畜牧兽医学报

猪前胸腺素的分子克隆与原核表达初步研究

林华;郭万柱;韩国全;徐志文;颜其贵;王印

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1694. doi:

摘要 ( 736 )

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应用RTPCR技术从猪肾脏中扩增到猪前胸腺素基因，测序结果表明，猪前胸腺素完整开放阅读框(ORF)共333 bp，编码109 aa，与已公布的2个猪前胸腺素基因核苷酸同源性均为99.4%。构建了重组质粒pET32mProTα，并转化大肠杆菌 (E. coli)Rosetta 2(DE3)。SDSPAGE电泳和免疫印迹分析显示，表达产物约占菌体总蛋白的40%，相对分子质量约为12.07 ku。MTT法试验证实，表达产物初步纯化、透析复性后，可明显增强淋巴细胞的增殖。

猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株感染对猪外周血免疫细胞含量的影响

万博;乔松林;张改平;叶晓敏;肖志军

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1698. doi:

摘要 ( 667 )

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采用猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）变异株HN0701和经典美洲株BJ4人工感染2月龄仔猪，通过观察发病情况、检测外周血免疫细胞和PRRSV特异血清抗体水平，研究了不同毒株PRRSV的致病特性。结果表明：PRRSV变异株感染后能够引起高热症状；变异株HN0701株感染后引起的外周血各类免疫细胞下降速度和下降程度显著高于BJ4株。提示PRRSV变异株引起机体的免疫抑制明显强于BJ4株；PRRSV特异血清抗体结果表明：变异株和BJ4株均能快速诱导机体产生抗体。

鸡胚盲肠上皮细胞原代培养与鉴定

古少鹏;王敏霞;赵素芬;郑明学

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1704. doi:

摘要 ( 714 )

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为研究鸡E.tenella的宿主细胞——盲肠上皮细胞体外培养技术，为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型，分别用胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、嗜热菌蛋白酶法、嗜热菌蛋白酶+胶原酶Ⅰ法和中性蛋白酶Ⅰ+胶原酶Ⅺ法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞，通过测定细胞活力、细胞团块比例、总细胞产量和细胞团块产量，筛选出鸡胚盲肠上皮细胞最佳分离方法，并进行了纯化和培养，对培养细胞进行了鉴定。结果表明：嗜热菌蛋白酶消化、低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞，为最佳分离和纯化盲肠上皮细胞的方法；分离纯化的细胞接种后分别于第35天、第1011天进入对数生长期，可存活14 d以上；经形态学观察、碱性磷酸酶染色、扫描电镜鉴定为盲肠上皮细胞，所分离的细胞培养至第4、7、11天时上皮细胞比例分别为81.67%、84.33%和72.00%。用该法可获得纯度较高的原代鸡胚盲肠上皮细胞。

蜜蜂抗菌肽Abaecin在枯草杆菌中的分泌表达

李丽;谯仕彦;祝发明;敖长金

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1685. doi:

摘要 ( 1051 )

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为了在枯草芽孢杆菌中分泌表达具有生物活性的Abaecin，采用重叠延伸PCR方法拼接合成含有编码Abaecin的基因及其相关调控元件的重组表达质粒pGplat。将构建的表达质粒pGplat电击转化至枯草杆菌，筛选正常生长的菌体，摇瓶发酵，取上清液冻干作为样品。通过Western blot试验检测Abaecin在枯草芽孢杆菌中的分泌表达情况。采用琼脂扩散法检测表达产物Abaecin的抑菌活性。Western blot试验结果证实在3.9 ku处有表达产物的目的条带。琼脂扩散法结果证明表达产物Abaecin对大肠杆菌、鸡沙门氏菌等革兰氏阴性菌有抑制活性。试验表明在枯草杆菌中能有效分泌表达具有生物活性的抗菌肽Abaecin。本研究结果为开发全新高效抗生素肽类药物和饲料添加剂提供了理论依据。

猪胎儿神经干细胞的分离培养和分化

郑月茂;兰志刚;赵晓娥;刘军;牛雅静

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1689. doi:

摘要 ( 690 )

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本研究旨在从猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞，观察神经干细胞生长特性和体外增殖、分化特点。利用神经干细胞培养体系，从胎龄30 d的猪胎儿脑组织中分离培养神经干细胞并诱导神经干细胞贴壁分化，采用RTPCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。结果成功分离培养出神经干细胞，神经干细胞具有分化潜能。神经干细胞中Nestin表达强阳性，βactin、 DCX、Hes1、Oct4、Desmin、CD90、Nanog和Sox2表达阳性；体外诱导的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2)。结果提示，从猪胎儿脑组织分离神经干细胞具有可行性和有效性，神经干细胞具有自我更新、增殖和分化潜能。

