畜牧兽医学报

成纤维生长因子（FGF2）和成纤维生长因子受体（FGFR1）在新生死亡体细胞克隆牛组织中的表达

李世杰;李冬杰;杜卫华;樊宝良;;戴蕴平;李宁

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1289-1294. doi:

摘要 ( 1451 )

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为了探讨成纤维生长因子及其受体在克隆动物出生死亡以及器官发育异常中的可能作用，本研究用荧光定量RT-PCR技术分析了成纤维生长因子基因（FGF2）及成纤维生长因子受体基因（FGFR1）在来自2种供体细胞（成年成纤维细胞和胎儿成纤维细胞）的出生死亡克隆牛的6个组织（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和大脑）中的表达。结果表明：FGFR1的表达在来自两种供体细胞的体细胞克隆牛的心脏（P<0.05）和肝脏（P<0.05）显著升高， FGF2基因在体细胞克隆牛组织中的表达未发现异常。由于FGFR1在胚胎发育和器官形成中起重要作用，所以FGFR1的异常表达可能是造成克隆动物出生死亡以及器官发育异常的原因之一。

猪HK2基因第17外显子多态与胴体和肉质性状的相关性研究

王军;邓昌彦;熊远著;左波;李凤娥;雷明刚;郑嵘

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1295-1299. doi:

摘要 ( 883 )

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采用PCR-RFLP技术，分析了HK2基因第17外显子中MspⅠ的酶切突变多态位点（A171G）在6个群体186头猪中的多态性分布及其与胴体性状和肉质性状间的相关性。研究结果表明：3个纯种猪群和3个杂交猪群中A和B等位基因频率分布情况较一致，均为B等位基因占绝对优势；在6个群体中，没有发现AA基因型个体，AB与BB基因型效应与胴体长、肋骨数和眼肌面积的相关性极显著（P<0.01），与肩部背膘厚、胸腰椎间背膘厚、三点平均背膘厚、眼肌高度、眼肌宽度、肥肉率、瘦肉率和肌内脂肪等性状的相关显著（P<0.05）。该位点是否可用作改良猪胴体、肉质性状的标记位点并在标记辅助选择中加以应用还有待进一步的研究。

中国小型猪SLA-DMA基因的SSCP分析

于辉;李波;李华;李彬;李学伟;刘为民;赵海全

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1300-1305. doi:

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通过对甘孜藏猪、合作猪、巴马猪以及五指山猪4个群体的SLA-DMA基因第2和第3外显子的PCR-SSCP和序列多态分析表明：SLA-DMA基因的第2外显子没有多态，但第3外显子有2个等位基因的变异。通过优化低离子强度单链构象多态分型条件（LIS-PCR-SSCP）、克隆测序、菌落PCR、菌落不对称PCR及单链DNA二级结构计算机预测等技术，对第3外显子PCR-SSCP复杂带型进行了准确的判定，J等位基因的带型与单链DNA二级结构计算机预测结果之间存在很高的一致性。4群体中SLA-DMA基因的第3外显子共有JJ/JK/KK 3种基因型，均达到了Hardy-Weinberg平衡。其中K等位基因频率高于J等位基因频率。杂合度和多态信息含量的高低依次为：巴马猪、五指山猪、合作猪、甘孜藏猪。除甘孜藏猪多态信息含量为低度多态外，其余群体均为中度多态。

FosB基因在白色杜洛克×二花脸资源家系中的遗传变异及其与分娩母猪母性行为的相关性

杨竹青①;陈从英①;任军;郭源梅;杨广成;麻骏武;高军

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1306-1311. doi:

摘要 ( 972 )

