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当期目录

2017年 第48卷 第4期 刊出日期:2017-04-23
中文目次
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  0-0.  doi:
摘要 ( 108 )   HTML( )    PDF (261KB) ( 165 )  
参考文献 | 相关文章 | 多维度评价
英文目次
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  0-0.  doi:
摘要 ( 24 )   HTML( )    PDF (162KB) ( 154 )  
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封面封底
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  0-0.  doi:
摘要 ( 37 )   HTML( )    PDF (446KB) ( 206 )  
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2015年百种中国杰出学术期刊
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  0-0.  doi:
摘要 ( 45 )   HTML( )    PDF (319KB) ( 161 )  
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中国精品科技期刊证书
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  0-0.  doi:
摘要 ( 32 )   HTML( )    PDF (330KB) ( 169 )  
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遗传育种
鲁莱黑猪肌内脂肪含量、脂肪酸组成及其相关性状分析
王继英, 王彦平, 徐云华, 王诚, 蔺海朝, 呼红梅, 武英, 郭建凤
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  585-594.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.001
摘要 ( 276 )   HTML( )    PDF (1148KB) ( 379 )  
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本研究旨在对中国地方培育猪种鲁莱黑猪的肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)含量、脂肪酸组成及其相关性状进行研究,为全面了解鲁莱黑猪的种质特性提供基础数据。本研究测定了487头鲁莱黑猪胴体背膘厚、背最长肌游离水分、肌内脂肪含量和脂肪酸成分,分析了性别和体重对各指标的影响及各性状间的相关性。结果表明,鲁莱黑猪具有很强的肌内脂肪沉积能力,IMF含量平均高达5.25%,但群体内变异性较大(变异系数高达66.04%),需要进一步加强品种选育,提高群体的整齐性;除花生烯酸外,性别对其他被测性状均无显著影响(P>0.05);屠宰体重对背膘厚有极显著影响(P<0.01),对IMF含量有显著影响(P<0.05),对水分及脂肪酸组成无显著影响(P>0.05);各性状间,IMF与游离水分相关程度最高(相关系数为-0.86),二者间回归方程具有高的校正决定系数平方(0.929 4),可以作为利用肌肉中游离水分估测肌内脂肪含量的模型。另外,不同部位背膘厚之间,IMF含量与部分脂肪酸成分之间,各脂肪酸成分之间亦存在高度相关。本研究结果加深了对鲁莱黑猪肉质特性认识,为今后肉质选育工作提供数据支持。

奶牛分子系谱构建或亲权鉴定的微卫星标记筛选
殷彬, 岳书俭, 俞英, 曹巧巧, 王中华, 师科荣
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  595-604.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.002
摘要 ( 296 )   HTML( )    PDF (1882KB) ( 361 )  
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旨在利用较少的经过优化的遗传标记组合达到快速高效的亲缘鉴定,最终可有效应用于奶牛群体亲子鉴定与系谱构建。本研究从国际动物遗传学会(ISAG)数据库中初步选择了18个多态性较高的微卫星位点,经PCR优化验证获得可高效扩增的8个位点,并检测其在300头中国荷斯坦牛群体中的多态性分布。这些微卫星位点的亲子鉴定效力检测结果表明,8个标记平均等位基因数为14.63,平均多态性信息含量(PIC)为0.747,群体平均观察杂合度(Ho)为0.718,平均期望杂合度(He)为0.773。3种不同情形下进行亲子鉴定时8个位点的结合排除概率(CPE)均≥0.990。8对父子牛亲权鉴定结果表明,利用该8个标记可以识别并剔除系谱中的错误记录。结合排除概率的分析结果表明,当微卫星位点数增加至4个(TGLA227、TGLA122、BMC1207、BM103)时,3种不同情形下的CPE均≥0.949,可以满足个别案例牛亲子鉴定的要求。群体分子系谱构建的结果表明,当微卫星位点数大于或等于6个时,群体内近交系数和总群体近交系数均明显升高。因此,在生产实践中推荐使用TGLA227、TGLA122、BMC1207、BM103、INRA037、INRA134位点进行小规模群体(<200)的分子系谱构建或亲权鉴定。

麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因的SNPs检测及其与体尺性状的关联分析
海汀, 柴志欣, 钟金城
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  605-617.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.003
摘要 ( 240 )   HTML( )    PDF (2972KB) ( 280 )  
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旨在探讨生长激素(Growth hormone,GH)、生长激素受体(Growth hormone receptor,GHR)、生长激素促分泌素受体(Growth hormone secretagogue receptor,GHSR)基因在麦洼牦牛中的遗传多样性,揭示不同基因型与其生长性状的关联性,同时为候选基因在牦牛中的表达调控提供理论依据,寻找可用于遗传育种辅助选择的分子标记。本试验采用DNA池技术,结合PCR-RFLP和直接测序法研究麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因的遗传多态性,分析候选基因多态位点与体高、体斜长、胸围、管围和体重等生长性状的关联性。结果表明:1)麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因均存在多态性,其中GH基因存在A757G和T949C 2个SNPs位点,GHR基因发现T2416C、T3490C和A7500G 3个突变位点;GHSR基因存在T1387C和T3006C突变;2)适合性检验表明,GHR基因A7500G位点在粉嘴类群,及GHSR基因T3006C位点在纯黑类群中偏离Hardy-Weinberg平衡状态,其他位点均符合Hardy-Weinberg平衡;3)差异显著性检验表明,GHR基因T2416C、T3490C和A7500G位点与麦洼牦牛管围极显著相关(P<0.01),GHSR基因T1387C位点与其体重显著相关(P<0.05)。麦洼牦牛GH、GHR、GHSR基因均存在遗传多态性,推断GHR基因T2416C、T3490C和A7500G位点、GHSR基因T1387C位点可能是影响麦洼牦牛管围、体重性状的主基因或与主基因相连锁的基因座,可作为辅助选择的遗传标记。