不同来源禽网状内皮增生病病毒株的致病性比较

孙淑红;崔治中;王辉

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1661. doi:

摘要 ( 681 )

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本研究旨在探讨不同来源的禽网状内皮增生病病毒（REV）对1日龄SPF鸡的致病性。用包括分子克隆化病毒REVC99在内的不同来源的6个REV株人工感染1日龄SPF鸡，以禽流感病毒灭活疫苗（H9AIV、H5AIV）与新城疫病毒灭活疫苗（NDV）免疫后HI抗体滴度的测定结果为指标，比较不同REV株的致病性。结果表明，分别用3 000TCID50·只1的剂量人工感染1日龄SPF鸡，6个REV感染组与对照组相比，H9AIV、H5AIV与NDV免疫后4、5与6周的HI抗体水平均极显著降低（P<0.01），但6个REV感染组之间差异不显著（P>0.05）。研究结果显示，不同来源REV株感染1日龄SPF鸡后均造成生长迟缓，并对体液免疫反应有明显的抑制作用，同时，这也揭示出REV感染可能是免疫失败的重要原因之一。

甘肃合作猪白细胞抗原经典Ⅱ类分子DR基因克隆及生物信息学分析

莫斯科;房永祥;冯海燕;景志忠

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1668. doi:

摘要 ( 1117 )

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为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原（SLA）DRA和DRB基因，分析SLADR基因特性和抗原多态性，首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RTPCR分别扩增合作猪SLADRA和SLADRB基因并进行测序，将所获得基因序列登录GenBank（登录号分别为FJ905823和FJ9058258），再用NCBI中的BLAST和ExPASy等相关软件进行生物信息学分析。发现在猪人异种移植中，近亲繁殖的合作猪种在与人类主要组织相容性复合体遗传基因水平相似性方面有一定优势，也可作为备选猪种对相关基因进行必要的修饰和改造。

高氟对雏鸡肝细胞周期和凋亡影响的研究

龚涛;陈涛;柏才敏;彭西;崔恒敏

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1680. doi:

摘要 ( 665 )

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选用300只1日龄Avian肉鸡健雏，随机分为4组，分别饲以对照日粮(F 23 mg·kg1)和高氟日粮(F 400 mg·kg1，Ⅰ组；F 800 mg·kg1，Ⅱ组；F 1 200 mg·kg1，Ⅲ组)42 d，第14、28、42天每组随机抽取5只，利用流式细胞术研究高氟对雏鸡肝细胞周期和凋亡的影响。结果显示：高氟Ⅱ组和Ⅲ组肝脏质量显著低于对照组（P<0.05），脏器指数显著高于对照组（P<0.05）。流式细胞仪测定，14日龄时高氟Ⅱ组和高氟Ⅲ组肝细胞G0/G1期极显著升高（P<0.01），S期、G2+M期和增殖指数（PI）与对照组相比不同程度地降低；28和42日龄时高氟Ⅱ组和高氟Ⅲ组肝细胞G0/G1极显著降低（P<0.01），S期和PI值显著或极显著升高（P<0.05或P<0.01），G2+M期无显著变化。14、28和42日龄时，高氟Ⅱ和Ⅲ组肝细胞同时凋亡率均极显著高于对照组（P<0.01）。日粮含氟800及1 200 mg·kg1时可引起肝细胞增殖能力增强，凋亡细胞显著增多。

交感神经对妊娠早期小鼠子宫内膜发育的影响

赵娇慧;陈耀星;王子旭;董玉兰;白永平;谢电

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1674. doi:

摘要 ( 645 )

