畜牧兽医学报

大白猪骨桥蛋白基因的克隆、表达及功能分析

张冬杰;刘娣;汪晓鸿;杨国伟

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 965-970. doi:

摘要 ( 740 )

HTML( )

PDF (2414KB) ( 768 )

相关文章 | 多维度评价

应用RTPCR方法克隆了全长909 bp的大白猪Osteopontin（OPN）基因。运用生物信息学工具进行的分析显示：OPN蛋白一级结构中天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸所占比例最高，含有特异的ArgGlyAsp序列（RGD），二级结构中α螺旋占很大比例，并且亲水性较强，OPN信号标签位于第一个同源区，共有的保守性序列为［KQ］x［TA］x(2)［GA］SSEEK。基于蛋白序列所构建的2个分子进化树均表明猪与牛的亲缘关系最近，而与鸡最远。在mRNA水平上，OPN基因在猪体各组织中广泛表达，胃、肾、肺、小肠和卵巢相对较高，而心、脾和大肠则相对较低；在蛋白水平上，不同组织内该蛋白的大小不同，出现了70 ku，70和45 ku，70 、45和24 ku 3种蛋白。

控制近交和世代离散情况下多性状、多QTL的最优化选择

唐国庆;李学伟;朱砺;李明洲;帅素容

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 971-977. doi:

摘要 ( 766 )

HTML( )

PDF (472KB) ( 529 )

相关文章 | 多维度评价

在世代离散的情形下，应用计算机随机模拟技术研究当候选个体的遗传贡献和施加给QTL的相对权重一起被最优化时，使用多性状、多QTL信息的QTL优化选择所能获得的潜在的额外遗传优势。用一个实际育种猪群的参数进行模拟，选择是直接针对窝产活仔数和达100 kg日龄进行，每个性状都有2个不同效应大小的QTL正在和相应的多基因一起分离。将优化QTL选择与标准QTL选择和常规BLUP选择进行比较发现，综合了遗传贡献优化和QTL相对权重优化的QTL优化选择在固定的近交速率下能增加更多的遗传反应，同时避免了短期和长期选择反应之间的矛盾。

鸡Mx基因的克隆与原核表达

尹春光;杜立新;李善刚;魏彩虹;刘涛;李宏滨;赵桂平

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 978-981. doi:

摘要 ( 717 )

HTML( )

PDF (507KB) ( 584 )

相关文章 | 多维度评价

本研究旨在通过克隆鸡Mx全基因序列进而进行该基因的原核表达，获得具有生物学活性的蛋白。利用poly I:C诱导鸡胚成纤维细胞Mx基因表达，克隆了Mx基因全长cDNA序列，将开放阅读框（ORF）连接构建于表达质粒pGEX4t2中获得重组表达载体pGEXMx,转化Rosetta(DE3)菌株，经IPTG诱导后检测。表达产物检测显示该蛋白的相对分子量为75 ku。说明获得了Mx基因的高效表达，为进一步进行Mx基因的活性检测以及利用Mx蛋白进行抗病毒转基因的研究奠定了基础。

寿光鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶ADSL基因的表达与克隆化细胞株的筛选

刘长青;;张洪海;文杰;马月辉;关伟军;唐学玺

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 982-991. doi:

摘要 ( 740 )

HTML( )

PDF (4581KB) ( 716 )

相关文章 | 多维度评价

利用RTPCR与RACE方法检测寿光鸡心、肝、脾、肺、肾、脑、腿肌与胸肌8种组织腺苷酸琥珀酸裂解酶（ADSL）基因mRNA的差异表达水平，构建ADSL基因融合表达载体pGEXADSL，转化大肠杆菌BL21（DE3）,筛选阳性克隆，IPTG诱导表达，通过构建真核表达载体pEGFPADSL，利用脂质体介导法转染寿光鸡成纤维细胞，并进行阳性细胞的克隆化筛选与检测。结果表明：ADSL基因开放阅读框序列长为1 455 bp，编码485个氨基酸；5′端非转录调控区具有典型管家基因的特征，在邻近起始密码子－28 bp处发生C→T突变，该突变使该位点变为核呼吸因子2（NRF2）结合位点；经SDSPAGE电泳显示，pGEXADSL重组融合蛋白在分子量约为805 ku处有特异的蛋白条带出现，与预期分子量大小一致，等电点为679，纯化后用Westernblot检测为寿光鸡ADSL蛋白。pEGFPADSL转染寿光鸡成纤维靶细胞后24、48和72 h，转染率在264％～412％之间，绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中，随表达量的增加，绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状，经药物筛选和克隆化培养，获得表达pEGFPADSL融合蛋白的阳性克隆细胞株，经RTPCR扩增与Westernblot检测确认ADSL融合蛋白基因已经整合到寿光鸡成纤维细胞的基因组中，获得正常表达。研究结果为揭示我国优良地方鸡种的风味基因结构，研究其生物学功能奠定基础。