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本研究根据FBJ骨肉瘤原癌基因同源物B（FosB) 在动物母性行为发生过程中的重要作用，选择其作为影响母猪母性行为的候选基因，以白色杜洛克×二花脸F2资源群体为材料，分析了FosB基因在此群体中的遗传变异及其与分娩母猪母性行为的相关性。采用PCR产物直接测序法搜寻了FosB 基因488、806 bp 2个片段的单核苷酸多态位点（SNPs），鉴别到FosBEU163403-g187A>T, FosB-EU163403-g.188A>C和FosB-EU163403-g.297C>G 3个SNPs。采用PCR-Mbi I-RFLP法分析了G297C位点在资源群体中的多态及与母猪母性行为的相关性。传递不平衡检测（TDT）表明该多态位点与母猪杀婴行为、衔草做窝、哺乳、踩仔猪、压仔猪等母性行为均无显著相关性（P>0.364)。FBAT分析结果也证实了这一点（P>0.236）。考虑到母性行为属于复杂性状，可能由微效多基因控制，因此有必要在更大规模群体进行分析或搜寻其他候选基因的突变位点。

波尔山羊微卫星标记多态性与生长性能的关系研究

姚红卫;杨利国;沈忠;张春艳;徐云翔;滑国华;陈世林

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1312-1319. doi:

摘要 ( 873 )

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根据山羊遗传连锁图谱和相关文献资料，选择2号和5号染色体上的8个微卫星座位作为分子标记，选用250头纯种波尔山羊作为实验群体，通过对该群体这8个微卫星座位的检测分析表明： BMS1248、BMS1898、ILSTS034、LSCV22、LSCV37、OarFCB011、IDVGA64和INRA040在波尔山羊群体中的有效等位基因数、遗传杂合度和多态信息含量分别为10.057 6、0.900 6、0.892 0,6.831 5、0.853 6、0.839 6,8.101 8、0.876 6、0.864 0,7.067 5、0.858 5、0.841 7,7.730 7、0.870 6、0.857 3,5.912 5、0.830 9、0.810 1,6.134 7、0.837 2、0.817 2,5.957 8、0.832 2、0.812 2。8个微卫星座位与生长性状的最小二乘分析结果表明：微卫星座位BMS1248的162/140基因型对出生体重、出生体长、出生体高、出生胸围具有正效应；微卫星座位BMS1898 的119/101基因型对出生体重、出生体长、出生体高具有正效应，111/111基因型对出生胸围具有正效应；微卫星座位ILSTS034的193/167基因型对出生体重有正效应，193/167和199/167基因型对出生胸围有正效应；微卫星座位LSCV37的 161/147和159/143基因型对出生体重具有负效应，161/147对出生体长和出生体高具有负效应；微卫星座位IDVGA64的281/243基因型对出生体高和出生体长具有负效应；微卫星座位INRA040的246/216基因型对出生体重和出生胸围具有正效应，246/216和238/238基因型对体高具有正效应。

鹅Myostatin基因单核苷酸多态性检测及群体遗传分析

郑云;龚道清;吴伟;赵旭庭;段修军;顾志良

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1320-1328. doi:

摘要 ( 976 )

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肌肉生长抑制素是TGF-β超家族的新成员，其主要在骨骼肌中特异性表达，且对骨骼肌的生长发育起负调控作用。本研究采用PCR-SSCP 和DNA测序的方法检测了鹅Myostatin基因的单核苷酸多态性，并对浙东白鹅、五龙鹅、扬州鹅、朗德鹅、莱茵鹅、豁眼鹅、吉林农大白鹅、狮头鹅、皖西白鹅、籽鹅等不同品种（系）鹅单核苷酸多态性进行了群体遗传分析。结果表明：（1）在检验的12对Myostatin基因的引物中，发现3对引物的扩增片段具有多态性，分别为启动子区域 T769G、 C543T的突变，内含子1的 A1 632G突变。（2）不同鹅品种（系）群体遗传学分析表明，启动子区域引物P3扩增片段多态性位点在各群体中等位基因A的频率均高于B，且等位基因频率均高于0.77，表现为优势等位基因；引物P4扩增片段多态性位点在扬州鹅、朗德鹅、狮头鹅群体中等位基因D的频率均高于C的频率，等位基因D的频率分别为0.625 0、0.548 8、0.647 4，而在其余群体中均表现为等位基因C的频率高于D的频率。

鸡CaBP-D28k基因克隆、序列测定及其真核表达质粒的构建

俞路;王雅倩;章世元;孙怀昌;王志跃;孙龙生;李燕舞;李治学;周联高;严桂芹

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1329-1335. doi:

摘要 ( 1452 )

