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当期目录

2014年 第45卷 第3期 刊出日期:2014-03-23
综述
肠道上皮氧化应激细胞模型的研究进展
蔡旋,王静娴,陈小连,郭奇,朱丽慧,徐建雄
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  337-346.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.001
摘要 ( 364 )   HTML( )    PDF (887KB) ( 1138 )  
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肠上皮细胞极易受氧化的损伤,研究肠上皮细胞损伤有构建动物模型和细胞模型2种做法,单纯使用动物模型研究有成本高、不稳定、难以进行机理研究等弊病,构建合适的细胞培养模型作为动物模型的补充显得十分必要。目前常见的氧化应激造模方式有物理方法(如辐射、缺氧/复氧)及化学方式(如添加过氧化氢、(次)黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶)等,每种造模方式都有其适用的模拟条件,实际研究时需根据研究者的研究内容进行选择。常用的肠上皮细胞有原代培养细胞和传代细胞2类,原代培养细胞能较真实反映肠上皮细胞特点,但有操作繁琐、无法长期使用等缺点,传代培养细胞种类较多,需要研究者针对研究的种属进行选择。

脂肪特异蛋白27(Fsp27)与脂肪代谢
潘洪彬,赵素梅,孙泽威,龙国辉,高士争,秦贵信
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  347-353.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.002
摘要 ( 409 )   HTML( )    PDF (1329KB) ( 739 )  
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脂肪特异蛋白27(Fsp27)是一种新发现的定位在脂滴的蛋白质,在调控脂肪细胞内脂类贮存和线粒体活性方面起着重要作用。本文就Fsp27基因的发现、组织分布、促进脂滴生长机制、对脂肪代谢的影响和Fsp27的转录调控进行了综述,并进行了研究前景展望。可以确定,随着Fsp27研究的深入,其将在预防和治疗脂肪代谢紊乱相关疾病以及改善肉品质方面起到积极作用。

β-内酰胺类抗生素残留受体分析法的研究进展
程古月,彭娟,王玉莲,董小冰,彭大鹏,郝海红,黄玲利,袁宗辉
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  354-362.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.003
摘要 ( 425 )   HTML( )    PDF (712KB) ( 883 )  
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β-内酰胺类抗生素广泛用于动物细菌感染性疾病的治疗和预防,然而可食性动物产品中的抗生素残留会增加细菌耐药性的发生,危害人体健康,还会影响乳制品生产,导致经济上遭受巨大损失,因此开发快速可靠的β-内酰胺类抗生素残留检测方法对于食品安全控制非常必要。受体分析方法因其可以对一类药物进行多残留检测,具有专一性较强、灵敏度高、自动化程度高等优点,成为目前β-内酰胺类抗生素残留筛选方法研究的热点。本文将概述β-内酰胺类抗生素的受体及其制备方法,根据标记和检测手段的不同对受体分析法进行分类,包括放射免疫受体分析法、酶标记受体分析法、胶体金标记受体分析法、酶比色法和结合生物传感器的受体分析法,并介绍每类方法在β-内酰胺类抗生素残留检测中的研究进展和应用情况。