鹅IDH1基因的分离、序列分析及表达特征研究

赵阿勇;陈国宏;卢立志;周圻

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 992-998. doi:

摘要 ( 737 )

HTML( )

PDF (567KB) ( 540 )

相关文章 | 多维度评价

为阐明鹅肥肝形成的机制，使用mRNA差异显示技术研究朗德鹅和溆浦鹅在超饲养和正常饲养条件下肝脏基因表达差异。基因IDH1被证实在2个品种鹅肝脏中表达受到显著抑制（P<005）。结果，得到了该基因1 269 bp的CDS序列，与鸡IDH1有95%的同源性。序列分析表明，该序列含有1个1 248 bp的开放读码框（ORF），编码含415个氨基酸的蛋白质，该蛋白质序列存在1个保守结构域Icd，与其它物种该蛋白的同源性分别为：鸡99%、大鼠89%、人90%、猿90%、牛88%、小鼠88%。应用生物信息学的方法对该蛋白质的功能和结构进行了分析。组织表达分析表明，鹅IDH1基因在肝脏中表达丰富，在脾、肾和肌胃中中等表达，在其它组织中表达量较低。研究结果显示，超饲可以抑制鹅肝脏IDH1基因mRNA的表达。

牦牛生长分化因子9基因cDNA克隆及序列分析

尹荣华;字向东;马志杰;陈绍威;张大伟;梁冠男

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 999-1006. doi:

摘要 ( 783 )

HTML( )

PDF (5089KB) ( 783 )

相关文章 | 多维度评价

根据GenBank中普通牛生长分化因子9（GDF9）基因序列(AF 307092)设计1对引物，以麦洼牦牛卵母细胞总RNA为模板，通过RTPCR技术对牦牛GDF9基因cDNA进行克隆测序和序列分析。结果表明：所克隆的1 399 bp片段为预期的牦牛GDF9基因cDNA序列，包含由2个外显子组成的全编码区和3′下游部分序列。牦牛GDF9基因编码区核苷酸序列长度为1 362 bp，编码453个氨基酸，与GenBank中报道的普通牛、水牛、绵羊、山羊相应序列一致，而与人和黑猩猩存在差异。和普通牛相比，牦牛GDF9基因编码区存在1处碱基转换（C→T），导致相应的氨基酸由丙氨酸（A）转换为缬氨酸（V）。牦牛与普通牛、水牛、绵羊、山羊、人和黑猩猩的核苷酸同源性分别为999％、984%、970%、968%、856%和851%；氨基酸同源性分别为998％、971％、951％、954％、794％和795％。利用NJ法和MP法以该基因编码区核苷酸序列构建的物种间分子系统进化树结果基本一致，即牦牛与普通牛先聚为一类，再与水牛聚为一类，而后与绵羊和山羊聚为一类，最后与人和黑猩猩聚为一类。该聚类结果与物种间遗传距离大小一致，也与各物种在动物学上的分类相吻合，表明GDF9基因编码区适用于构建物种间系统进化树。

TSA处理供体细胞对组蛋白乙酰化和核重编程效果的影响

张东;杨鹭;王勇胜;刘根胜;刘利杰;万敏;张涌

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1007-1012. doi:

摘要 ( 1098 )

HTML( )

PDF (1363KB) ( 775 )