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采集200日龄产蛋新扬州鸡小肠组织直接提取总RNA进行反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增，扩增产物进行克隆、测序，获得了新扬州鸡CaBP-D28k基因序列。序列测定表明，CaBP-D28k基因核苷酸长度为789 bp，编码262个氨基酸。与GenBank上发表序列（NM_205513.1）比较，核苷酸同源性为99.9%，在760 bp处存在G→T的错义突变。与从GenBank下载的马、人、小家鼠、蟾蜍序列进行比较分析，核苷酸同源性分别为79.3%、79.1%、77.4%、77.3%。将该基因片段克隆到真核表达载体pCEP4，构建重组质粒pCEP4-CaBP-D28k，所获重组质粒经过酶切、测序鉴定，证实含有目的片段，且连接、构建正确，为利用pCEP4-CaBP-D28k调控蛋禽钙代谢、改善蛋壳质量的研究应用奠定了基础。

鸡精原干细胞定向诱导分化特性的研究

李碧春;魏彩霞;余飞;何先红;倪黎纲;陈强;王宵燕;肖小君;徐琪;刘铁铮

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1336-1342. doi:

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取孵化18~20 d的鸡胚睾丸，分离精原干细胞(SSCs)，培养传代3次后，用特异性化学物质定向诱导分化，以研究鸡培养传代后SSCs保持多向分化的潜能。①用特异的化学物质地塞米松、β-磷酸甘油钠、维生素C诱导鸡SSCs向成骨细胞分化，用Von Kossa’s法、改良的钙钴法及免疫组化法进行成骨细胞鉴定；②用维甲酸 (RA)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）诱导SSCs向神经元样细胞分化，甲苯胺蓝特异染色和组织化学鉴定。③用地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）诱导SSCs向脂肪细胞分化，特异性的油红O染色和脂肪细胞标志基因PPARγ检测。结果显示，SSCs被诱导15~21 d后分化为成骨细胞，诱导形成率为80%；Von Kossa’s染色细胞间布满黑色颗粒，具有矿化基质沉积；改良钙钴法碱性磷酸酶染色胞浆呈深棕色或深黑色，免疫组化染色细胞呈阳性。SSCs被诱导3~7 d后分化为神经元样细胞，甲苯胺蓝染色阳性率为85%。SSCs被诱导7~21 d后，分化成脂肪细胞，分化率为85%。诱导的脂肪细胞经特异性的油红O染色为阳性，并高表达脂肪细胞标志基因PPARγ。结论：在不同的诱导条件下，SSCs可被定向诱导分化为3种成体细胞，证明其培养传代后仍具有多向分化能力。

精子提取液对绵羊同异种核移植重构胚的激活效果

赛务加甫;;彭新荣;李向臣;安志兴;郑月茂;权富生;张涌

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1343-1348. doi:

摘要 ( 1463 )

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应用绵羊精子提取物体外激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚，比较了不同浓度的绵羊精子提取物对绵羊同种和异种重构胚的激活作用，并与传统的化学激活方法对重构胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数做了比较。结果表明，绵羊精子提取物可以有效地激活绵羊体细胞核移植胚和山羊-绵羊异种核移植胚，每一重构胚注射3 pL浓度为5 mg/mL的绵羊精子提取物，对同种和异种胚的发育效果均为最好，并显著高于其他试验组（P<0.05）。注射绵羊精子提取物对绵羊-山羊异种核移植胚的卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数的影响，与离子霉素联合6-DAMP激活法差异不显著（P>0.05）。注射绵羊精子提取物对绵羊同种核移植胚的卵裂率和囊胚率的影响，与离子霉素联合6-DAMP激活法差异也不显著（P>0.05），但精子提取物注射法的绵羊核移植胚的囊胚细胞数显著（P<0.05）高于化学激活法的细胞数（72.4 vs 65.2）。

日粮中添加天门冬氨酸镁对肉仔鸡肝脏和腿肌脂质过氧化状态的影响

刘永祥;刘艳丽;黄炎坤;呙于明

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1349-1354. doi:

摘要 ( 1538 )

