供理论依据。

营养与饲料
氨基酸平衡低蛋白质日粮对育肥猪肠道黏膜抗菌肽与微生物区系的影响
王瑶, 孙志洪, 许庆庆, 刘金艳, 李金龙, 唐志如
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2323-2336.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.012
摘要 ( 221 )   HTML( )    PDF (1577KB) ( 337 )  
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旨在研究氨基酸平衡低蛋白质日粮对育肥猪肠道抗菌肽与微生物区系的影响。将20头(60±2.5)kg的育肥猪(杜×长×大)随机分为4个处理:14.0% CP日粮(14.0% CP),添加Glu、Lys、Met、Thr和Trp的12.5% CP日粮(12.5% CP),添加Glu、Lys、Met、Thr和Trp的11.0% CP日粮(11.0% CP),添加Glu、Lys、Met、Thr、Trp和BCAA(Val、Ile、Leu)的11.0% CP日粮(11.0% CP+BCAA)。每个处理5个重复,每个重复1头猪。试验分为5 d预试期和30 d正试期。结果表明:(1)尿液尿素氮和尿酸含量随日粮蛋白质水平降低而显著降低(P<0.05);(2)低蛋白质水平日粮显著降低空肠黏膜、回肠黏膜β-defensin-2水平和ANG1、ANG4 mRNA表达水平(P<0.05);(3)不同蛋白质水平日粮对部分回肠、直肠食糜微生物氨基酸组成有显著影响(P<0.05);(4)与14.0% CP组相比,12.5% CP组Observed species显著提高(P<0.05),11.0% CP组Shannon、PD显著降低(P<0.05),11.0% CP+BCAA组Shannon显著降低(P<0.05)。4组之间拟杆菌门、厚壁菌门的相对丰度差异不显著(P>0.05)。与14.0% CP组相比,12.5% CP组和11.0% CP组酸杆菌门、芽单胞菌门相对丰度显著降低(P<0.05),11.0% CP+BCAA组芽单胞菌门相对丰度显著降低(P<0.05)。14.0% CP组变形菌门相对丰度显著高于12.5% CP组和11.0% CP+BCAA组(P<0.05),与11.0% CP组差异不显著(P>0.05),14.0% CP组弯曲菌科相对丰度显著高于其他组(P<0.05)。14.0% CP组粪肠球菌属、狭义梭菌属的相对丰度显著高于其他组(P<0.05),11.0% CP组和11.0% CP+BCAA组毛螺菌属FCS020的相对丰度显著高于12.5% CP组和14.0% CP组(P<0.05)。低蛋白质水平氨基酸平衡日粮能提高氮的利用率,影响肠道微生物区系组成,在低蛋白质日粮中添加BCAA有助于增加氨基酸的平衡性、维持肠道免疫机能。

不同淀粉类型日粮对育肥猪消化代谢的影响
谢晨, 李艳娇, 李蛟龙, 张林, 高峰, 周光宏
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2337-2346.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.013
摘要 ( 274 )   HTML( )    PDF (1428KB) ( 337 )  
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旨在探讨不同淀粉类型日粮对育肥猪肠道消化吸收、血清生化指标和激素水平的影响。将90头((68±2.0)kg)阉公猪随机分配到3种日粮处理,每个处理5个重复,每个重复6头猪。采用纯的蜡质玉米淀粉(WMS)、非蜡质玉米淀粉(NMS)和豌豆淀粉(PS)作为淀粉来源来配合3种试验日粮,日粮的直链淀粉/支链淀粉比例分别为0.07、0.19和0.28。饲养28 d后,每个重复选择2头猪(体重接近于每个重复的平均体重)称重,屠宰,取空肠黏膜和血液样品进行指标测定。结果表明:1)不同淀粉类型日粮对育肥猪空肠黏膜消化酶活性无显著影响(P>0.05)。2)与WMS日粮相比,PS日粮显著下调感受甜味的味觉受体家族1的成员2和成员3(T1R2/T1R3)的mRNA表达水平(P<0.05),而显著上调了可溶性载体家族1成员5(SLC1A5)的mRNA表达水平(P<0.05);NMS日粮显著上调了可溶性载体家族7成员7(SLC7A7)的mRNA表达水平(P<0.05);PS日粮和NMS日粮显著下调了钠/葡萄糖协同转运蛋白1(SGLT1)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的mRNA表达水平(P<0.05)。3)在血清生化指标上,不同淀粉类型日粮对血液葡萄糖(Glu)含量并无显著影响(P>0.05);与WMS日粮相比,PS日粮和NMS日粮显著降低了游离脂肪酸(FFA)含量(P<0.05)。4)不同淀粉类型日粮对血清激素水平并无显著影响(P>0.05)。本试验结果揭示,育肥猪饲喂高直支链比例淀粉日粮会下调甜味感受体、葡萄糖转运载体的mRNA表达水平,上调部分氨基酸转运载体mRNA表达水平,从而减弱肠道对葡萄糖的吸收,有利于对氨基酸的吸收。