遗传繁育
公猪7号染色体繁殖性状QTL的精细定位和位置候选基因MEA1的鉴别研究
赵科伟,赵雪艳,张志燕,洪渊,范寅,任军,幸宇云
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  363-374.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.004
摘要 ( 308 )   HTML( )    PDF (1569KB) ( 820 )  
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本研究旨在精细定位公猪7号染色体(SSC7)影响附睾重和血浆睾酮浓度的数量性状位点(QTL),鉴别影响公猪繁殖性状的位置候选基因。以205头白色杜洛克×二花脸资源家系F2公猪群体为研究材料,在初步定位的QTL区间内增加14个SNPs对该群体进行扫描以精细定位QTL。在精细定位QTL区间内筛选雄性增强抗原1(MEA1)为位置候选基因,采用标准关联分析和F-drop检验分析该基因的多态位点与公猪繁殖性状的关联性,通过实时定量PCR(RT-PCR)和差异表达分析其表达情况。结果表明:①影响附睾重和血浆睾酮浓度的QTL置信区间显著缩小。②MEA1基因的5个SNPs与公猪附睾重、血浆睾酮浓度和射精量极显著或显著相关(P<0.01或P<0.05);单倍型与表型关联性分析显示,G-C-C-G-C单倍型与左、右侧附睾重极显著相关(P<0.01),A-C-C-G-G单倍型与左、右侧附睾重显著相关(P<0.05);F-drop分析显示,g.-1168 A>G和g.1115 A>G位点可能为影响公猪血浆睾酮浓度的主效突变位点(QTN)或与QTN紧密连锁;差异表达分析表明,附睾重与MEA1在附睾中的表达量成负相关(相关系数为-0.300,P=0.1);MEA1在成年公猪的18种组织中均有表达。本研究通过精细定位缩小了7号染色体影响公猪附睾重和血浆睾酮浓度的QTL置信区间;同时发现MEA1基因与公猪附睾重、血浆睾酮浓度和射精量显著相关,其中g.-1168 A>G和g.1115 A>G位点可能是影响公猪血浆睾酮浓度的QTN或与QTN紧密连锁,这2个位点可作为选育性欲较强公猪的分子标记。

转录因子Sox-5负调控猪S100A12基因表达
徐静,唐娟,刘映,赵书红,李新云
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  375-379.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.005
摘要 ( 249 )   HTML( )    PDF (770KB) ( 852 )  
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本研究旨在确定猪S100A12启动子-1 013~-590区域中起负调控作用的转录因子。首先,通过双荧光素酶报告系统对猪S100A12启动子-1 013~-590区域转录活性进行研究,分别对S100A12启动子-1 013~+598、-931~+598、-830~+598、-711~+598和-590~+598转录活性进行检测。然后对-1 013~-931关键区域进行进一步缺失及突变研究,鉴定该区域负调控S100A12基因的转录因子及其结合位点。结果表明,猪S100A12启动子-1 013~-931区域缺失后,转录活性显著上升,表明该区域存在负调控猪S100A12基因转录因子结合位点。生物信息学手段预测发现,在-1 013~-931区域内存在1个Sox-5,2个GATA-1转录因子结合位点。当转录因子Sox-5结合位点进行缺失及突变时,猪S100A12转录活性显著上升。结果显示转录因子Sox-5负调控猪S100A12基因的表达。

LIAS基因微环表达载体的构建
高会贞,王晓婷,郭豫杰,韩立强,鲁维飞,杨国宇
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  380-384.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.006
摘要 ( 213 )   HTML( )    PDF (2681KB) ( 752 )  
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为了构建猪LIAS基因长期高效的表达载体,本研究通过RT-PCR方法从猪肌肉组织中克隆了LIAS基因片段,并将该基因片段与微环表达载体minicircle进行连接,构建成微环载体minicircle-LIAS,然后转染HeLa细胞,检测其在HeLa细胞中绿色荧光蛋白的持续表达时间。结果表明,本研究克隆了猪LIAS基因,该基因长度为1 119 bp,并将该基因成功构建到了微环表达载体minicircle上;转染HeLa细胞对绿色荧光蛋白持续表达时间的观察显示,构建的微环表达载体minicircle-LIAS中绿色荧光蛋白的持续表达时间明显高于常用的pEGFP-N1质粒,为进一步阐明LIAS合成的生化过程及功能调控提供了新思路和试验材料。

鸭骨骼肌早期发育过程中钙蛋白酶3(CAPN3)基因的表达及其与肌纤维性状的关联
朱文奇,徐文娟,束婧婷,陈文峰,单艳菊,刘宏祥,胡艳,李慧芳,王金玉
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  385-390.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.007
摘要 ( 287 )   HTML( )    PDF (641KB) ( 695 )  
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本研究选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验材料,对不同品种鸭胚胎期和出雏早期肌肉中钙蛋白酶3(calpain3,CAPN3)基因的表达及其与肌纤维性状的关联性进行了研究。采用实时荧光定量PCR方法研究鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄胸肌和腿肌中CAPN3基因表达的发育性变化。结果发现,CAPN3 mRNA在2个品种鸭早期肌肉发育中具有相似的表达模式,并表现出显著的时间特异性,而品种和性别效应并不显著。在胸肌中,呈现先下降后上升的趋势,25胚龄前表达量均较低,21胚龄最低,出雏前(27胚龄)至7日龄表达量显著上升。在腿肌中,呈现“波浪形”表达模式,在21胚龄表达量最高。腿肌CAPN3基因表达与肌纤维类型、直径、面积和密度之间呈现不同程度的线性相关,部分指标在金定鸭中达到了显著水平。初步推测,CAPN3基因与肌纤维类型和肌纤维的生长发育密切相关。