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研究日粮添加天门冬氨酸镁（MgAsp）对肉仔鸡肝脏和腿肌脂质过氧化状态的影响及其机理。将128只22日龄的AA肉仔鸡随机分配到对照组和加镁日粮组，每组8个重复，每个重复8只鸡，以玉米、豆粕为主要原料配制对照组日粮，在此基础上添加1%的MgAsp作为加镁组日粮。42日龄时，每个重复随机抽取1只鸡，颈静脉放血处死，收集血清、肝脏和腿肌等样品。试验结果表明，与对照组相比，加镁组肉仔鸡血清、腿肌和肝脏镁的含量分别提高了 22%、21%和29% (P<0.01)，加镁组肉仔鸡肝脏和腿肌中丙二醛（MDA）的含量分别降低了24％(P<0.01)和29％(P<0.01)，加镁组肉仔鸡肝脏中过氧化氢酶（CAT）和总超氧化物歧化酶（SOD）的活性分别提高了25％(P<0.01)和14％(P<0.05)，腿肌 CAT的活性提高了37％(P<0.01)，日粮添加MgAsp显著降低腿肌中活性氧（ROS）的含量(P<0.01)。两组肉仔鸡腿肌和肝脏中不饱和脂肪酸的总含量差异不显著(P>0.05)。上述结果说明，玉米-豆粕日粮中添加MgAsp可以有效降低肝脏和腿肌中MDA的产量；腿肌中CAT活性的提高和ROS产量的降低是日粮添加MgAsp降低腿肌中脂质过氧化水平的原因；肝脏中CAT和SOD活性的提高是日粮添加MgAsp降低肝脏中脂质过氧化水平的原因。

有机锌源的理化特性及其体外瘤胃发酵的稳定性研究

梁建光;吕林;罗绪刚;刁其玉;刘彬;

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1355-1366. doi:

摘要 ( 917 )

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进行2个试验,研究有机锌源的理化特性及其体外瘤胃发酵的稳定性。在试验1中，分析了7种有机锌源产品的理化特性。结果表明：有机锌源产品的含锌量和氨基酸组成存在较大差异；所测2种有机锌源产品（ZnPro B和ZnAA B）均具有锌络合物的结构特征；所有有机锌源产品在盐酸、柠檬酸、中性柠檬酸铵缓冲液中的溶解度均在90%以上，在pH2缓冲液中的溶解度为53.92%～98.54%，在水和pH5缓冲液中的溶解度变化范围为6.04%～98.54%；未检测到有机锌源在pH2、0.2 mol/L HCl-KCl或pH5、0.1 mol/L KH₂PO₄-K₂HPO₄缓冲液及去离子水中的可溶部分有络合锌的存在；有4种有机锌源产品属于弱络合强度有机锌源，有1种有机锌源产品属于中等络合强度有机锌源，有2种有机锌源产品属于强络合强度有机锌源。在试验2中，采用6×4析因安排的完全随机设计，用体外瘤胃发酵法评价了不同络合强度有机锌源的瘤胃稳定性。结果表明：不同络合强度有机锌在模拟瘤胃环境下是稳定的，过瘤胃率分别在92%以上，其中又以强络合强度有机锌为最好（99.55%），弱络合强度有机锌（94.85%）次之，中络合强度有机锌（92.16%）相对最低。

奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌的PCR-16S rDNA鉴定及日粮的影响

巩庆亮;王振勇;柴同杰;侯志高;贾玉东;王允田;马健

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1367-1372. doi:

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设计9个精料梯度的日粮饲喂干乳期成年荷斯坦奶牛，并对其瘤胃液中的部分细菌进行了分离，PCR-16S rDNA鉴定和动态检测。结果显示，以瘤胃液为原料，采用人工培养基共分离到56株细菌，并对7株具代表性的细菌进行了PCR扩增，经序列同源性比较，最终把细菌鉴定为牛链球菌(A0625、A1212、 0131)、蜡样芽孢杆菌（0113）、地衣芽孢杆菌（0091）、短小芽孢杆菌（0083）和嗜热链球菌(0123)。同时还发现随精料浓度的增加，牛链球菌、芽孢杆菌及嗜热链球菌的数量均呈不同程度的上升趋势。结果表明不同精料浓度的日粮对奶牛瘤胃需氧及兼性厌氧菌有着不同程度的影响，其中对牛链球菌影响最大，从系统发育分析可知所分离细菌虽未形成新的细菌进化枝，但牛链球菌和嗜热链球菌的核苷酸序列仍发生了多处碱基突变。