基于蛋白质组学技术的鹿茸不同部位差异蛋白筛选
刘华淼, 鞠妍, 张然然, 邢秀梅
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  618-626.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.004
摘要 ( 199 )   HTML( )    PDF (3970KB) ( 458 )  
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旨在了解梅花鹿鹿茸不同部位蛋白表达差异,本研究以腊片部位、血片部位和骨片部位的梅花鹿鹿茸组织为试验材料,运用双向电泳(2-DE)和MALDI-TOF-TOF串联质谱技术对不同部位梅花鹿鹿茸差异表达蛋白质进行鉴定,并对差异蛋白进行生物信息学分析。结果表明,成功筛选出37个差异表达蛋白,主要涉及多细胞生物体发生、解毒、细胞成分组织或生物发生、细胞聚集、定位、对刺激的反应、生物黏附、发育、单一生物体发生、免疫系统等生物学过程。其中鹿茸腊片、血片、骨片组织中分别有18、5与14个蛋白质表达上调。对差异表达蛋白作进一步分析发现,转录延伸因子(EFB1)、视黄酸结合蛋白(CRABP1)在鹿茸的快速生长中起重要调控作用,而载脂蛋白A1(APOA1)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、转甲状腺素蛋白(TTR)在鹿茸的快速骨化中起重要的调控作用,对鹿茸快速生长与骨化机制的进一步研究具有重要意义。

生物技术与繁殖
营养诱导舍饲哈萨克羊非繁殖季节卵巢组织中miRNAs差异表达分析
雷小萍, 林杉, 于要升, 梁慧慧, 赵宗胜
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  627-636.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.005
摘要 ( 188 )   HTML( )    PDF (1934KB) ( 263 )  
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旨在利用Solexa测序技术分析、挖掘营养诱导非繁殖季节绵羊发情期和乏情期卵巢组织micro RNAs(miRNA),为进一步研究特定miRNA参与非繁殖季节绵羊发情的分子调控机制提供理论基础。以不同营养水平饲喂的哈萨克绵羊作为研究对象,在非繁殖季节前后分别屠宰已鉴定的3只发情(EN)和乏情(AN)母羊,分别采集卵巢(O)组织,构建两个小片段RNA文库(OEN和OAN),进行高通量测序和生物信息学分析,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的miRNAs在哈萨克羊卵巢中表达水平。结果显示,两文库分别获得8 665 978(发情期)和9 071 102条(乏情期)clean reads,且绝大多数小RNA序列长度为21~23 nt。两文库相比较,发现有9个已知和104个未知miRNAs表达差异显著(P<0.01)。利用qRT-PCR随机选择的6个显著差异表达的miRNAs进行验证,其表达水平和测序分析结果一致。KEGG通路分析表明,这些差异miRNAs的靶基因主要参与了甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,氨基糖和核苷酸糖代谢,精氨酸和鸟氨酸代谢及甘油磷脂代谢等营养调控通路。结合靶基因预测及通路富集分析,推测差异表达的miRNAs是通过营养代谢通路对绵羊的非季节性发情起重要作用。

绵羊NYD-SP27基因在BHK-21细胞中的稳定表达及其特征鉴定
马亚茹, 胡广东, 王红红, 加米拉, 徐锦凤, 陈创夫, 赛务加甫
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  637-644.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.006
摘要 ( 210 )   HTML( )    PDF (3874KB) ( 228 )  
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旨在构建稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞株,对NYD-SP27基因的表达特征进行分析,为进一步研究NYD-SP27基因功能奠定基础。本研究克隆绵羊NYD-SP27基因,并将其插入到真核表达载体pDsRed1-C1中,利用猪捷申病毒2A肽(P2A)将NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白连接以实现共表达,将重组质粒pDsRed-P2A-Flag-NYDSP转染至BHK-21细胞中,经G418筛选获得稳定转基因细胞株,利用RT-PCR、间接免疫荧光(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western blot对NYD-SP27基因的表达进行鉴定。结果表明,NYD-SP27基因稳定整合至宿主细胞基因组;NYD-SP27蛋白能够在BHK-21细胞中正常表达,分子大小约为63 ku;在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中,P2A成功自我剪切。本研究成功构建了绵羊NYD-SP27基因的真核表达载体,建立了稳定表达绵羊NYD-SP27基因的BHK-21细胞系。