基于高通量转录组测序的山羊睾丸和附睾头差异表达基因分析
张春香,张国林,郭丽娜,赵辉,任有蛇
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  391-401.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.008
摘要 ( 362 )   HTML( )    PDF (871KB) ( 1227 )  
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为探明山羊睾丸和附睾差异表达基因,挖掘与精子成熟和贮存密切相关的功能基因。采用Illumina HiSeqTM 2000高通量转录组测序RNA-seq技术对3只成年种公羊睾丸和附睾头进行测序,将组装得到的Unigene比对到Nr、GO和KEGG数据库中注释,并进行差异表达基因聚类分析。结果显示,睾丸和附睾头Unigene总数分别为57 727个和51 395个, GO功能分类注释到生物过程、分子功能和细胞组成数据库中的分别有25 201、25 456和27 318个,其中差异表达基因数分别为9 150、9 172和10 003个;注释到KEGG通路中所有基因数23 222个,其中差异表达基因数8 219个,差异基因显著富集的信号通路:mRNA监视通路和mTOR信号通路;睾丸和附睾头中差异表达的基因共有24 592个,其中上调基因有8 420个,下调基因有16 172个。在附睾头中上调幅度最大的前3位:gDEFB124、gDEFB109和gDEFB108,下调幅度最大的前3位:GTSF1LSRRM1和FNDC8。附睾头中表达量最高的前3位基因依次为Lcn5、gDEFB124和GPx5。睾丸中表达的基因数量大于附睾头中数量;β防御素家族、Lipocalin家族和GPx5可能在附睾头精子成熟、贮存和受精中发挥重要作用。

动物营养
肽结合与游离氨基酸比例对离体乳腺组织酪蛋白合成的影响
夏婷,师科荣,林雪彦,侯秋玲,王中华
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  402-409.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.009
摘要 ( 282 )   HTML( )    PDF (526KB) ( 956 )  
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本研究以离体培养的泌乳奶牛乳腺组织为材料,分别以Met-Met二肽或Arg-His-Ile三肽等量替代培养基中相应的FAA,替代比例为0%(对照)、5%、10%、15%、20%、40%、60%、80%和100%(三肽的替代比例以His的量为标准),检测乳腺组织酪蛋白-αs1(CSN1S1)、PepTⅡ、氨肽酶(ANPEP)的mRNA表达量及酪蛋白-β(β-casein)、PepTⅡ、氨肽酶(ANPEP)蛋白表达量。结果表明,Met-Met二肽替代FAA显著提高了CSN1S1的mRNA表达量、β-casein的蛋白表达量,以及PepTⅡ的mRNA和蛋白表达量(P<0.05),但对ANPEP的mRNA表达量没有显著影响(P>0.05);Arg-His-Ile三肽替代FAA对CSN1S1的mRNA和蛋白表达量影响不显著;但可以显著提高PepTⅡ的mRNA和蛋白表达量(P<0.05)。本研究的结果表明,以一定比例的小肽(如Met-Met)替代游离氨基酸可以被乳腺组织吸收利用并可促进酪蛋白合成,而且通过PepTⅡ载体转运进入乳腺上皮细胞是被吸收利用的主要途径。