一株H5N1亚型高致病力禽流感病毒人工感染鸭的组织病理学观察

李玉谷;周泉鹤;崔聪颖;叶远兰;马勇江;张媛;李楚宣

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1373-1381. doi:

摘要 ( 1335 )

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鸭静脉接种或经眼-鼻-口腔-泄殖腔接种禽流感病毒A/duck/Guangdong/220/2004（H5N1）后，全身多数脏器充血、淤血、出血，血栓形成、组织水肿，以及心、肝、脾、肺、肾、胰、脑、胸腺、法氏囊等许多器官的实质细胞发生坏死或凋亡；主要表现为血管炎、坏死性胰腺炎、萎缩性坏死性胸腺炎和法氏囊炎、脾炎、气管炎、出血性支气管间质性肺炎、病毒性心肌炎、非化脓性脑炎、局灶性病毒性肝炎、溃疡性肠炎、肾小管间质性肾炎和系膜细胞增生性肾小球肾炎等。结果显示，该病毒的致病机制与细胞坏死和细胞凋亡有关，而鸭多脏器严重的病理损伤是其死亡的原因。

兔出血症病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达及对家兔的免疫保护效果

王芳;胡波;任雪枫;范志宇;杨龙圣;徐为中;张则斌;何孔旺

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1382-1387. doi:

摘要 ( 910 )

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用RT-CR方法扩增兔出血症病毒（RHDV）衣壳蛋白VP60基因，通过克隆、转化得到重组穿梭载体Bacmid-P60，用此质粒转染Sf9昆虫细胞，得到重组病毒rAcV-ac-P60，经RT-CR、IFA、SDS-AGE、 Western blotting、HA和HI鉴定，结果显示重组VP60蛋白在Sf9昆虫细胞中得到表达。在不加任何佐剂的情况下,用表达的蛋白免疫3月龄非RHD免疫兔，结果显示,免疫后21天,兔体内可产生抗RHDV抗体，抗体血凝抑制效价为26~27，该抗体可以抵抗血凝效价为210致死剂量RHDV强毒的攻击，本研究为兔病毒性出血症基因工程疫苗的研制奠定了基础。

猪胸膜肺炎放线杆菌ArcA基因在低氧环境下的转录变化

段丽丽;文心田;曹三杰;黄小波

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1388-1394. doi:

摘要 ( 815 )

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为研究低氧条件对猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）血清1型ArcA基因表达的影响，并探讨ArcA在低氧环境中的作用机制，作者建立了体外培养模型，在低氧环境中培养APP，采用半定量RT-PCR方法，以看家基因recF为内参，检测ArcA基因在低氧条件下的表达水平。结果表明ArcA基因在常氧条件下不转录或低转录，而在低氧环境下高转录，并呈现转录量先升高后降低的趋势。这表明ArcA基因可能是胸膜肺炎放线杆菌潜在的毒力基因，在致病过程中发挥重要作用。

鸡舍环境金黄色葡萄球菌气溶胶产生及其传播的REP-PCR鉴定

钟召兵;柴同杰;段会勇;苗增民;姚美玲;袁文

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1395-1401. doi:

摘要 ( 1422 )