相关文章 | 多维度评价

克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因。试验中以第5代牛胎儿成纤维细胞作为供体核，以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植，用75 nmol·L-1曲古抑菌素A（Trichostatin A， TSA）分别处理供体细胞6、12和24 h，通过核移植检测克隆胚胎发育率，并应用激光共聚焦显微镜技术和流式细胞术检测处理细胞和克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平和细胞周期。结果显示：随着TSA处理时间的延长，供体细胞组蛋白H3K18乙酰化水平不断提高；以75 nmol·L-1TSA处理供体细胞12 h 的克隆胚的囊胚发育率显著高于未处理组(235 % vs 157 %，P＜005)；供体细胞经TSA处理的克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平与未处理组相比差异不显著(P＞05)；处理组和对照组细胞G0/G1期和S期比例间存在显著差异（P<005）。结论：TSA对核供体细胞的处理存在时间效应，75 nmol·L-1TSA处理12 h的牛胎儿成纤维细胞更易被卵母细胞重编程，显著提高了克隆胚的体外发育能力，初步证实TSA是通过提高供体细胞组蛋白乙酰化水平来促进供体细胞重编程的。

SelW基因转录后沉默对小鼠骨骼肌细胞内GSH及GPx影响研究

王晓龙;许凯;秦藕菊;杨传平

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1013-1018. doi:

摘要 ( 991 )

HTML( )

PDF (416KB) ( 484 )

相关文章 | 多维度评价

通过降低骨骼肌细胞内硒蛋白W的表达，考察其对GSH和GPx的影响，针对个别研究结果与生物信息学研究结果矛盾的焦点深入研究。利用RNAi敲除小鼠骨骼肌细胞中SelW基因，经定量PCR和Western blotting鉴定后，进行WST、GSH含量和GPx活力检测。结果表明，RNAi后目的基因mRNA和蛋白表达量降低了719%和688%。WST检测结果显示阳性组比对照组下降了215%；GSH、GPx检测结果显示阳性组比对照组分别增加了2976%和4758%。结果显示，SelW敲除引发细胞的毒性作用，并导致GSH和GPx代偿性增高，与生物信息学关于SelW具有抗氧化功能的研究结果相互验证。

日粮能量水平对肥育猪肌内脂肪含量、肌内和皮下脂肪组织脂肪酸组成的影响

徐海军;;都文;李亚君;汤文杰;刘志强;谭碧娥;孔祥峰;黄瑞林;刘玉兰;印遇龙;

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1019-1027. doi:

摘要 ( 794 )

HTML( )

PDF (404KB) ( 732 )

相关文章 | 多维度评价

以添加豆油方式提高日粮能量水平，研究其对肥育猪肌内脂肪（IMF）含量、肌内和皮下脂肪的脂肪酸组成的影响。36头杜长大母猪(平均体质量约40 kg)随机平均分为3组，分别饲喂3种能量水平（DE=1282、1424、1566 MJ·kg-1，主要以添加豆油来提高日粮能量水平）的日粮。达到屠宰体质量（约90 kg）时每组屠宰5头，采取背最长肌和背部皮下脂肪，测定背最长肌IMF含量、肌内和皮下脂肪组织的脂肪酸组成。结果表明：不同能量水平日粮对IMF含量影响不显著(P>005)；肌内和皮下脂肪的大部分饱和脂肪酸（SFA）和单不饱和脂肪酸（MUFA）含量随着日粮能量水平的提高而显著下降(P<005)，大部分多不饱和脂肪酸(PUFA)含量随着日粮能量水平的提高而显著增加(P<005)；IMF中PUFA（包括C18∶3n6、C20:0、C20∶4n6、C22∶5n3）和C24∶1的含量与IMF含量呈显著负相关；肌内和皮下脂肪组织中的大部分脂肪酸呈显著正相关，而少数脂肪酸（包括C18∶3n6、CLAc9t11、C20:0、C20:4n6、C22:5n3和C24:1）在2个组织中没有显著相关性；总体上看，2组织中的SFA、MUFA之间呈显著正相关，与PUFA呈显著负相关，PUFA之间呈显著正相关。本研究表明以添加豆油的方式提高日粮能量水平可以在不降低IMF含量的前提下改善猪肉的脂肪酸组成，从而提高猪肉的营养价值而不降低肉质。

瘤胃灌注乙丙酸不同摩尔比混合挥发性脂肪酸对奶山羊乳脂合成的影响

程光民;林雪彦;李福昌;陈凤梅;王中华;刘建胜;伏桂华

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1028-1036. doi:

摘要 ( 834 )

HTML( )

PDF (447KB) ( 720 )

相关文章 | 多维度评价

4只安装永久性瘤胃瘘管和颈动脉插管的泌乳中后期文登奶山羊，采用4×4拉丁方试验设计，试验处理为瘤胃连续灌注4种不同比例的混合挥发性脂肪酸（VFA）溶液，4种灌注液的乙酸/丙酸/丁酸摩尔比依次为：75∶15∶10（VFA1），65∶25∶10（VFA2），55∶35∶10（VFA3）和45∶45∶10（VFA4）。日粮（精粗比为45∶55）制作为颗粒料，每2 h自动饲喂1次，瘤胃灌注的VFA按奶山羊维持需要的30%确定。研究表明，灌注液对奶产量、乳糖的影响不显著（P>005），高丙酸灌注组乳脂率、乳脂量显著下降（P<005）；血浆胰岛素水平呈上升趋势（P>005），血糖浓度处理间无显著变化（P>005）。随灌注液丙酸摩尔比的升高,颈动脉血浆乙酸、NEFA、BHBA浓度下降（P<005），丙酸浓度上升（P<005）,TG和丁酸浓度组间差异不显著（P>005）；动脉血浆BHBA、NEFA、TG和丁酸的乳腺吸收率降低（P<001），丙酸的乳腺吸收率升高（P<001），乙酸的乳腺吸收率未出现显著变化（P>01）。随灌注液丙酸摩尔比的升高，乳脂中中链脂肪酸（C10C16）和中短链脂肪酸（C4C16）的含量呈上升趋势（P＜005），长链脂肪酸（≥C16）的含量呈下降趋势（P<005），其中VFA1组C10C16及C4C16含量均低于其它3组（P<005），≥C16含量显著高于其它3组（P<005）；Trans10,cis12CLA无显著变化（P>005）。研究结果表明，提高瘤胃灌注VFAs混合液的丙酸摩尔比可引起乳脂率的降低，抑制乳腺对NEFA的吸收，增加乳脂中C4C16脂肪酸的比例,降低≥C16脂肪酸的比例。4只安装永久性瘤胃瘘管和颈动脉插管的泌乳中后期文登奶山羊，采用4×4拉丁方试验设计，试验处理为瘤胃连续灌注4种不同比例的混合挥发性脂肪酸（VFA）溶液，4种灌注液的乙酸/丙酸/丁酸摩尔比依次为：75∶15∶10（VFA1），65∶25∶10（VFA2），55∶35∶10（VFA3）和45∶45∶10（VFA4）。日粮（精粗比为45∶55）制作为颗粒料，每2 h自动饲喂1次，瘤胃灌注的VFA按奶山羊维持需要的30%确定。研究表明，灌注液对奶产量、乳糖的影响不显著（P>005），高丙酸灌注组乳脂率、乳脂量显著下降（P<005）；血浆胰岛素水平呈上升趋势（P>005），血糖浓度处理间无显著变化（P>005）。随灌注液丙酸摩尔比的升高,颈动脉血浆乙酸、NEFA、BHBA浓度下降（P<005），丙酸浓度上升（P<005）,TG和丁酸浓度组间差异不显著（P>005）；动脉血浆BHBA、NEFA、TG和丁酸的乳腺吸收率降低（P<001），丙酸的乳腺吸收率升高（P<001），乙酸的乳腺吸收率未出现显著变化（P>01）。随灌注液丙酸摩尔比的升高，乳脂中中链脂肪酸（C10C16）和中短链脂肪酸（C4C16）的含量呈上升趋势（P＜005），长链脂肪酸（≥C16）的含量呈下降趋势（P<005），其中VFA1组C10C16及C4C16含量均低于其它3组（P<005），≥C16含量显著高于其它3组（P<005）；Trans10,cis12CLA无显著变化（P>005）。研究结果表明，提高瘤胃灌注VFAs混合液的丙酸摩尔比可引起乳脂率的降低，抑制乳腺对NEFA的吸收，增加乳脂中C4C16脂肪酸的比例,降低≥C16脂肪酸的比例。