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为了研究交感神经对小鼠妊娠早期（妊娠第1~9天）子宫内膜发育的影响，本试验采用交感神经阻断剂6羟多巴胺（6OHDA，100 mg·kg1体质量）腹腔注射成年雌性昆明小白鼠，损毁外周交感神经。利用放射免疫分析法、组织学和免疫组织化学技术，检测了小鼠妊娠早期血清17β雌二醇水平、子宫腺发育和子宫内膜细胞增殖的变化。结果显示：（1）在妊娠第1天(E1)、E5和E7 6OHDA处理组血清中17β雌二醇的含量分别降低了63.4%（P<0.01）、35.7%（P＜0.05）和25.5%（P＜0.05），而在E3和E9分别升高了79.3%（P＜0.05）和156.7%（P＜0.01）；（2）6OHDA处理降低了妊娠早期子宫腺的比例，与同期对照组相比分别下降了37.5%、38.6%、41.8%、61.4%和58.1%（P＜0.01）；（3）6OHDA处理降低了妊娠早期子宫内膜细胞的增殖，使E1、E3、E5、E7和E9子宫内膜增殖细胞分别减少了27.2%、30.2%、40.7%、27.2%和27.7%（P＜0.01）。上述结果表明，交感神经对雌激素的分泌以及妊娠早期子宫组织结构的重建具有重要的调控作用，进而调节动物早期胚胎的着床和发育。

牛IL-2重组质粒对口蹄疫病毒G-H环多肽免疫小鼠的佐剂效应

葛兰云;李勐;李爽;刘思莹;徐宗香;张润祥;高明春;马波;王君伟

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1657. doi:

摘要 ( 672 )

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本试验目的是研究牛IL2重组质粒对口蹄疫病毒 (Footandmouth disease virus, FMDV) GH环多肽免疫小鼠的佐剂效应。作者构建了含有信号肽序列的牛IL2真核表达质粒pcDNA3.1pBoIL2，并体外鉴定其表达，同时原核表达并纯化了Asia1型FMDV GH环多肽。采用不同组合的pcDNA3.1pBoIL2、FMDV GH环多肽分组免疫小鼠，并设阴、阳性对照，通过间接ELISA试验、微量血清中和试验、淋巴细胞增殖试验和实时定量PCR试验对各免疫组小鼠体液和细胞免疫水平进行综合评价。结果表明，与GH+pcDNA3.1免疫组比较，GH+pcDNA3.1pBoIL2免疫组特异性抗体水平、中和抗体滴度、淋巴细胞增殖水平和细胞因子相对表达水平显著提高（P<0.05）。结果提示，牛IL2真核表达质粒可以显著提高GH环多肽的免疫效果。

微量牛卵中H1foo CDS序列的克隆及其mRNA向卵内显微注射

云彦;吴苏君;隋进强;胡勇策;雷安民

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1637. doi:

摘要 ( 743 )

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本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件，并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1～5个）卵母细胞裂解后，用改进的RTPCR方法扩增内参βactin基因以检测该方法扩增基因的效率，结果表明单卵扩增成功率为80％以上（10/12），3个、5个卵扩增成功率均达100％。利用该体系从微量（5个）牛卵中克隆得到H1foo CDS全长序列，测序结果显示其与GenBank上公布序列同源性为100%。将牛H1foo CDS连接至pMD19T载体上，经酶切、测序鉴定正确后定向亚克隆到真核表达载体pVenus上，鉴定正确后命名为pVenusH1foo。利用脂质体2000将pVenusH1foo转染Hela细胞，24 h后通过荧光显微镜观察、RTPCR、Western Blotting分别检测表明其能够正确表达。将H1foo体外转录为mRNA后直接注射卵母细胞，其表达产物能准确定位于卵母细胞及极体的染色体上。结果，成功构建了牛H1foo真核表达载体pVenusH1foo，为研究该基因在卵母细胞成熟及早期胚胎发育过程中的作用奠定了基础。

荷斯坦母牛TLR6基因多态性及其与体细胞评分关系的研究

储明星;李春苗;石万海;安永福;陈宏权;狄冉;方丽

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1629. doi:

摘要 ( 1181 )