不同NFC/NDF水平饲粮对犊牛瘤胃发酵参数和微生物区系多样性的影响
李岚捷, 成述儒, 刁其玉, 付彤, 毕研亮, 王安思, 李明, 屠焰
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2347-2357.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.014
摘要 ( 253 )   HTML( )    PDF (1718KB) ( 331 )  
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旨在研究不同非纤维性碳水化合物/中性洗涤纤维(NFC/NDF)水平饲粮对3~6月龄断奶公犊牛瘤胃发酵参数和微生物多样性的影响。选取2~3月龄健康、平均体重为(94.38±0.25)kg的断奶公犊牛30头,随机分为2组,每组15头。分别饲喂粗蛋白质水平相近,NFC/NDF分别为1.35(A组)和0.80(D组)的2种全混合饲粮。试验期105 d,其中预试期15 d,正试期90 d。试验开始后,每组挑选6头体重相近、健康的犊牛,分别在120、150和180日龄晨饲后2 h口腔采集瘤胃液,测定其pH、挥发性脂肪酸、氨态氮浓度和微生物多样性。结果表明:1)饲喂不同NFC/NDF水平饲粮对犊牛瘤胃液pH和总挥发性脂肪酸浓度无显著影响(P>0.05);2)NH3-N和乙酸浓度及乙/丙比A组显著低于D组(P<0.05),而丙酸浓度则A组显著高于D组(P<0.05);3)A组瘤胃微生物多样性指数皆显著低于D组(P<0.05);4)门水平上,拟杆菌门占序列总数的比例A组显著高于D组(P<0.05),属水平上Christensenellaceae_R-7和Prevotellaceae_UCG-003 所占比例D组显著高于A组(P<0.05);5)随着日龄的增加,犊牛瘤胃液细菌多样性指数除Shannon指数外,其他指标皆组间差异显著(P<0.05),微生物组成无显著变化(P>0.05)。综上所述,饲喂不同NFC/NDF水平饲粮,显著影响了断奶犊牛瘤胃中微生物的种类和丰富度,影响属水平上微生物的组成,继而对乙酸和丙酸产量产生影响。

预防兽医
经密码子优化的猪Ficolin α在昆虫细胞的表达及其体外抗病毒作用初步分析
李兰, 乔绪稳, 张元鹏, 陈瑾, 郑其升, 侯继波
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2358-2364.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.015
摘要 ( 207 )   HTML( )    PDF (4085KB) ( 256 )  
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利用Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统表达具有天然构象的猪Ficolin α。首先构建重组穿梭质粒rBacmid-Ficolin α,转染sf9细胞获得重组杆状病毒rBV-Ficolin α;通过Image J软件对优化表达的Western blot图片进行灰度分析确定较佳表达条件;纯化目的蛋白质后,进一步评价其体外抗病毒活性。Western blot结果显示以7.5 MOI接种量感染的sf9细胞在96 h时获得了较高的表达,同时获得的重组猪Ficolin α具有抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)活性。猪Ficolin α在sf9昆虫细胞中获得成功表达,且具有良好的抗PRRSV活性。本研究可以为猪Ficolin α的抗病毒活性及作用机制研究提供物质基础。