2005-2008年浙江省生猪主产区猪戊型肝炎血清流行病学调查

帅江冰;张晓峰;徐晶靓;陈宁;方维焕

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1037-1042. doi:

摘要 ( 1034 )

HTML( )

PDF (618KB) ( 721 )

相关文章 | 多维度评价

本研究旨在建立检测猪戊型肝炎病毒（HEV）感染的间接ELISA方法，并将其用于分析浙江省生猪主产区猪群的HEV感染状况。首先人工合成并原核表达了HEV ORF2蛋白的主要抗原表位区，免疫印迹显示表达产物对HEV抗体阳性的猪血清具有良好的反应性。以此纯化蛋白为包被抗原建立了猪血清中HEV特异性抗体的ELISA检测方法，检测结果显示其与商品化HEV抗体诊断试剂盒的检测符合率达915％。对2005-2008年采集自浙江省不同地区46个猪场的1 330份血清进行了检测，有741份血清检测为猪HEV抗体阳性，平均阳性率为557%。其中2005和2006年HEV抗体阳性率分别为627% (175/279)和614%（301/490），明显高于2007年的431%（59/137）和2008年的486%（206/424）。同时，66-100日龄中猪的血清HEV抗体阳性率（582%，110/189）显著高于30-65日龄小猪（397%，73/184）和101-160日龄大猪（441%，83/188）。从猪场水平来看，仅有3个猪场未检测到HEV抗体，场阳性率932%。结果表明本研究建立的ELISA方法切实可行，检测结果显示浙江省猪场中HEV感染相当普遍。

绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA转录水平研究

乔俊文;苏晓鸥;王伊琴;周向梅;杨建民;尹晓敏;马李颖;赵德明

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1043-1047. doi:

摘要 ( 1117 )

HTML( )

PDF (430KB) ( 501 )

相关文章 | 多维度评价

本研究旨在检测绵羊组织中朊病毒受体37kDa/67kDa LRP/LR mRNA水平并探讨其与朊病毒组织嗜性的关系。选用背景相似的6只内蒙绵羊，提取组织RNA，反转录RTPCR构建cDNA模板；利用本研究前期构建的标准质粒及标准曲线，对组织中该受体mRNA水平进行Realtime（实时）荧光定量PCR检测。结果表明，大脑皮质中的受体表达水平最高(P<005)，其次为心脏和脑干，中等表达的器官依次为海马、小脑、脾脏、丘脑、肠系膜淋巴结、肝脏和肾脏，表达量最低为肺脏(P<005)。结果提示，朊病毒受体——37kDa/67kDa LRP/LR在绵羊各组织中的表达量高低与朊病毒的复制程度有一定的相关性，受体LRP/LR表达量较高的区域朊病毒复制水平相对较高。结果提示朊病毒入侵机体后，组织器官PrPSc聚集程度可能与受体37kDa/67kDa LRP/LR表达水平相关。

纹身法免疫增强DNA疫苗免疫效果的评价

曾伟伟;石星明;黄婷婷;王玫;高宏博;孙妍;李继松;王云峰

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1048-1053. doi:

摘要 ( 1095 )

HTML( )

PDF (1145KB) ( 716 )

相关文章 | 多维度评价

为评价不同DNA 免疫方法（皮内穿刺、肌肉注射）对DNA疫苗免疫效果的影响，将自行构建的表达传染性喉气管炎病毒gJ基因的真核表达载体pCDNA3.1gJ和表达新城疫病毒F基因的真核表达载体pVAX1F通过普通注射器裸DNA肌肉注射和纹身器皮下裸DNA纹身法投递，分别免疫BALB/c小鼠和SPF鸡，三免后2周用NDV强毒株进行攻毒。采集免疫后小鼠和鸡的血清，ELISA法检测抗体水平，并计算鸡攻毒后保护率，来评价这2种免疫途径的免疫效果。结果表明，纹身法皮下投递诱导的特异性免疫应答抗体水平显著高于DNA肌肉注射的抗体水平，而且通过纹身法投递质粒二免后产生的抗体水平显著高于肌肉注射三免后的抗体水平。此外，通过纹身法投递50 μg质粒产生的抗体水平高于同一时期通过肌肉注射100 μg质粒产生的抗体水平；攻毒试验表明，和肌肉注射免疫相比，纹身法皮肤免疫的免疫保护效果更佳。以上结果表明，纹身法皮下投递DNA疫苗，能诱导产生更强大的免疫应答，而且还是一种经济实用的方法，它将满足实验室条件下产生更快更强大免疫应答的需要，也为今后DNA疫苗免疫方法和途径研究提供新的思路。