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采用ANDERSEN-6级空气微生物样品收集器和RCS离心式采样器在山东泰安4个鸡场舍内空气、舍外环境上风向10、50 m和下风向10、50、100、200、400 m不同距离处收集金黄色葡萄球菌，计算每个采样点的金黄色葡萄球菌浓度；与此同时，收集鸡的粪便，分离金黄色葡萄球菌。利用金黄色葡萄球菌DNA基因外重复一致回文序列聚合酶链式反应（Repetitive extragenic palindromic elements PCR， REP-PCR）鉴定技术，扩增不同测量点和粪便分离的金黄色葡萄球菌的DNA图谱。通过每个采样点的金黄色葡萄球菌的浓度变化以及金黄色葡萄球菌遗传相似性分析确认动物舍微生物气溶胶向舍外环境的传播。结果显示：4个鸡场舍内空气中金黄色葡萄球菌的浓度远远高于舍外上风和下风向的金黄色葡萄球菌浓度（P＜0.05或P＜0.01），但是舍外下风不同距离间的金黄色葡萄球菌浓度差异并不显著（P＞0.05）。REP-PCR结果表明，从鸡的粪便中分离的金黄色葡萄球菌与从舍内空气中分离的部分金黄色葡萄球菌（38.7%）相似性可达100%，从鸡场舍外下风方向分离到的多数金黄色葡萄球菌(55.9%)与舍内空气或粪便中分离的金黄色葡萄球菌相似性可达100%。可见，它们分别是由粪便中遗传基因完全相同的菌株繁殖而来。而从鸡舍上风分离到的金黄色葡萄球菌与舍内空气或粪便中分离的金黄色葡萄球菌相似性仅在60%~87%。结果显示，鸡粪便中的金黄色葡萄球菌能够形成气溶胶，进入气悬状态，不仅能在舍内传播，而且还能够借助舍内外气体交换，传播到舍外下风一定的距离。从而说明，来自动物体的金黄色葡萄球菌既能污染舍内空气，对本舍鸡群构成传染威胁，又能传播一定的距离，对周边社区环境空气造成生物污染。

猪带绦虫10 ku 蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其初步应用

吴国华;郑亚东;贾万忠;张少华;景志忠;才学鹏

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1402-1405. doi:

摘要 ( 1536 )

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将猪带绦虫六钩蚴10 ku蛋白（TSO10）和囊尾蚴10 ku蛋白（CE10）的基因克隆到表达载体中，构建重组表达载体pGEX-4T-TSO10和pGEX-4T-CE10, 经测序证明基因序列完全正确。重组表达载体转化大肠杆菌后诱导表达，用SDSPAGE、Westernblot和薄层扫描检测表达产物。表达的目的蛋白纯化后用于血清样品ELISA检测。SDSPAGE、Western-blot和薄层扫描检测结果表明，六钩蚴和囊尾蚴10 ku蛋白基因均能在大肠杆菌中成功表达，表达的融合蛋白的相对分子质量约为35 ku，并能被囊虫病人阳性血清所识别，具有反应原性，表达量分别占菌体蛋白总量的25%和30%。ELISA检测结果显示，10 ku蛋白可用于囊虫病的诊断。

长角血蜱保护性抗原基因P27/30的克隆和原核表达

杨彩明;杨光友;张晓谦;贾小勇;余增莹

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1406-1410. doi:

摘要 ( 835 )

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采用RT-PCR技术首次从孤雌生殖长角血蜱四川株克隆到P27/30基因，扩增序列全长670 bp，包含完整的开放阅读框，编码201个氨基酸，预测蛋白相对分子质量为23.38 ku。同源性分析表明孤雌生殖长角血蜱中国株与日本株P27/30基因同源性高达99.85％。经RTPCR检测分析，该基因在孤雌生殖长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱、饥饿成蜱和饱血成蜱这几个阶段均有表达。将该基因亚克隆后连接到pET32a（+）原核表达载体，转化BL21(DE3)宿主菌，经IPTG诱导可成功进行表达。表达的目的蛋白大小为24 ku左右，与预期大小一致；Western-blot显示兔抗长角血蜱全虫抗体能够识别该重组表达蛋白。

7种蠕虫卵的数字化描述及初步识别研究

哈斯苏荣;刘珍莲;阿木古楞

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1411-1414. doi:

摘要 ( 796 )

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为初步实现家畜蠕虫卵的数字化描述和自动识别研究目标，作者以对内蒙古反刍家畜危害较大的肝片吸虫卵、捻转血矛线虫卵和仰口线虫卵等7种蠕虫卵为研究对象，用变形雅可比（p＝4，q＝2）-傅立叶矩对它们的显微图像进行数字化描述和初步识别试验。结果表明，用该矩可以成功地数字化描述和识别以上7种蠕虫卵，且重建图像清晰而完整，基本恢复了虫卵原始图像的所有关键信息，平均识别率达96.8%。