稀释和低温保存对鸡精液品质和受精能力的影响
徐松山, 孙研研, 李云雷, 薛夫光, 刘一帆, 许红, 陈继兰
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  645-651.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.007
摘要 ( 219 )   HTML( )    PDF (845KB) ( 299 )  
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本研究旨在探索稀释和低温保存处理对鸡精液品质和受精能力的影响,以优化鸡精液的短期保存条件。试验采集30只北京油鸡精液,混匀后等量分为4组:A组精液不处理作为对照,B组用BPSE稀释液按照1:1比例稀释,C组精液离心后,去除上层精浆,加入与精浆等体积的BPSE稀释液重新混匀,D组在C组处理的基础上再用BPSE稀释液按照1:1比例稀释。每组精液分为两份,一份用于直接输精和精液品质测定,另一份在4℃保存,期间每隔8 h检测一次精液品质,24 h后输精,每组收集种蛋120枚左右,统计受精率和孵化率等指标。结果表明:不同稀释处理后,C和D组精子活力极显著低于A组对照和B组(P<0.01),B组和C组的受精率、入孵蛋的孵化率和受精蛋的孵化率与A组无显著差异,但是D组3项指标均极显著低于A组对照(P<0.01)。随着4℃保存时间的延长,4组精子活力均极显著降低(P<0.01),其中C和D组降低的幅度显著低于A组对照和B组。精子畸形率随着低温保存时间的延长而显著增加(P<0.05),且畸形主要表现为头部肿胀,颈部弯曲和尾部断裂。与直接输精相比,低温保存24 h后,A、B和C组的受精率和孵化率都显著降低(P<0.05),但是D组低温保存前后的受精率和孵化率差异均不显著(P>0.05),分别可以达到71%和82%。综上表明,新鲜精液可以进行1:1稀释后输精,在不影响受精率的前提下可以提高公鸡配种能力。在需要短期保存精液后进行输精时,可以将采集的新鲜精液离心去除精浆并进行稀释,保存于4℃,从而降低精子活力的下降幅度,维持受精能力。

小鼠精子透明质酸酶SPAM1在受精过程中的功能研究
周崇, 黄莉, 石德顺, 蒋建荣, 马场忠
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  652-659.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.008
摘要 ( 130 )   HTML( )    PDF (2523KB) ( 238 )  
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旨在研究小鼠精子透明质酸酶SPAM1(Sperm adhesion molecule 1)对受精过程中精子/卵丘互作的影响,并初步探讨其可能的作用机制。本研究抽提小鼠尾尖基因组,利用PCR法检测小鼠Spam基因型;筛选的野生型(WT)和Spam1敲除(KO)小鼠,提取附睾尾部精子蛋白进行Western blot和酶活性检测;经TYH培养液2 h获能后,分别对精子的运动性、穿透和分散卵丘细胞能力及体外受精(IVF)进行统计分析。结果表明,KO小鼠精子中未检测到SPAM1蛋白,透明质酸酶活性也极显著低于WT小鼠(P<0.01);而获能后精子运动性,在KO和WT小鼠之间差异不显著(P>0.05);与WT相比,KO小鼠精子缺失Spam1后,极显著地影响卵丘细胞层基质中精子顶体反应的发生比率(P<0.01),导致精子穿透卵丘细胞层的能力极显著降低(P<0.01),仅有少数精子能够到达卵子透明带表面,大量精子极易黏附于卵丘细胞层表面或外部边缘(P<0.01);此外,KO小鼠精子IVF 2 h的卵丘细胞分散和受精率均呈现显著延迟(P<0.05)。综上表明,小鼠精子透明质酸酶SPAM1与顶体反应相关联并影响精子/卵丘互作。揭示SPAM1在穿卵过程中除了具有降解透明质酸的作用外,还存在其他的非酶活性功能。

营养与饲料
低蛋白氨基酸平衡日粮添加半胱胺对生长猪肉质和相关基因表达的影响
朱玉萍, 周平, 李蛟龙, 张林, 高峰, 周光宏
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  660-668.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.009
摘要 ( 283 )   HTML( )    PDF (874KB) ( 329 )  
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旨在研究低蛋白氨基酸平衡日粮添加半胱胺对生长猪肉质和相关基因表达的影响。试验采用2×2因子试验设计,选取(42.18±0.70)kg左右的杜×长×梅阉公猪120头,随机分为4处理,每个处理5个重复,每个重复6头猪,日粮蛋白水平为16%和12%,半胱胺添加水平为0和100 mg·kg-1。试验期为31 d。结果表明,低蛋白氨基酸平衡日粮显著降低了生长猪背最长肌的剪切力值(P<0.05),显著增加了肌内脂肪的含量(P<0.05),上调了固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰辅酶A脱氢酶(SCD)、μ-钙蛋白酶的mRNA表达量(P<0.05),下调了激素敏感脂酶(HSL)、肉碱脂酰转移酶1(CPT-1)、钙蛋白酶抑制蛋白的mRNA表达量(P<0.05);半胱胺的添加下调了钙蛋白酶抑制蛋白的mRNA表达量(P<0.05)。日粮蛋白水平与半胱胺添加之间不存在交互作用(P>0.05)。结果提示,低蛋白氨基酸平衡日粮可能通过上调脂质合成相关基因的表达,下调脂质降解相关基因的表达来增加肌内脂肪含量,进而改善生长猪背最长肌嫩度,半胱胺的添加对生长猪肉品质未见明显影响。