锌、维生素E和β-胡萝卜素对种公牛睾酮、细胞因子及免疫性能的影响
李秋凤,李建国,高艳霞,曹玉凤,李运起,冯志华,马亚斌,吴云海,刘兴华
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  410-416.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.010
摘要 ( 288 )   HTML( )    PDF (410KB) ( 701 )  
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通过研究高温季节日粮中添加维生素(维生素E和β-胡萝卜素)和锌对荷斯坦公牛血清和精清中睾酮、铜蓝蛋白、细胞因子的变化,探讨高温季节维生素和锌对公牛繁殖性能的影响机制。本试验采用随机区组设计,选取体重相近(1 010±80)kg、采精正常、健康无病的纯种荷斯坦成年种公牛60头,随机分为4组,每组15头。4个处理组分别为Ⅰ组:对照组(基础日粮);Ⅱ组:基础日粮+100 mg·kg-1 DM Zn;Ⅲ组:基础日粮+维生素(300 mg·kg-1DM维生素E和60 mg·kg-1DM β-胡萝卜素);Ⅳ组:基础日粮+100 mg·kg-1DM Zn+维生素(300 mg·kg-1DM维生素E和60 mg·kg-1DM β-胡萝卜素),试验期120 d。结果表明:血清中睾酮浓度随着维生素(P<0.05)和锌(P<0.01)单独添加而显著增加,二者共同添加显著增加睾酮的浓度(P<0.01),精清中睾酮的浓度以Ⅲ组(添加维生素)最高(P<0.05),其次为Ⅳ组和Ⅱ组。日粮中添加锌显著增加血清(P<0.01)和精清(P<0.05)中铜蓝蛋白的浓度;单独添加维生素对血清和精清中铜蓝蛋白的浓度无显著影响,当锌和维生素共同添加可显著增加血清(P<0.01)和精清(P<0.01)中铜蓝蛋白的浓度。日粮中添加维生素和锌显著降低血清中IL-6(P<0.01)、IL-17(P<0.01)和TNF-α(P<0.05)的浓度,降低精清中IL-6的浓度(P<0.01)。综上可见,日粮中添加锌和维生素可提高精子的抗氧化能力。

添加乙醇和糖蜜对西藏地区燕麦和紫花苜蓿混合青贮发酵品质的影响
孙肖慧,原现军,郭刚,闻爱友,王坚,余成群,邵涛
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  417-425.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.011
摘要 ( 411 )   HTML( )    PDF (492KB) ( 784 )  
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为了充分利用西藏农区饲草资源,满足草食动物冬春季节的饲草料需求,本试验首先比较了不同比例燕麦和紫花苜蓿混合青贮的发酵品质,结果表明,各混贮组青贮饲料的pH均保持在4.10左右,乳酸含量随着紫花苜蓿添加比例的增加而上升,虽然随着紫花苜蓿混合比例的增加粗蛋白含量显著增加(P<0.05),但各混贮组显示较高的氨态氮/总氮值,均高于90 g·kg-1 TN。为了进一步改善青贮饲料发酵品质,抑制青贮过程中粗蛋白的降解,选择燕麦和紫花苜蓿以7∶3混合,并分别添加4%糖蜜、3.5%乙醇及其组合。结果显示,糖蜜和乙醇单独添加组发酵品质均良好,糖蜜添加组显示最高的乳酸含量和最低的pH,与对照组相比,单独添加糖蜜显著降低了乙酸含量和氨态氮/总氮值。单独添加乙醇显著提高了乳酸含量,降低了丙酸含量、pH和氨态氮/总氮值,显著提高了水溶性碳水化合物含量。但与单独添加乙醇或糖蜜相比,乙醇和糖蜜组合添加对青贮发酵品质的改善效果不显著,因此综合考虑,在燕麦和紫花苜蓿以7∶3混合青贮的基础上单独添加4%糖蜜或3.5%乙醇即可获得优质青贮饲料。

预防兽医
小反刍兽疫病毒血凝素蛋白与受体蛋白SLAM的相互作用
蒙学莲,窦永喜,朱学亮,骆学农,才学鹏
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  426-433.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.012
摘要 ( 247 )   HTML( )    PDF (2573KB) ( 864 )  
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旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区N端29-136位氨基酸和m4-胞外区C端137-240位氨基酸)编码基因的pEGFP-N1系列真核表达载体,将测序正确的重组质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1 细胞株,利用免疫共沉淀技术验证tH蛋白与SLAM蛋白相互作用的关键氨基酸区段。结果表明,成功构建了预期的重组表达载体,转染CHO细胞后目的蛋白正确表达;免疫共沉淀时,tH能与SLAM、m1、m2和m3蛋白发生反应,但没有与m4蛋白发生反应。由此可知,SLAM N端29-136位氨基酸是决定SLAM与PPRV H蛋白结合的关键氨基酸区段,这与麻疹病毒属其他宿主SLAM受体的研究结果一致。