PLGA微球包裹生长抑素融合基因表达质粒对家兔生长的影响

戴建威;章倩倩;王妍;刘松财;张永亮

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1415-1420. doi:

摘要 ( 1287 )

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将HBsAg与Somatostatin (SS) 融合基因克隆到真核表达载体pIRES1neo-CMV，构建了pIRES1neo-HBsAg/SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞，96 h提取细胞总RNA，RT-PCR鉴定融合基因表达；并收集细胞上清，ELISA法测定上清中HBsAg表达情况，结果为阳性。大量提取pIRES1neo-HBsAg/SSM质粒，用Poly D, L-lactide-co-glycolic acid (PLGA)微球包裹，注射Vc獭兔后肢胫前肌，以注射生理盐水獭兔为对照。动物常规饲养45 d，观察日增重并测定血清中IGF-Ⅰ、SS含量以及抗HBsAg抗体水平。结果显示注射后15~30 d，质粒注射组日增重较对照组高106.8%（P<0.01）；30 d时，血清中IGF-Ⅰ浓度质粒组比对照组高29.2%(P<0.05)；检测整个过程中血清中SS含量，发现注射后30 d时明显低于对照组，且出现整个试验过程的最低值；质粒注射组血清中抗HBsAg抗体水平在注射后30 d时出现峰值，这与SS含量出现最低值相吻合。本试验结果表明HBsAg与SS融合基因免疫獭兔，可以促进动物生长。

不同品种仔猪运输应激后组织损伤与Hsp47表达

朱琳;鲍恩东;赵茹茜;严建燕

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1421-1425. doi:

摘要 ( 1442 )

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选取12头皮特兰和24头二花脸仔猪，体重达到（20±1） kg时，随机选取6头皮特兰和12头二花脸进行2 h运输，其余仔猪作为对照组。采用HE染色、免疫组织化学以及酶联免疫吸附试验技术，通过对不同品种仔猪运输前后肝脏、肾脏、胃的损伤以及Hsp47的定位、定量观察，研究运输应激与Hsp47表达之间的关系。结果表明：2 h运输应激后，二花脸和皮特兰仔猪各组织的实质细胞均有不同程度的损伤；Hsp47主要分布在肝脏的中央静脉和窦状隙内皮细胞、肾小球和远曲小管上皮细胞、胃的黏膜层和黏膜下层结缔组织内；在肾脏和胃组织中，皮特兰仔猪在运输后Hsp47含量增加（P＜0.05），但二花脸仔猪的相应值未见显著差异，2个品种肝脏中Hsp47含量在运输前后的变化无差异。Hsp47在受检组织中尽管有表达增加的趋势，但2个不同品种仔猪组织中Hsp47含量升高的程度不同，说明二者对运输应激的敏感性不同，二花脸仔猪具有更强的抗应激能力。

重组鸡抗菌肽Gallinacin-9的原核表达及其抗菌活性的鉴定

韩宗玺;马得莹;刘胜旺;李一经

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1426-1431. doi:

摘要 ( 869 )

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采用RT-PCR方法，从鸡舌组织中扩增到Gallinacin-9（Gal-9）基因，测序表明Gal-9为201 bp，其成熟肽由67个氨基酸残基组成。进一步将克隆的Gal-9基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上，构建重组表达质粒pGEX-Gal-9，经序列分析鉴定确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，于37 ℃诱导培养不同时间，SDS-PAGE电泳表明该基因在大肠杆菌中高水平表达，表达的重组鸡Gal-9融合蛋白相对分子质量约为32 ku。重组蛋白占菌体总蛋白的40%。表达的重组鸡Gal-9融合蛋白以包涵体的形式存在。重组蛋白经纯化后，分别以对数生长中期的大肠杆菌BL21(DE3-) 株与致病性链球菌CAB株为检测菌，利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组Gal-9蛋白的抗菌活性，结果表明，重组Gal-9对这2种细菌都具有抗菌活性。

硒对妊娠早期山羊子宫局部细胞因子分泌的调节

李引乾;王建华;王爱华;靳亚平;沈文正;马勇江

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1432-1437. doi:

摘要 ( 796 )