不同猪支原体肺炎活疫苗菌株P46和P97基因序列差异性分析
武昱孜, 邢宪平, 韦艳娜, 熊祺琰, 冯志新, 邵国青
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2365-2373.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.016
摘要 ( 266 )   HTML( )    PDF (1797KB) ( 220 )  
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对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析软件对测序结果和国际标准株J株、232株、7448株、7422株一起进行比对,分析3种疫苗菌株和4个标准株之间核苷酸及氨基酸差异。结果发现,疫苗株Z株、RM48株、168株的P46基因序列相似性为100%,与J株、232株相似性为99.1%,与7422株、7448株相似性为98.9%。疫苗株RM48株和Z株的P97R1R2基因序列相似性为100%;而与疫苗株168株相似性为97.5%;三个疫苗株与J株、232株、7448株、7422株的P97R1R2基因相似性仅为90.1%~93.6%,差异主要发生在R1区重复序列的次数上。本研究为临床猪支原体肺炎活疫苗菌株的检测及不同菌株之间的差异鉴定研究奠定了基础。

多头带绦虫dUTPase基因的原核表达、组织定位及酶学活性分析
黄兴, 徐璟, 王宇, 杨应东, 万洁, 郭承, 古小彬, 谢跃, 杨光友
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2374-2382.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.017
摘要 ( 197 )   HTML( )    PDF (3244KB) ( 202 )  
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探讨多头带绦虫脱氧尿苷三磷酸酶(Tm-dUTPase)的基因特征,并初步分析Tm-dUTPase的酶学活性。通过原核表达,得到重组Tm-dUTPase蛋白,并对其进行Western blot分析、免疫荧光定位及酶学活性分析。序列分析结果显示,Tm-dUTPase基因ORF框为447 bp,编码148个氨基酸,预测的蛋白质分子大小为16.39 ku,等电点为6.263;与猪囊尾蚴和豆状囊尾蚴dUTPase基因的氨基酸序列相似性分别为97%和91%。原核表达的Tm-dUTPase为可溶性蛋白,纯化后的蛋白质质量浓度为0.907 mg·mL-1,Western blot分析显示,该蛋白质能够被山羊脑多头蚴阳性血清所识别,具有较强的反应原性。免疫荧光定位显示Tm-dUTPase主要分布于多头带绦虫成虫的体内实质区,同时广泛分布于多头带绦虫幼虫(脑多头蚴)的头节和包囊囊壁外层。酶学活性试验测得重组Tm-dUTPase的比活力为986.29 U·mg-1,EDTA能够抑制Tm-dUTPase活性,而金属离子Mg2+、Zn2+、Cu2+能够增强Tm-dUTPase活性。上述结果为进一步研究Tm-dUTPase基因的生物学功能奠定了基础。

大熊猫源酵母菌的分离鉴定
马晓平, 向奇, 王承东, 曹三杰, 凌珊珊, 古玉
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2383-2391.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.018
摘要 ( 179 )   HTML( )    PDF (3275KB) ( 219 )  
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旨在调查大熊猫体表酵母菌种属及其对小鼠的致病性。通过传统分离培养、形态学观察,并利用真菌ITS序列通用引物ITS1、ITS4对分离株进行PCR扩增和系统发育学分析,从而鉴定其种属。利用丹麦Rosco纸片扩散法,用两性霉素B、制霉菌素、酮康唑、氟康唑、伊曲康唑对12种分离株进行药敏试验和耐药性分析,同时进行动物致病性试验。结果本次共在37个熊猫被毛样本中分离到45株酵母菌,分属于3个属,12个种。酵母分离菌分别为毛孢子菌属(Trichosporon)40株,隐球菌属(Cryptococcus)4株,假丝酵母菌属(Candida)1株,分别鉴定为皮肤毛孢子菌(Trichosporon cutaneum)、串珠毛孢子菌(Trichosporon moniliiforme)、指间毛癣菌(Trichosporon interdigitale)、秋吉台毛孢子菌(Trichosporon akiyoshidainum)、星形毛孢子菌(Trichosporon asteroids)、芸苔毛孢子菌(Trichosporon brassicae)、辜氏毛孢子菌(Trichosporon guehoae)、耶氏毛孢子菌(Trichosporon jirovecii)、蒙得维的亚毛孢子菌(Trichosporon montevideense)、毛孢子菌(Trichosporon sp.)、链状假丝酵母菌(Candida catenulate)和长莓隐球酵母(Cryptococcus fragicola),共12种酵母菌。动物致病性试验结果表明:皮肤毛孢子菌、指间毛癣菌、星形毛孢子菌和长莓隐球菌对小鼠致病,其余对小鼠条件致病。多数菌种对5种抗真菌药物敏感,其中长莓隐球酵母对酮康唑耐药;链状假丝酵母菌、指间毛癣菌对两性霉素B耐药;链状假丝酵母菌、耶氏毛孢子菌对伊曲康唑耐药;毛孢子菌(Trichosporon sp.)对氟康唑耐药;皮肤毛孢子菌、指间毛癣菌、辜氏毛孢子菌和链状假丝酵母菌对制霉菌素耐药。大熊猫体表酵母菌种类丰富,各种属对常用抗真菌药物敏感性存在差异。本研究丰富了对大熊猫源酵母菌种群的认识,为大熊猫酵母菌病的诊治提供参考。