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本研究旨在阐明Toll样受体6（TLR6）基因的多态性与荷斯坦母牛乳房炎抗性之间的关系。采用PCRSSCP和PCRRFLP技术检测208头荷斯坦母牛TLR6基因多态性，用最小二乘法分析该基因多态性与荷斯坦母牛体细胞评分(somatic cell score，SCS)的关系。结果发现，TLR6基因mRNA序列中存在T853A、G855A、G1793A、C1859A、G1934A和A1980G 6个多态位点，其中T853A突变使编码氨基酸由缬氨酸变为谷氨酸，G855A突变使天冬氨酸变为天冬酰胺，A1980G突变使异亮氨酸变为缬氨酸。T853A和G855A突变位点经SSCP检测发现3种基因型AA、AB和BB，其频率分别为0.308、0.490和0.202；χ2检验表明荷斯坦母牛在该位点处于HardyWeinberg平衡；BB基因型SCS最小二乘均值极显著低于AB和AA基因型所对应的值（P<0.01）；AB基因型SCS最小二乘均值极显著低于AA基因型所对应的值（P<0.01）。G1793A突变位点经BsiYⅠ酶切产生2种基因型CC和CD，其频率分别为0.332和0.668；荷斯坦母牛在该位点偏离了HardyWeinberg平衡；CC和CD基因型SCS最小二乘均值差异不显著（P>0.05）。C1859A突变位点经BstXⅠ酶切产生2种基因型EE和EF，其频率分别为0.178和0.822；荷斯坦母牛在该位点偏离了HardyWeinberg平衡；EE和EF基因型SCS最小二乘均值差异不显著（P>0.05）。G1934A突变位点经BsiYⅠ酶切产生2种基因型GG和GH，其频率分别为0.356和0.644；荷斯坦母牛在该位点偏离了HardyWeinberg平衡；GG和GH基因型SCS最小二乘均值差异不显著（P>0.05）。A1980G突变位点经BclⅠ酶切产生3种基因型II、IJ和JJ，其频率分别为0.260、0.567和0.173，荷斯坦母牛在该位点处于HardyWeinberg平衡；JJ基因型SCS最小二乘均值极显著低于IJ和II基因型所对应的值（P<0.01）；IJ基因型SCS最小二乘均值极显著低于II基因型所对应的值（P<0.01）。对于奶牛乳房炎抗性，BB和JJ是有利基因型，AA和II是不利基因型。本研究结果初步表明TLR6基因T853A和G855A突变位点的B等位基因以及A1980G突变位点的J等位基因是提高奶牛乳房炎抗性的2个潜在的DNA标记。

高锌对早期断奶仔猪肠黏膜屏障和肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响

胡彩虹;钱仲仓;刘海萍;徐勇

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1644. doi:

摘要 ( 779 )

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为研究高剂量氧化锌对早期断奶仔猪肠黏膜屏障的影响并探讨其作用机理，选取54头21日龄断奶仔猪按胎次一致、体质量相近和公母各半方法分为3组，每组3个重复，每个重复6头。哺乳组仔猪继续哺乳至35日龄，基础日粮组饲喂基础日粮(110 mg·kg1锌)，高锌组饲喂基础日粮+3 000 mg·kg1锌(氧化锌)。分别于28和35日龄取样测定血浆D乳酸、内毒素含量和二胺氧化酶（DAO）活性、肠系膜淋巴结细菌移位率以及结肠内容物大肠杆菌数，并分析回肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin和ZO1的表达。结果显示：与哺乳组相比，断奶仔猪饲喂基础日粮，28日龄时血浆中D乳酸、内毒素含量和DAO活性显著升高(P<0.05)，至35日龄时，肠黏膜仍维持较高的通透性；添加高锌抑制上述3个指标的升高，进而阻止肠黏膜通透性的增加，达到与哺乳组相同的效果；与哺乳组相比，基础日粮组和高锌组在28和35日龄时均存在肠系膜淋巴结细菌移位现象，但是高锌组低于基础日粮组(P>0.05)；28日龄时，基础日粮组结肠内容物大肠杆菌数大于哺乳组(P<0.05)，与高锌组比较差异不显著(P>0.05)，35日龄时各组间差异不显著(P>0.05)；与哺乳组相比，仔猪断奶后饲喂基础日粮使Occludin和ZO1 mRNA丰度以及ZO1的表达下降(P<0.05)，高锌组Occludin和ZO1 mRNA丰度、ZO1蛋白表达均显著高于基础日粮组(P<0.05)。结论：仔猪断奶后肠黏膜通透性增加，肠上皮细胞紧密连接蛋白表达下降；而添加高剂量氧化锌可抑制细菌在肠道黏膜上的黏附，阻止上皮细胞渗透性增加,能保护肠黏膜屏障功能。

野猪CAPN10基因两个剪接变异体的克隆、序列分析和表达

杨秀芹;关庆芝;于浩;郭丽娟;刘慧;刘娣;

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1614. doi:

摘要 ( 684 )