舍内不同湿度对肉鸡体热调节和血液指标的影响
孙永波, 栾素军, 王亚, 萨仁娜, 张宏福
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  669-677.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.010
摘要 ( 208 )   HTML( )    PDF (1252KB) ( 330 )  
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本试验旨在探讨舍内不同湿度对肉鸡体热调节和血液指标的影响,为禽舍内湿度的合理调控提供数据支持。将270只1日龄健康AA肉公雏随机分成3组,每组设6个重复,每个重复15只鸡。3个处理组分别为正常湿度组(60% RH)、低湿组(30% RH)和高湿组(90% RH)。试验在动物营养学国家重点实验室人工气候舱内进行,试验期为42 d。在肉鸡21和42日龄时,分别测定直肠温度、呼吸频率、血液指标和免疫器官指数的变化。结果表明:1)在21日龄时,与正常湿度组相比,低湿组和高湿组肉鸡直肠温度显著升高(P<0.05);低湿组和高湿组呼吸频率有升高的趋势(P<0.1)。在42日龄时,低湿组肉鸡直肠温度显著降低(P<0.05)。2)在肉鸡21日龄时,与正常湿度组相比,低湿组和高湿组显著降低血液白细胞数和淋巴细胞数(P<0.05),低湿组血小板数目显著高于高湿组(P<0.05)。在肉鸡42日龄时,低湿组和高湿组显著降低血液白细胞数(P<0.05)。3)在肉鸡21日龄时,与正常湿度组相比,低湿组和高湿组血清尿素氮含量显著升高(P<0.05),高湿组总胆固醇含量显著低于正常湿度组和低湿组(P<0.05);在42日龄时,低湿组和高湿组肉鸡血清总蛋白、尿酸、尿素氮含量高于正常湿度组,而肉鸡血清白蛋白、溶菌酶、总胆固醇和甘油三酯含量低于正常湿度组。4)在21日龄时,低湿组肉鸡脾脏指数显著低于高湿组(P<0.05)。在42日龄时,与正常湿度组相比,低湿组显著降低血清IgA含量(P<0.05),高湿组显著降低血清IgM含量(P<0.05)。由此可见,长期高湿和低湿影响肉鸡的直肠温度和呼吸频率,改变血液白细胞数量、总胆固醇含量和尿素氮含量等生理生化指标,降低免疫功能,不利于肉鸡健康生长。

开食料中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸对断奶羔羊生长性能、氮利用率和血清指标的影响
李雪玲, 张乃锋, 马涛, 陶大勇, 柴建民, 王玉荣, 张帆, 刁其玉
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  678-689.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.011
摘要 ( 249 )   HTML( )    PDF (897KB) ( 378 )  
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本试验旨在利用氨基酸部分扣除法研究开食料中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸对断奶后羔羊生长性能、氮利用率和血清学指标的影响,以期确立氨基酸限制性顺序和比例。选取100只50日龄、平均体重为11.00 kg的健康湖羊断奶公羔羊,随机分成5组,每组4个重复,每个重复5只羊。采用单因素试验设计,对照组(PC)饲喂氨基酸平衡的开食料,其赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸含量分别为1.16%、0.38%、0.58%和0.16%,4个试验组依次在PC组的基础上分别扣除30%赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸(PD-Lys、PD-Met、PD-Thr和PD-Trp组)。预试期为10 d,正试期为60 d。分别于羔羊80~90和110~120日龄进行两期氮平衡试验。结果表明:1)PC-Met组羔羊120日龄体重、日增重和饲料转化率显著低于PC、PD-Thr和PD-Trp组(P<0.05)。2)80~90日龄PD-Lys和PD-Met组尿N排放量显著高于PC组(P<0.05),PD-Met组N沉积量、N沉积率和N表观生物学价值显著低于PC组(P<0.05),110~120日龄PD-Met组N沉积量、N沉积率、N表观消化率和N表观生物学价值显著低于PC组(P<0.05)。3)以最大NR为衡量指标时,80~90和110~120日龄两阶段的限制性氨基酸顺序为:Met > Lys > Thr > Trp和Met > Lys > Trp > Thr。获得最大NR时Lys、Met、Thr和Trp 4种氨基酸模型分别为100:37:45:12和100:41:39:12。4)90日龄PD-Met组葡萄糖显著高于PC组(P<0.05),120日龄PD-Met组总蛋白、球蛋白和胆固醇显著低于PC组(P<0.05)。综上所述,60~120日龄断奶羔羊开食料中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸的适宜比例为100:(37~41):(39~45):12,限制性氨基酸顺序分别为Met > Lys > Thr > Trp(80~90 d)和Met > Lys > Trp > Thr(110~120 d)。