1株绵羊边界病病毒的分离鉴定与序列分析
刘霞,毛立,李文良,杨蕾蕾,张纹纹,魏建忠,江杰元
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  434-442.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.013
摘要 ( 213 )   HTML( )    PDF (1526KB) ( 738 )  
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对华东地区某羊场采集定点监测的绵羊血液样品进行边界病的感染情况调查。通过RT-PCR方法检测瘟病毒5′-UTR基因,发现1只绵羊的血清样品在不同时间检测均为阳性,证实其为边界病病毒(BDV)持续性感染。将该阳性血清样品接种MDBK细胞,进行病毒分离鉴定。通过Npro基因RT-PCR扩增、电镜观察、病毒全基因组序列分析,并对分离毒株5′-UTR和Npro基因进行遗传进化分析。结果显示,该毒株在MDBK细胞上盲传至第8代,不发生细胞病变。RT-PCR扩增获得Npro 基因预期大小片段,电镜观察以及测序分析表明成功分离出1株BDV,将其命名为JSLS12-01。设计覆盖BDV全基因组的6对引物,RT-PCR扩增并测序,该分离株全基因组序列大小为12 227 bp(GenBank登录号为KC963426)。序列比对结果显示,该毒株基因组序列和氨基酸序列与已有BDV分离株之间相似性分别为72.3%~80.4%和80.1%~89.7%。5′-UTR和Npro基因系统进化分析显示,该分离株与BDV 3参考毒株亲缘关系最近,相似性最高分别为87.7%和75.8%。结果证实从绵羊血液样品中鉴定并分离到1株ncp型BDV分离株,经序列分析表明该毒株属于BDV 3亚型。

H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白分子特征分析及其对小鼠致病力的研究
黄蓉,梁威,刘纪园,王爱荣,柴同杰
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  443-450.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.014
摘要 ( 234 )   HTML( )    PDF (2271KB) ( 711 )  
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旨在了解H9N2禽流感病毒(AIV)山东分离株血凝素(HA)的遗传变异情况及其对哺乳动物的致病性。对5株H9N2 AIV山东分离株的HA蛋白的分子特征进行了分析,并以BABL/c小鼠为模型评价其致病性。结果表明:5株AIV均属于CK/Beijing谱系,其中2株病毒的HA具有人样受体结合特征(Leu234),3株病毒具有禽样受体结合特征(Gln234)。裂解位点分析表明,5株病毒均具有低致病性 AIV特征;个别病毒的潜在糖基化位点存在增加或缺失现象。攻毒BABL/c小鼠后,2株病毒能够在小鼠肺部复制,病理切片显示间质性肺炎病变,通过免疫组化染色在细支气管上皮细胞检测到病毒。研究表明,H9N2亚型AIV在进化过程中HA基因及其编码的蛋白存在一定的差异性,且5株山东分离株中有2株具备感染哺乳动物的能力。该试验结果为从分子水平上深入研究H9N2亚型AIV HA蛋白氨基酸位点与跨种传播的关系提供了理论依据。