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为了进一步研究CAPN10在肌肉生长和肉质中的作用，本研究采用RTPCR和RACE相结合的方法克隆野猪CAPN10 cDNA并进行序列分析，采用相对定量RTPCR和竞争性RTPCR方法研究该基因的表达情况。获得了野猪CAPN10的2个剪接变异体，二者前604个氨基酸完全相同，在多肽链相同位置处都存在着钙蛋白酶家族的特征性结构域和催化活性中心；相对定量RTPCR分析表明，CAPN10普遍表达于所检测的野猪12种组织内，在6、9、12月龄的肌肉组织中大白猪的表达量显著高于同一发育时期的野家杂交猪（P<0.05）；竞争性RTPCR分析表明，2个变异体都表达于所检测的野猪9种组织内。结果表明CAPN10的表达量与肌肉的嫩度可能具有一定的相关性。

内源性绵羊肺腺瘤病毒基因在蒙古羊染色体上的分布研究

柴局;齐景伟;刘淑英;张文广;赖双英;李金泉

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1620. doi:

摘要 ( 666 )

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本研究旨在探究内源性绵羊肺腺瘤病毒基因在蒙古羊染色体上的分布情况。参照已登入GenBank中的内源性绵羊肺腺瘤病毒（enJSRV，登录号为DQ838493)序列，设计合成1对引物，PCR扩增gag基因的部分片段，用地高辛标记制备探针，利用荧光原位杂交（FISH）技术检测enJSRV在蒙古羊染色体上的分布。结果表明，用enJSRV的gag基因合成的DNA探针在蒙古羊中期分裂相的6条染色体上均有杂交信号，分别为 1q45、1p23、2q41、3q23、6q13、9q22和14q25，其中在6和9号染色体上出现有较强的荧光信号。结果提示，在6和9号染色体上这2个位点上有多拷贝的enJSRV基因，1q45、1p23、2q41、3q23、和14q25拷贝数少，这与内源性绵羊肺腺瘤病毒进化有关。

利用白色杜洛克×二花脸资源家系定位影响猪肉硬实度的QTL

段艳宇;周利华;麻骏武;郭蓓丽;黄卫兵;乔瑞敏;韩鹏飞;姚飞;黄路生

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1587. doi:

摘要 ( 687 )

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为定位影响猪背最长肌和半膜肌硬实度的数量性状基因座（QTL），本研究测定了白色杜洛克×二花脸资源家系中490头F2代猪的背最长肌和半膜肌硬实度，检测了3代个体在19条染色体上194个微卫星的基因型，并据此进行了QTL定位分析。共检测到9个QTLs，包括影响背最长肌硬实度的4个QTLs，分别位于SSC1、SSC2、SSC7和SSC10，其中SSC1和SSC7 的QTLs达到1%基因组显著水平；影响半膜肌硬实度的5个QTLs分别位于SSC1、SSC7、SSC10、SSC12和SSC14，其中SSC7和SSC14 的QTLs分别达到5%和1%基因组显著水平。

酵母双杂交筛选猪Calsarcin3基因相互作用蛋白的研究

陈大雷;朱文娟;杨述林;杨连玉;崔文涛;储明星;马月辉;李奎

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1599. doi:

摘要 ( 705 )

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旨在研究猪Calsarcin3（CS3）基因及其互作蛋白对肌细胞钙离子的调控作用，了解快慢肌纤维分化和转化的分子机理。从猪的骨骼肌组织样中提取mRNA，合成并纯化双链cDNA；然后用长白猪的Calsarcin3基因构建既无自激活活性又无毒性的pGBKT7CS3诱饵载体；最后通过酵母双杂交系统的杂交方法筛选与Calsarcin3相互作用的蛋白，在GenBank中对相互作用基因进行比对分析，分析Calsarcin3在骨骼肌中的功能。通过筛选，共筛选出5个与Calsarcin3基因互作的蛋白，其中，重要的蛋白有帽蛋白Zβ(CAPZB)、肌联蛋白(TTN）和α肌动蛋白1(ACTA1)。结果提示，CAPZB可能与Calsarcin3共同作用参与尖锐端肌动蛋白丝戴帽；ACTA1可能与Calsarcin3共同作用作为一种收缩蛋白在骨骼肌的活动中发挥重要作用；TTN能与Calsarcin3结合参与维持Z线结构的稳定。

猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达

张晓玮;;崔文涛;伍晓雄;杨述林;牟玉莲;唐中林;李奎

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1593. doi:

摘要 ( 784 )