肉牛胃肠道甲烷排放模型估算精度的评估分析
毛宏祥, 高凤仙, 王敏, 蒋载阳, 张秀敏, 龙栋磊, 王荣, 谭支良
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  690-698.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.012
摘要 ( 183 )   HTML( )    PDF (1109KB) ( 272 )  
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本研究旨在评估6个经典的肉牛胃肠道甲烷排放估算模型的预测精度,分析影响模型预测精度的原因。在湖南望城肉牛养殖场选用17头体况良好的湘中黑牛,分两阶段测定了肉牛体重、营养组分采食量及胃肠道甲烷排放量。本研究选择6个经典的肉牛胃肠道甲烷排放估算模型,包括:以干物质采食量(DMI)为核心参数的估算模型1[CH4(MJ·d-1)=1.246×DMI(kg·d-1)+0.996]和模型2[CH4(MJ·d-1)=-2.07+2.636×DMI(kg·d-1)-0.105×DMI2(kg·d-1)];以纤维摄入量为核心参数的估算模型3[CH4(MJ·d-1)=5.58+0.848×NDF(kg·d-1)]和模型4[CH4(MJ·d-1)=3.41+0.520×DMI(kg·d-1)-0.996×ADF(kg·d-1)+1.15×NDF(kg·d-1)];以总能摄入量为核心参数的估算模型5[CH4(MJ·d-1)=0.065×GEI(MJ·d-1)]和模型6[CH4(MJ·d-1)=0.081×GEI(MJ·d-1)-0.024]。利用预测误差均方(Mean squared prediction error,MSPE)和一致性相关系数(Consistent correlation coefficient,CCC)两种分析方法评估6个估算模型预测肉牛胃肠道甲烷排放量的精度以及影响模型估算精度的原因。结果表明,模型5(CCC=0.86)的估测精度最高,模型1(CCC=0.74)和6(CCC=0.79)次之,模型2(CCC=0.66)、3(CCC=0.22)和4(CCC=0.54)的估算精度最低;模型1和2的估算误差主要来自于整体偏差的偏离(分别为48.8%和70.3%);模型3的估算误差主要来自于回归斜率的偏离(47.6%);模型4的偏差主要来自于整体偏差(29.2%)和回归斜率偏离(28.6%)。IPCC(2006)Tier2推荐的以总能GEI为单一变量的模型5是本试验中6个估算公式预测精度最高的模型。

预防兽医
禽波氏菌强毒株感染雏鸡呼吸系统荷菌量及病变规律的研究
杨萍萍, 袁朋, 魏凯, 胡莉萍, 朱瑞良
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  699-705.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.013
摘要 ( 186 )   HTML( )    PDF (19152KB) ( 217 )  
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禽波氏菌为产碱杆菌科波氏杆菌属成员,主要导致咳嗽等呼吸道症状。为探索禽波氏菌经呼吸道的入侵过程及其病变发生发展规律,本试验利用筛选到的强毒株经鼻腔感染SPF雏鸡,在感染后的不同时间检测气管和肺荷菌量的变化,通过扫描电镜观察禽波氏菌在气管的定植及其病变规律,利用间接免疫酶组化研究禽波氏菌在肺中的定植规律,分析肺和支气管的病理组织学变化。结果发现,在感染之初气管中细菌数量较多,而肺中较少,之后气管和肺的荷菌量均呈明显上升趋势。感染后1 d即发现禽波氏菌已经在气管纤毛上定植,且纤毛开始出现脱落;到5 d时气管黏膜表面呈斑驳状,纤毛大面积脱落,甚至出现空洞。肺在感染后2 d检测出细菌定植,主要分布在肺房和呼吸毛细管壁的细胞质中,之后随着感染时间的延长,阳性信号不断增加。肺和支气管的病理变化在5 d时出现,主要表现淤血;至感染后10 d,大量细胞坏死。试验结果表明所筛选禽波氏菌分离株对雏鸡的呼吸道具有很强的亲嗜性,优先定植于气管上皮细胞的纤毛上,并随之在气管、支气管和肺产生一系列的组织病理学变化。

一株裂解性奶牛乳房炎源屎肠球菌噬菌体的分离及其生物学特性分析
张倩, 于会举, 孙耀强, 张湘莉兰, 张培生, 刘鸽, 屈勇刚, 童贻刚, 李岩
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  706-713.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.014
摘要 ( 201 )   HTML( )    PDF (2961KB) ( 268 )  
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从新疆石河子地区奶牛粪样中分离裂解性屎肠球菌噬菌体,对其进行纯化及生物学特性分析,为治疗和控制细菌性感染提供基础。利用双层平板培养法从奶牛粪样中分离、纯化噬菌体,并观察噬菌斑特征,将纯化后的噬菌体浓缩液用磷钨酸负染,通过透射电子显微镜观察其形态特征。对该噬菌体进行全基因组测序和遗传进化分析,用双层平板培养法测定其宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性及pH稳定性。结果如下:分离并纯化出一株裂解性屎肠球菌噬菌体,命名为vB_EfaM_XJ3,其噬菌斑圆形透明、无晕环且边缘整齐,直径1.2~1.5 mm;电镜观察其头部呈廿面体,头长约53.15 nm,尾长约14.42 nm×199.62 nm;核酸类型为dsDNA,基因组全长为157.189 kb,GC含量为50.27%;其基因序列与沙门菌噬菌体SKML-39的相似性高达98%。生物学特性研究显示vB_EfaM_XJ3目前只裂解其宿主菌;最佳感染复数为0.001,潜伏期为15 min,爆发期为175 min,裂解量约为84;能耐受50℃左右高温,在pH 5.0~11.0范围内效价稳定。分离鉴定出一株裂解性肌尾科屎肠球菌噬菌体,对它进行了生物学特性和亲缘性分析,为沙门菌和屎肠球菌抑菌剂的研究与应用奠定了基础。