遗传繁育
山东五大地方鸡禽白血病病毒主要流行亚型鉴定及其分离株gp85基因的分子特征分析
陈静,王波,王海明,程合刚,武星辰,孙淑红
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  451-457.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.015
摘要 ( 300 )   HTML( )    PDF (1109KB) ( 700 )  
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通过对山东五大地方鸡(寿光鸡、芦花鸡、百日鸡、琅琊鸡、鲁西斗鸡)不同亚型禽白血病病毒(ALV)分离株鉴定及gp85基因序列分析,探究山东五大地方鸡ALV的主要流行亚型及gp85基因分子特征。分别将寿光鸡、百日鸡、芦花鸡的无菌抗凝血和琅琊鸡、鲁西斗鸡的卵白接种CEF培养9~10 d,常规方法提取感染细胞的cDNA,用针对J亚型ALV(ALV-J)gp85基因(924 bp)的引物和A~J(含囊膜蛋白env基因,2 400 bp)的群引物进行PCR扩增、克隆、测序并分析其特点。本研究发现,2009—2011年间,山东五大地方鸡均存在ALV-J感染,5个ALV-J分离株gp85基因之间的相似性为98.4%~99.9%,与原型毒株HPRS-103相似性为97.8%~98.3%;均扩出内源性ALV(ALV-E)片段,与不能产生传染性病毒粒子的ev-1、ev-3、ev-6毒株相似性最高,推测为鸡基因组所携带;同时还发现,琅琊鸡、芦花鸡存在A亚型ALV(ALV-A)的感染。研究结果表明,2009—2011年间的山东五大地方鸡已经普遍存在ALV-J,两大品系中存在ALV-A和ALV-J共感染,同时ALV-E的片段广泛存在,这一结论揭示出山东地方鸡的禽白血病净化工作更加具有挑战性。

预防兽医
乌骨鸡J亚群白血病的综合诊断及病毒分子生物学特性研究
秦四海,刘立涛,岳瑞超,李宁,屈亚锦,王广文,胡东方,刘思当
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  458-462.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.016
摘要 ( 228 )   HTML( )    PDF (1033KB) ( 625 )  
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乌骨鸡是中国特有的优良品种,近年来聊城地区死淘的产蛋种鸡常见肝、脾肿大的肿瘤性疾病。2012年12月收到聊城某乌骨种鸡场送检的6只病死鸡。通过剖检观察、病理组织学检查、PCR检测及病毒分离鉴定,最终确定为J亚群白血病病毒感染所致的髓样细胞瘤和血管瘤。设计4对引物,对病毒全基因序列进行扩增,得到全长为7 647 bp,其中gag长2 016 bp,pol基因长2 622 bp,env长1 689 bp。跨rTM和DR区有205 bp的缺失,相当于原型株HPRS-103的7 049—7 253 bp位置;在先导区序列leader区域中有1个19 bp的插入序列。分离株与英国原型株HPRS-103差异较大,但与近几年国内商品蛋鸡的分离株相似性很高,可能来自商品蛋鸡。

奶牛乳源大肠杆菌耐药性、毒素基因鉴定及PFGE分型研究
王晓,王新,郝丹,唐晓双,周传丽,王雅春,张胜利,张沅,俞英
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  463-470.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.017
摘要 ( 228 )   HTML( )    PDF (1102KB) ( 730 )  
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通过采集中国北方地区某荷斯坦牛场生产群牛及乳房炎牛197份样品(195份奶样及2份洗布水样),分离出28株大肠杆菌菌株,并进行细菌药敏试验、毒力基因检测及PFGE分型,为牛场防治大肠杆菌型乳房炎提供数据支持。检测28株大肠杆菌对35种抗生素的敏感性发现,兽用临床抗生素庆大霉素和大观霉素应作为该奶牛场大肠杆菌型乳房炎的主要治疗药物。但该牛场出现了对非兽用广谱抗生素麦迪霉素的耐受性菌株,提示牛场在治疗奶牛大肠杆菌型乳房炎时应该注意用药问题。同时,洗布水样分离出的大肠杆菌的多重耐药性较强,也应引起重视,以便及时切断病菌传播途径。基于本研究在28株大肠杆菌中Ecs3703毒力基因的检出率为100%,证实所分离的大肠杆菌为肠出血性大肠杆菌(EHEC)而非肠毒素大肠杆菌(ETEC)。细菌毒力基因Irp2和CNF2的检出则暗示携带这两类毒力基因的大肠杆菌极可能为奶牛乳房炎致病菌。