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本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因，构建真核定点诱变载体，并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板，PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因，扩增产物进行克隆、测序。再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFPN1表达载体上。通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸，获得定点诱变载体pEGFP()N1ProMstnD76A，并瞬时转染C2C12细胞。转染48 h后，通过RTPCR和Realtime PCR方法检测目的基因的表达情况。结果表明：本研究成功克隆了通城猪含第1个内含子的MSTN前肽基因，并对该基因进行定点诱变修饰，构建了真核表达载体，转染后其前体mRNA能在C2C12细胞中进行正确剪接，目的基因mRNA表达水平较高。这为猪MSTN前肽基因在体内表达的研究奠定基础，并为制备转基因猪提供有用的分子材料。

猪SP-A基因启动子区的克隆与序列分析

陈书明;晋大鹏;王立贤;张龙超;颜华;程笃学

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1608. doi:

摘要 ( 713 )

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为了探明猪SPA基因的启动子及其转录调控机制，设计6条特异性引物，采用染色体步移、克隆测序以及序列比对分析，从大白猪基因组中扩增出一段长度为1 033 bp的猪SPA 基因的上游序列 (DQ985806)，其GC含量约为55%。经过生物信息学分析，确定了其转录起始位点及活性区域；发现在转录起始位点上游-33 bp处存在1个TATAbox，另外还发现了GCbox、CAATbox、GTbox以及转录起始子；该序列还包含Sp1、TF和 NFκB 等转录因子结合位点以及1个特殊重复序列5′ CATCACTGT3′。上述试验结果表明，所克隆的1 033 bp的DNA序列是大白猪SP-A 基因的启动子区序列。

宰前休息方式对猪福利、血液成分及肉质的影响

柴进;彭健;熊琪;张昌新;缪文;李凤娥;郑嵘;蒋思文

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1650. doi:

摘要 ( 1160 )

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选取体质量约为100 kg、氟烷基因型为NN的长×大二元杂交猪60头，随机分为3组:不休息组，休息3 h组，休息3 h＋玩具组，公母各半。根据评分标准分别记录休息过程中猪的精神状况。放血时收集血样，用于分析血浆中皮质醇、促肾上腺皮质激素（ACTH）浓度，乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性，乳酸、血糖浓度；添加EDTAK2抗凝剂的血样用于血细胞分析。同时在放血时，测定血温。屠宰后，测定背最长肌24 h滴水损失；背最长肌（LM）、半膜肌（SM）45 min以及24 h的pH、色值、导电率。结果表明：①休息3 h＋玩具组在3个时间段的精神评分要极显著高于休息3 h组，随着时间的延长猪都表现出趋于平静的趋势；②休息3 h+玩具组和休息组3 h组在皮质醇、促肾上腺皮质激素要显著低于不休组（P＜005），相反乳酸脱氢酶、肌酸激酶要显著高于不休息组（P＜005），而休息3 h+玩具组与休息3 h组差别不显著（P＜005）； ③3个休息处理组在肉质指标上没有出现显著差别（P＜005）；④休息3 h＋玩具组、休息3 h组在红细胞数（RBC）、血红蛋白含量（HGB）均要显著低于不休息组（P＜005）；休息3 h＋玩具组在白细胞数（WBC）上显著高于不休组（P＜005）；休息3 h组的淋巴细胞绝对值（WSCC)显著高于不休息组（P＜005）；而休息3 h＋玩具组与休息3 h组在所有的免疫指标上都没有显著差异（P>005）。根据上述的结果显示，宰前一定要让猪有一个休息的过程，这种措施能有效缓解猪的应激，并能恢复其免疫能力；在休息的过程中，添加部分福利玩具，至少对猪的精神状态有明显的好处。

猪生长分化因子11的原核表达及抗体制备

孙琳琳;孙亿;臧丽;姜运良

畜牧兽医学报, 2009, 40(11): 0-1581. doi:

摘要 ( 741 )

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本研究旨在获得猪GDF11的特异性抗体，以便于进一步研究猪GDF11的功能。对猪GDF11的编码区进行了克隆、表达载体的构建和转化、原核诱导表达和纯化以及将GDF11注射到小鼠中并分离抗体。从猪胚肾中分离总RNA，经RTPCR扩增得到猪GDF11基因的编码区，插入pMD18T载体中。再经限制性内切酶BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切，将回收的GDF11酶切片段插入原核表达载体pGEX4T2中，获得重组原核表达质粒pGEX4T2GDF11。重组质粒经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导产生了65 ku的GSTGDF11融合蛋白。融合蛋白经凝血酶酶切，分离纯化出42 ku左右的GDF11蛋白；然后注射小鼠，制备了多克隆抗体，其滴度最高可达1∶25 600，而且特异性好，表明得到了猪GDF11的多克隆抗体。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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