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为了探索硒对妊娠早期子宫局部细胞因子IL-2、IL-4、TGF-β₁及TGF-β₂的调节作用，将妊娠山羊分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组山羊分别以0.3、0.5和0.7 mg/kg剂量的硒灌服亚硒酸钠溶液，对照组灌服1 mL/kg的蒸馏水，每周1次，连续3周。用ELISA试剂盒检测子宫局部细胞因子IL-2、IL-4、TGF-β₁及TGF-β₂的动态变化以观察硒对其分泌的调节作用。结果表明：（1）妊娠早期（15~19 d）山羊两侧子宫角中IL-2、IL-4、TGF-β₁及TGF-β₂水平无显著差异。妊娠早期山羊两侧子宫角的子宫液IL-2水平在15~18 d呈上升趋势，19 d时趋于下降；IL-4水平一直呈上升趋势；TGF-β₁水平较高，呈不规律变化；TGF-β₂呈现先升高、后趋于平稳的趋势。（2）灌服亚硒酸钠溶液，可以显著降低妊娠16~18 d子宫液IL-2的水平（P＜0.05或P＜0.01）；同时可显著升高IL-4的水平（P＜0.05或P＜0.01），且呈一定的剂量依赖关系。（3）0.5和0.7 mg/kg剂量组显著升高妊娠16~18 d子宫液TGF-β₁水平（P＜0.05或P＜0.01）；同时对妊娠16~17 d 子宫液TGF-β₂水平也有显著的升高作用（P＜0.05或P＜0.01），但对18 d时的TGF-β₂影响不显著。试验表明，硒对妊娠早期山羊子宫局部IL-2、IL-4、TGF-β₁及TGF-β₂的分泌具有一定的调节作用。

氟苯尼考耐药菌的构建及大肠杆菌中FloR蛋白定位

吴蓓蓓;杜向党

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1438-1441. doi:

摘要 ( 819 )

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通过对floR基因序列的分析，将扩增的包含floR基因上游调控序列及下游终止序列的约1 550 bp DNA片段克隆到pGEM-T easy载体上，成功构建了pGEM-floR质粒，将质粒转入JM109中，药物敏感性试验显示构建的pGEM-floR/JM109基因工程菌对氯霉素和氟苯尼考高度耐药，对四环素和庆大霉素敏感。本试验成功构建了一个基因背景清楚且对氟苯尼考耐药的细菌模型，排除了细菌中其他氟苯尼考耐药基因或泵出蛋白对floR基因贡献细菌耐药表型及进一步试验的影响。分别提取CVM1841、pGEMfloR/JM109、pGEM/JM109和JM109膜蛋白，运用实验室制备的鼠抗GST-FloR1抗体进行免疫印迹反应，蛋白定位显示FloR蛋白位于细菌的细胞膜上。本试验结果证实floR基因编码的蛋白位于细胞膜，并贡献细菌对氯霉素和氟苯尼考的交叉耐药性。

一次性电流型酶免疫传感技术快速检测禽流感病毒抗原

赵广英;吴淑春;王丽男;陈国斌;崔尚金

畜牧兽医学报, 2008, 39(10): 1442-1448. doi:

摘要 ( 1392 )

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为研究快速检测禽流感病毒（AIV）抗原的电化学免疫传感新技术，将HRP标记AIV抗体（HRP-anti-AIV）掺于壳聚糖中，并修饰于丝网印刷碳电极表面，制备一次性快速检测禽流感病毒抗原(AIV-Ag)电化学免疫传感器。采用一步法检测AIV-Ag和循环伏安法监测酶促反应，利用还原电流的降低率来测定样品中的AIV-Ag。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下，免疫电极线性检测范围为3.75～125 ng/mL，检出限为0.56 ng/mL (S/N=3)。该免疫传感技术具有较好的特异性、重现性(RSD＜7.10%)、稳定性(2周后电流响应为初始值的91.46%)和准确性(与ELISA符合率为91.18%)。另外，将四通道丝网印刷碳电极用于禽流感免疫传感器的制备，结果表明免疫电极的一致性有较好的改进。因此，该免疫传感技术有望用于AIV-Ag的快速检测。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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