基础兽医
p38MAPK在H9N2亚型猪流感病毒诱导小鼠急性肺损伤中的表达
魏东,张瑞华,徐明举,刘宝剑,王国华,徐彤
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  471-476.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.018
摘要 ( 207 )   HTML( )    PDF (4124KB) ( 740 )  
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为研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在H9N2亚型猪流感病毒(H9N2-SIV)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)中的表达,将180只7周龄SPF级BALB/c雌性小鼠,随机平均分成H9N2-SIV感染组(感染组)、H9N2-SIV感染+p38MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB组)和对照组,在感染后的第2、4、6、8和14天,分别进行临床观察、肺病理组织学观察、肺中磷酸化p38MAPK分布和表达的测定。结果显示:与对照组比较,感染组和SB组小鼠均表现明显的临床症状,感染组小鼠肺磷酸化p38MAPK蛋白表达在感染后第2天即明显增强,至第6天蛋白表达达高峰,差异极其显著(P<0.01),SB203580可抑制肺组织中p38MAPK的磷酸化,SB组小鼠肺损伤程度小于感染组,表明p38MAPK能够被H9N2-SIV激活并参与ALI的发生和发展过程,p38MAPK特异性抑制剂SB203580能够减轻ALI中肺组织的病理损伤。

鸡鼻相关淋巴组织中免疫细胞的定位分布
杨树宝,张英楠,马馨,杨丽华,姚纪元,钱爱东,栾维民
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  477-482.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.019
摘要 ( 232 )   HTML( )    PDF (2644KB) ( 754 )  
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为了解鸡鼻相关淋巴组织(NALT)的免疫状态,选择21日龄海兰白鸡的鼻组织,利用免疫组织化学方法研究不同免疫细胞的定位分布及相对数量。结果显示,鸡NALT主要定位于鼻泪管、鼻后孔和鼻甲黏膜中,其中以鼻泪管黏膜中的NALT最为发达。CD3+和CD4+T淋巴细胞聚集在鼻黏膜上皮下固有层底端,占据NALT的中下部区域,CD8+细胞数量较少,分散在NALT的中部;Bu-1+细胞为NALT中的主要细胞群,并密集而范围较大地分布在NALT外周,以绝对优势占据NALT的中上部区域;抗体生成细胞以IgA+和IgM+细胞为主,主要散布于NALT中央;Ma+细胞主要分布在NALT的深层疏松结缔组织中;MHC-Ⅱ+细胞则密集地分布于整个NALT中,为NALT中数量最多的免疫细胞。结果表明,鸡NALT中存在多种免疫细胞,在上呼吸道免疫防御方面起重要作用。

临床兽医
牡蛎粗多糖对免疫应激仔猪炎性细胞因子和PPARγ mRNA转录水平的影响
罗刚,黄志坚,陈腾腾,江和基
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  483-488.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.020
摘要 ( 238 )   HTML( )    PDF (794KB) ( 750 )  
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本试验旨在研究牡蛎粗多糖对脂多糖(LPS)刺激仔猪产生的免疫应激是否有缓解作用。选取30头(28±1)日龄的杜洛克×长白×大白三元阉公仔猪,按体重相近的原则,随机分为5个处理组(即空白对照组,免疫应激对照组,牡蛎粗多糖高、中、低剂量组),每组6头猪。空白对照组和免疫应激对照组饲喂基础日粮,牡蛎高、中、低剂量组分别饲喂添加1.2%、0.8%、0.5%牡蛎粗多糖的基础日粮。试验饲养30 d后,免疫应激对照组、牡蛎粗多糖高、中、低剂量组按体重腹腔注射100 μg·kg-1的LPS,空白对照组注射等量的生理盐水。各组于注射后3 h采血,ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;剖检取肝、脾、肾上腺、淋巴结和胸腺,用RT-PCR检测PPARγ mRNA的相对转录量。结果显示,应激对照组较其它各组炎性细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)水平均有显著提高(P<0.05),牡蛎粗多糖低、中剂量组炎性细胞因子水平无显著性差异(P>0.05),2组与空白对照组相比也无显著差异(P>0.05),但2组和空白对照组与高剂量组相比IL-6与TNF-α水平显著降低(P<0.05)。牡蛎粗多糖高、中、低剂量组和空白对照组肝、脾、肾上腺和胸腺PPARγ mRNA的相对转录量较应激对照组极显著降低(P<0.01),但是淋巴结PPARγ mRNA的相对转录量高于应激对照组,且低、中剂量组PPARγ mRNA的相对转录量较高剂量组更趋于生理状态下空白对照组的相对转录量。LPS作为免疫原可引起断奶仔猪产生免疫应激反应,在基础日粮中添加牡蛎粗多糖可以缓解免疫应激,且添加量在0.5%到0.8%区间时缓解效果较好。