噬菌体Bp7穿孔素holin的克隆、表达及其活性分析
齐心, 陈培培, 邹玲, 刘文华, 任慧英, 张灿
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2392-2398.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.019
摘要 ( 174 )   HTML( )    PDF (4264KB) ( 250 )  
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为了研究噬菌体Bp7穿孔素holin的特征及其对细菌的抑制作用,根据噬菌体Bp7的基因序列,设计引物PCR扩增穿孔素holin基因,并对其序列进行比对和分析。构建holin原核重组表达质粒pCold-holin,在大肠杆菌BL21中诱导表达,摸索最佳表达条件。亲和层析法纯化蛋白质,并对其抑菌活性进行测定。结果表明,噬菌体Bp7的holin蛋白含有一个跨膜区,属于Phage-holin-T家族;在E.coli BL21表达的重组holin蛋白以可溶性形式存在。表达菌E.coli BL21浊度测定试验结果表明holin蛋白的表达在4 h内能够显著抑制表达菌E.coli BL21的增殖,活菌数减少,菌体出现凝集现象。研究结果提示噬菌体Bp7的holin蛋白具有抑菌活性,这将为进一步研究穿孔素的抑菌机制奠定基础。

基础兽医
Ghrelin通过弓状核区域α型雌二醇受体神经元介导雌性小鼠采食调控
沈向华, 潘登, 范奎奎, 李强, 李婷, 杜晨光
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2399-2406.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.020
摘要 ( 166 )   HTML( )    PDF (15850KB) ( 109 )  
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Ghrelin作为一种具有特殊功能的能量调控因子,在能量代谢平衡以及生殖调控研究中被广泛关注,然而其在小鼠性周期变化过程中发挥调控的机制尚不明确。本研究通过腹腔注射ghrelin研究其对小鼠性周期不同阶段采食量及血清中雌二醇浓度的影响,并运用免疫荧光技术鉴定了ghrelin与弓状核(arcuate nucleus,ARC)区域分布的α型雌二醇受体(estrogen receptor α,ERα)神经元之间的共表达情况。结果表明,ghrelin(50 μg·kg-1)注射后的2 h内可显著促进小鼠发情前期采食量(P<0.05);ghrelin可极显著抑制雌激素的分泌(P<0.01),其他阶段未见显著性差异。同时,ghrelin显著增强小鼠各个性周期中ARC区域的神经元活动(P<0.05或P<0.01),均能直接作用于ARC区域ERα神经元,且在发情前期共表达率最高。因此,我们推论小鼠发情前期,腹腔注射ghrelin可直接作用于下丘脑区域的ERα神经元调控血清中雌二醇浓度,并最终介导雌性小鼠采食。

不同年龄牦牛肾的组织学特征
王婷, 崔燕, 何俊峰, 刘鹏刚, 张倩, 杨雪
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2407-2413.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.021
摘要 ( 280 )   HTML( )    PDF (8156KB) ( 214 )  
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旨在探究牦牛肾的组织学特征及增龄性变化。选取新生(1~7日龄)、成年(3~6岁)及老年(7~10岁)牦牛肾为研究对象,各5头份,采用组织学方法对不同年龄牦牛肾的组织结构进行观察,通过图像分析软件分析并测量肾单位的相关数据。组织学观察显示牦牛肾包含表面的被膜和内部的实质。肾小体由肾小球和肾小囊构成,肾小囊壁层富含胶原纤维,肾小体基膜呈PAS阳性;肾小管包括近端小管和远端小管,其小管外围富含胶原纤维,上皮基膜呈PAS阳性。测量结果表明,单位视野(2.3×106 μm2)内肾小球数随年龄增长而减少;肾小球内细胞数和肾小球细胞核大小随年龄增长而增加;不同的是,肾小球和肾小体的最大切面面积,成年达峰值,老年次之,新生最低。另外,随年龄增长,单位视野(2.3×104 μm2)内肾皮质与髓质肾小管上皮细胞数,近端小管上皮细胞核的大小,远端小管上皮细胞核的大小分别与单位视野内肾小球个数、肾小球内细胞数和肾小球细胞核的大小、肾小球和肾小体的最大切面面积变化趋势一致。结果表明,牦牛肾的组织结构随年龄的增长出现差异性变化,推测这种变化可能与肾小球硬化、实质性细胞减少有关,具体机制还有待进一步研究。