基于线粒体细胞色素氧化酶b(cytb)全基因序列分析我国部分地区兔痒螨的遗传变异特征
赵习彬, 王保健, 简克灵, 杨光友, 赖为民, 古小彬
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  714-721.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.015
摘要 ( 215 )   HTML( )    PDF (1450KB) ( 239 )  
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为探讨兔痒螨是否会受兔品种、温度带和地域来源的不同而出现遗传变异,采用PCR技术首次对我国6个省份共68个獭兔来源(陕西、河北、河南和湖北)和肉兔来源(山东和四川)痒螨虫株的线粒体细胞色素氧化酶b(cytb)基因全序列进行扩增,经测序后分析遗传变异情况。68条兔痒螨cytb全序列均为1 100 bp,共有96个(8.7%)变异位点和46个单倍型;我国整体种群的单倍型多样性(Hd)和核苷酸多样性(π)分别为0.959 2和0.012 0,具有较高的遗传多样性;我国兔痒螨整体种群的中性检验结果为负值(Tajima's D=-0.444 01,Fu's Fs=-1.454 25),且呈现多峰的错配分布曲线现象,暗示我国兔痒螨可能经历过突增长过程;我国所有种群间存在一定的遗传分化(Fst=0.262 2)、基因流水平较低(Nm=0.7);分子方差(AMOVA)分析表明遗传分化主要发生在种群内;单倍型网络图和NJ树显示我国兔痒螨的聚类与兔品种、温度带和地理来源无关。结果表明,我国6个地区的兔痒螨虫株呈现较高的遗传多样性,具有一定的遗传分化,但未形成以兔品种、温度带和地理分布为格局的遗传结构。

捻转血矛线虫NADH:泛醌氧化还原酶结构域包含蛋白基因的克隆表达及功能分析
吴玲燕, 王玉俭, 温玉玲, 严若峰, 徐立新, 宋小凯, 李祥瑞
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  722-730.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.016
摘要 ( 187 )   HTML( )    PDF (3935KB) ( 254 )  
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选取捻转血矛线虫NADH:泛醌氧化还原酶结构域包含蛋白(NDUDC)基因进行克隆表达,并对其功能进行研究。采用RT-PCR方法对NDUDC基因进行克隆,构建表达载体得到重组蛋白质,Western blot分析蛋白质的抗原特性;采血分离山羊外周血单个核细胞(PBMCs)与重组蛋白质共培养,利用间接免疫荧光试验检验重组蛋白质与细胞的结合情况;以不同质量浓度(0、10、20、40 μg·mL-1)重组蛋白质刺激细胞,测定其对细胞增殖、细胞迁移和NO分泌的影响。结果表明,重组蛋白质能够有效刺激细胞增殖,显著提高细胞迁移能力以及增加NO的分泌。可见NDUDC蛋白具有较强的抗原性,可刺激细胞发挥免疫功能。

刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9对小鼠Ana-1巨噬细胞功能的影响
马群山, 刘欣超, 孙晓妮, 王帅, 徐立新, 宋小凯, 严若峰, 李祥瑞
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  731-739.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.017
摘要 ( 147 )   HTML( )    PDF (7194KB) ( 181 )  
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本试验旨在探究刚地弓形虫钙依赖蛋白激酶9(CDPK9)对小鼠Ana-1巨噬细胞活性及功能的影响。利用激光共聚焦技术验证CDPK9与Ana-1巨噬细胞的结合情况;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度CDPK9处理24 h对Ana-1巨噬细胞增殖活性的影响;利用流式细胞术检测不同浓度CDPK9处理48 h对Ana-1巨噬细胞凋亡及吞噬功能的影响;采用总一氧化氮试剂盒检测不同浓度CDPK9处理48 h对Ana-1巨噬细胞NO分泌量的影响;利用细胞因子ELISA试剂盒检测不同浓度CDPK9处理48 h对Ana-1巨噬细胞TNF-α、TGF-β1、IL-10、IL-1β分泌的影响。结果如下:CDPK9能够与Ana-1巨噬细胞结合。CDPK9对Ana-1巨噬细胞增殖具有抑制作用,较高浓度时抑制作用明显。CDPK9能够显著提高Ana-1巨噬细胞的凋亡比例,同时促进其吞噬能力。CDPK9上调了Ana-1巨噬细胞NO产量。细胞因子IL-1β和TNF-α的表达量上升,而TGF-β1和IL-10的表达量有所下降。CDPK9能够与巨噬细胞结合并通过多种途径影响其活性及免疫功能。