研究简报
YWHAG基因CDS的克隆及其在梅山与杜洛克猪卵泡发育中的差异表达研究
刘丽娟,鲁慧文,杨飞,徐梦思,黄涛,李大全
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  489-493.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.021
摘要 ( 220 )   HTML( )    PDF (608KB) ( 775 )  
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本研究旨在探讨YWHAG(Tyrosine 3-monooxygenase/tryptophan 5-monooxygenase activation protein,gamma polypeptide) 基因在猪卵泡发育中的表达规律及其与卵泡发育的关系。从猪卵泡组织中克隆YWHAG基因CDS(Coding region)区全序列,采用半定量RT-PCR和Real-time PCR方法检测YWHAG基因在不同组织中的表达谱信息,并进一步分析了该基因在梅山、杜洛克猪L、M2、M1、S各级别卵泡中的表达变化。结果显示:克隆得到了猪YWHAG基因780 bp编码区全序列,通过与人、小鼠、牛YWHAG基因CDS区BLAST比对,其同源性分别为97.72%、96.68%和98.57%。YWHAG基因在肌肉、肝、脂肪、肺、心、脾、肾、子宫、输卵管、小肠、胃、卵巢、垂体、下丘脑等组织中均有表达,尤其在脂肪、小肠和大脑中表达较高。YWHAG基因在不同直径卵泡中的表达量的趋势均为M1卵泡和L卵泡最高,M2卵泡次之,S卵泡最低,并且在M1卵泡和L卵泡中的表达量显著高于M2卵泡和S卵泡(P<0.05)。YWHAG基因在梅山猪各级别卵泡中的表达量均高于杜洛克猪(P<0.05),并且在梅山猪S和M2卵泡的表达量分别极显著高于杜洛克猪(P<0.01),而在M1卵泡及L卵泡中的表达量无显著差异;结果提示,YWHAG基因可能参与猪卵泡发育中的凋亡过程,从而引起梅山与杜洛克猪在排卵数方面存在差异。

世界奶牛繁殖研究的知识图谱分析
王雅晶,朱化彬,王雅春,李胜利,张胜利,曹志军
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  494-501.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.022
摘要 ( 213 )   HTML( )    PDF (2618KB) ( 1250 )  
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基于关键词共现分析、文献共引分析等计量学方法,研究了1945-2013年科学引文索引(SCI)数据库所收录的有关奶牛繁殖研究的3 693条科技文献,统计了年度发文量,绘制了作者、机构、共被引文献及关键词的共现网络知识图谱,直观地展示世界上该领域内高产作者和主要研究机构的分布,并通过高被引文献和高频关键词分析,透视该领域的整体状况和研究热点。

MATP在不同毛色羊驼皮肤中的表达、定位及与其他基因的相关性分析
冀元凯,田雪,范瑞文,于秀菊,赵园园,马淑慧,董常生
畜牧兽医学报, 2014, 45(3):  502-508.  doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.03.023
摘要 ( 222 )   HTML( )    PDF (2740KB) ( 898 )  
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本研究旨在探索膜相关转运蛋白(MATP)与羊驼毛色形成的相关性。以白色和棕色的成年羊驼为研究对象,主要用荧光定量PCR技术分析MATP基因在不同毛色羊驼皮肤的相对表达量、免疫组织化学法和Western blot对MATP蛋白在不同毛色羊驼皮肤中的定位和表达进行研究。荧光定量PCR结果显示,棕色羊驼中MATP的mRNA相对表达量是白色羊驼的3.047倍(P<0.05);Western blot结果表明,羊驼皮肤组织总蛋白提取物中存在相对分子质量约53 ku的产物,棕色羊驼的皮肤平均蛋白表达量显著高于白色羊驼(P<0.05);免疫组化结果显示,MATP在羊驼皮肤毛囊的表皮、根鞘及毛球部均表达。MATP与黑色素细胞分布及含量关系密切,可能通过调控黑色素生成从而参与羊驼毛色形成过程。