热应激致Hsc70出入核与细胞凋亡的关系
陈洪博, 段滇宁, 鲍恩东
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2414-2420.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.022
摘要 ( 208 )   HTML( )    PDF (2153KB) ( 258 )  
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旨在探讨热应激对H9c2心肌细胞构成型HSP70(constitutive or cognate HSPs,Hsc70)出入核及细胞凋亡的影响。以42℃作为热应激模型温度,通过转染Hsc70 siRNA抑制Hsc70表达,Western blot检测细胞质和细胞核内Hsc70表达,ELISA检测细胞培养液LDH浓度,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果表明,正常H9c2心肌细胞质Hsc70表达量较高,细胞核中表达量很低,细胞质和细胞核Hsp72表达量非常低。热应激后细胞质Hsc70表达量无显著差异,而细胞核Hsc70热应激30和100 min后极显著升高(P<0.01),热应激240 min后开始降低;细胞质和细胞核Hsp72热应激后显著升高(P<0.05或P<0.01)。Hsc70抑制表达后,细胞质Hsc70水平显著降低,热应激后Hsc70入核明显减少,但仍然有入核现象;Hsc70抑制表达对细胞质和细胞核Hsp72表达无显著影响。与热应激组相比,热应激+Hsc70 siRNA组LDH表达量呈升高趋势,热应激100 min两组出现显著差异(P<0.05);Hsc70抑制表达后H9c2细胞在热应激后更容易发生凋亡,而且在热应激30和100 min内,两组之间存在显著差异(P<0.05)。结果提示,热应激可诱使Hsc70出入细胞核,Hsc70抑制表达后热应激诱导Hsc70入核显著降低,细胞损伤加重,细胞凋亡升高。

临床兽医
福美双诱导的肉鸡胫骨软骨发育不良软骨细胞凋亡
张宁, 李欣, 宁官保, 张鼎, Ali Raza Jahejo, 李宏全, 马海利, 郝卫芳, 高文伟, 赵宇军, 高诗敏, 李桂兰, 李建慧, 闫芳, 高荣琨, 田文霞
畜牧兽医学报, 2017, 48(12):  2421-2428.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.12.023
摘要 ( 241 )   HTML( )    PDF (13862KB) ( 437 )  
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为研究肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)软骨细胞的凋亡分布及凋亡相关基因的表达水平,将80羽1日龄健康AA肉鸡基础日粮饲养1周后,随机分为对照组和处理组,处理组饲喂添加100 mg·kg-1福美双的日粮,采用HE染色和TUNEL法分别对肉鸡胫骨生长板软骨细胞的形态学和凋亡情况进行观察,同时采用Real-time PCR方法和免疫组化技术分别对软骨细胞中凋亡相关基因的mRNA转录水平及蛋白质表达水平进行检测。结果显示,福美双诱发TD后第1、2、4和6天,肉鸡生长板软骨栓形成逐渐增大,异常软骨细胞增加,TD病变区软骨细胞,尤其是肥大区软骨细胞凋亡程度明显增加。Real-time PCR检测结果显示,与对照组比较,TD生长板促凋亡基因Bax在试验第1、2、4和6天表达量极显著上调(P<0.01);Caspase-3在第1、2和4天表达量极显著增加(P<0.01);抗凋亡基因BAG-1表达下调,在试验第1和2天差异极显著(P<0.01)。免疫组化结果显示,第1和4天处理组Bax的蛋白表达量明显高于对照组。本研究提示肉鸡TD生长板软骨细胞凋亡与促凋亡基因的表达增强和抗凋亡基因的表达下降有关。