基础兽医
盐霉素对鸡原代心肌细胞的毒性作用及其机制的初步研究
郑亚妮, 高修歌, 刘晓晓, 滕佩, 季辉, 江善祥
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  740-751.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.018
摘要 ( 227 )   HTML( )    PDF (30416KB) ( 279 )  
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初步探讨盐霉素对鸡原代心肌细胞的毒性作用及其毒性机制。采用差速贴壁法结合化学纯化法分离鸡原代心肌细胞,应用免疫荧光法鉴定心肌细胞纯度,给予1、5、10、20、50 μg·mL-1盐霉素处理后,观察心肌细胞形态,采用MTT法测定盐霉素对心肌细胞活性的影响;比色法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放、肌酸激酶(CK)活性;流式细胞术分析盐霉素对心肌细胞凋亡及线粒体膜电位的影响;电子显微镜观察盐霉素对心肌细胞超微结构的影响;荧光显微镜观察盐霉素对心肌细胞氧化应激的影响;比色法测定盐霉素对心肌细胞Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白酶活性的影响;qRT-PCR检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyt-C)、BaxBcl-2 mRNA的转录水平。结果表明:分离所得鸡原代心肌细胞形态良好,纯度大于90%;盐霉素以显著的浓度-时间依赖性方式抑制心肌细胞生长并诱导细胞死亡;盐霉素导致心肌细胞LDH释放极显著增加(P<0.01),细胞内CK酶活性增强,呈浓度依赖性(P<0.01);盐霉素导致心肌细胞凋亡率极显著升高(P<0.01),线粒体膜电位(ΔΨm)明显下降(P<0.01);电子显微镜观察显示盐霉素导致心肌细胞线粒体严重肿胀、空泡化,嵴溶解甚至消失;盐霉素导致心肌细胞内活性氧(ROS)显著升高;细胞质Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白酶活性均极显著升高(P<0.01); qRT-PCR结果表明凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Cyt-C及Bax mRNA转录上调,Bcl-2 mRNA转录下调(P<0.01)。盐霉素可以通过细胞凋亡引起鸡心肌细胞死亡,线粒体途径和死亡受体途径可能共同参与了盐霉素诱导的鸡心肌细胞凋亡。

谷氨酰胺干预断奶仔猪肠道黏膜受损中免疫能力的作用
黄牛, 李欢, 何流琴, 田军权, 崔志杰, 姚康
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  752-760.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.019
摘要 ( 195 )   HTML( )    PDF (862KB) ( 277 )  
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本试验旨在研究日粮中添加谷氨酰胺(Gln)对大肠杆菌型脂多糖(LPS)诱导肠道黏膜损伤后断奶仔猪免疫性能的影响。选取28日龄健康断奶仔猪24头,随机分为3组,每组8个重复。其中,空白对照组和LPS组饲喂常规基础日粮,Gln组饲喂添加1%谷氨酰胺的基础日粮。试验期30 d,于试验期第22、25、28、30天对LPS组和Gln组腹腔注射LPS(按体重以100 μg·kg-1给予),空白对照组腹腔注射等体积的无菌生理盐水。第30天对仔猪进行前腔静脉采血并屠宰采取所需样品,检测血清中免疫球蛋白、相关炎症因子浓度及各肠段中这些炎症因子基因的表达丰度。与空白对照组相比,LPS组和Gln组血清IgM水平显著提高40.00%和62.86%(P<0.05);LPS组血清IL-8含量显著提高7.11%(P<0.05),而Gln组则无明显变化。不论在LPS攻毒前还是攻毒后,日粮添加Gln均可显著提高仔猪血清IL-17含量(P<0.05)。与空白对照组相比,LPS组和Gln组十二指肠中IL-8 mRNA表达水平显著降低了35.06%和44.16%(P<0.05)。对于IL-12β mRNA的表达水平,在空肠和回肠中Gln组中的表达水平较LPS组高,但在十二指肠中有所降低(P>0.05)。在十二指肠与空肠中,IL-17α mRNA的表达丰度在三组间存在差异(P<0.05),特别是在十二指肠和回肠中,Gln组的表达丰度达到最高;LPS组和Gln组空肠中IL-17α mRNA相对表达量显著降低58.16%和56.07%(P<0.05)。结果提示,日粮中添加1%的谷氨酰胺能够在一定程度上改善LPS诱导肠道损伤后断奶仔猪的免疫力,减轻应激反应造成的机体损伤。

玉米赤霉烯酮降解菌的筛选及其活性检测
魏单平, 刘玉洁, 孙向丽, 闫峰宾, 蒋瑞瑞, 康相涛, 王彦彬
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  761-768.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.020
摘要 ( 155 )   HTML( )    PDF (1722KB) ( 317 )  
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玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是危害动物健康的重要真菌毒素之一,笔者旨在筛选出能够有效降解ZEN的微生物,并对其降解特性以及降解产物的致毒活性进行检测,以期筛选出高效降解ZEN的菌株。以ZEN为唯一碳源进行初筛,以菌株发酵液对ZEN的降解率为复筛指标,对降解率最高的菌株进行16S rRNA基因测序分析;并对筛选出的菌株对ZEN的降解特性进行研究,对其降解产物在MCF-7细胞上进行活性检测。初筛获得40株能生长良好的细菌,复筛筛选出降解率最高H6菌株,经16S rRNA基因测序分析,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。在37℃、180 r·min-1、72 h时,该菌株发酵液对1 μg·mL-1 ZEN的降解率为95.6%,其上清液和菌悬液的降解率分别为68.93%和28.70%,对20 μg·mL-1 ZEN的降解率为85.8%;菌株上清液经蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理后,其降解活性明显降低;该菌株ZEN的降解产物在MCF-7细胞上的增殖率显著降低。结果表明,本研究筛选出能有效降解ZEN的菌株H6,经鉴定判断为解淀粉芽孢杆菌(B. amyloliquefaciens),该菌株分泌的胞外酶能够降解ZEN,使其类雌激素毒性显著降低。

临床兽医
高温对淮南麻黄鸡血脑屏障的影响
姜丹, 冯士彬, 王希春, 李玉, 詹凯, 吴金节, 李锦春
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  769-776.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.021
摘要 ( 216 )   HTML( )    PDF (7626KB) ( 249 )  
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为探究高温对淮南麻黄鸡血脑屏障的影响,将120羽107日龄淮南麻黄鸡随机均分为四组:常温对照组(Ⅰ组)、常温注射组(Ⅱ组)、高温对照组(Ⅲ组)、高温注射组(Ⅳ组)。Ⅰ、Ⅱ组于常温下饲养(21~23℃、RH 60%~70%),Ⅲ、Ⅳ组每天高温处理3 h(34~37℃、RH 45%~50%),试验持续2周。试验第7、14天,每组随机抽取5羽鸡,Ⅱ、Ⅳ组鸡一次静脉注射γ-氨基丁酸(GABA)(每千克体重8.87 mg),Ⅰ、Ⅲ组鸡注射同等剂量的生理盐水,注射0.5 h后断头取脑,冰浴上迅速采集脑组织。使用ELISA法分别检测第7、14天四组鸡脑组织中的GABA含量;采用电镜技术观察第14天常温对照组和高温对照组中鸡脑组织的血脑屏障超微结构,并用qRT-PCR技术和Western blot技术检测其脑组织中紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的mRNA及蛋白质的表达量。结果显示:试验第7天,Ⅰ、Ⅱ组鸡脑组织中GABA含量无显著差异(P>0.05),Ⅳ组鸡脑组织中GABA含量极显著高于Ⅲ组(P<0.01);试验第14天,Ⅰ、Ⅱ组间鸡脑组织中GABA含量无显著差异(P>0.05),Ⅳ组鸡脑组织中GABA含量高于Ⅲ组,但差异不显著(P>0.05)。与常温对照组相比,高温对照组鸡的血脑屏障结构受到破坏,电镜下观察到大脑皮层血管内皮细胞线粒体嵴有的断裂、有的空泡变性,血管内皮细胞间紧密连接间隙增宽,内皮细胞外基膜增厚、结构疏松;高温对照组鸡脑组织ZO-1的mRNA相对转录量极显著低于常温对照组(P<0.01),Occludin 的mRNA相对转录量显著低于常温对照组(P<0.05);高温对照组鸡脑组织ZO-1和Occludin蛋白的相对表达量极显著低于常温对照组(P<0.01)。高温破坏了鸡的血脑屏障,脑组织中ZO-1和Occludin表达下降可能是其原因之一。

党参多糖对巨噬细胞的诱导活化作用
石轶男, 孙娜, 孙耀贵, 李宏全
畜牧兽医学报, 2017, 48(4):  777-784.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2017.04.022
摘要 ( 205 )   HTML( )    PDF (1374KB) ( 320 )  
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旨在通过检测党参多糖(Codonopsis pilosula polysaccharide,CPPS)对小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞的增殖作用、TNF-α和IL-6分泌及其mRNA转录和NF-кB通路活化情况,探究CPPS对小鼠巨噬细胞系的诱导活化作用。以水提醇沉法从山西道地药材潞党参提取CPPS,经Sevage法除蛋白质,苯酚-硫酸法测定其含量。采用MTT法检测不同质量浓度CPPS(从31.25到4 000 μg·mL-1以2倍倍比稀释的方式)对RAW 264.7细胞增殖的影响。分别将25、50、100、150和200 μg·mL-1的CPPS作用于巨噬细胞系RAW 264.7细胞,ELISA检测TNF-α和IL-6的分泌量,RT-PCR检测TNF-α和IL-6 mRNA转录量,Western blot检测细胞核内NF-кB p65和细胞质内IкB-α蛋白表达量。结果显示,CPPS含量为83.97%;CPPS质量浓度在31.25~250 μg·mL-1可刺激RAW 264.7细胞增殖,以125 μg·mL-1增殖作用最显著(P<0.01),而高于500 μg·mL-1时则抑制RAW 264.7细胞的增殖;100和150 μg·mL-1的CPPS可使TNF-α(P<0.01)和IL-6(P<0.05)的分泌量及其mRNA的转录量极显著增加(P<0.001);100 μg·mL-1的CPPS可刺激RAW 264.7细胞核内NF-кB p65蛋白表达量升高(P<0.01),并使细胞质内IкB-α蛋白表达量降低(P<0.001)。结果表明,CPPS不仅可以通过刺激RAW 264.7细胞增殖,还可能通过激活NF-кB信号通路使TNF-α和IL-6的分泌量增多,进而参与机体的免疫调节。