猪水肿毒素单抗竞争ELISA试剂盒的研制及应用

张建民;吴斌;赵战勤;卢顺;何华;向敏;李利娅;张福涛;陈焕春

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1054-1058. doi:

摘要 ( 1006 )

HTML( )

PDF (412KB) ( 591 )

相关文章 | 多维度评价

本研究旨在建立猪水肿毒素抗体的快速检测方法。以纯化的猪水肿毒素A亚基基因片段的原核表达产物作为抗原免疫BALB/c小鼠制备单抗，并利用表达蛋白和猪水肿毒素A亚基单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测猪水肿毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为032 μg·mL-1，待检血清最佳稀释度为1∶2，酶标单抗工作浓度为1∶3 200，血清抑制率大于40%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对60份血清进行猪水肿毒素抗体检测，竞争ELISA的检出率为338%，细胞毒性中和试验检出率为309%，两者符合率达882％。试验结果表明，该ELISA方法特异性强，敏感性高，稳定性和重复性好，操作简便。本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪水肿病疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有较高的应用价值。

羊布鲁氏菌16M基因组分泌蛋白的生物信息学分析

杨羽;吴清民

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1059-1062. doi:

摘要 ( 678 )

HTML( )

PDF (624KB) ( 791 )

相关文章 | 多维度评价

对羊布鲁氏菌全基因组16M中全部3 197个氨基酸序列进行生物信息学分析。利用SignalP和TatP软件分析N端信号肽，结果显示具有N端信号肽的序列有288个；继而用TMHMM和Phobius软件对这288个序列进行跨膜区预测，得到不含跨膜区的蛋白208个；最后利用LipoP对这208个蛋白进行分类，得到具有信号肽的蛋白191个。使用SecretomeP软件对被预测为无信号肽的蛋白质进行分析，结果显示有391个可能通过非经典途径分泌。由于分泌蛋白在细菌的致病过程中起着重要作用，而布鲁氏菌基因组编码的大多数蛋白的功能尚未确定，因此分析和预测布鲁氏菌的分泌蛋白可为更完整地、系统地研究布鲁氏菌的分子致病机理提供非常重要的信息。

牛泰勒虫18S rRNA基因序列比较研究

刘爱红;关贵全;刘军龙;李有全;马米玲;牛庆丽;任巧云;殷宏;罗建勋

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1063-1068. doi:

摘要 ( 806 )

HTML( )

PDF (409KB) ( 548 )

相关文章 | 多维度评价

作者对中国兽医微生物菌种保藏中心原虫资源库内收藏的3种牛源泰勒虫10个地方分离株(包括4 株环形泰勒虫、3株瑟氏泰勒虫和3株中华泰勒虫) 的18S rRNA 基因序列进行了测定，并用所测得的牛的泰勒虫中国株基因序列和自 GenBank下载的各种泰勒虫 18S rRNA 基因序列构建了系统发生树。结果显示：牛的3种泰勒虫18S rRNA 基因大小在 1 740～1 890 bp，并有规律地分布于3个不同的进化枝上，且种内地方分离株之间的同源性明显大于种间同源性，说明采用18S rRNA 基因序列测定方法对牛的泰勒虫进行分类与传统分类方法具有较好的符合性。该研究也可为建立针对18S rRNA 基因为靶标的牛的泰勒虫病PCR检测方法奠定基础。

1株H5N1亚型高致病力禽流感病毒人工感染鸭的细胞凋亡观察

李玉谷;叶远兰;崔聪颖;周泉鹤;张媛;马勇江;李楚宣

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1069-1073. doi:

摘要 ( 724 )

HTML( )

PDF (2342KB) ( 634 )

相关文章 | 多维度评价

TUNEL染色法和透射电镜观察表明，鸭静脉接种或眼-鼻-口腔-泄殖腔混合接种高致病力禽流感病毒A/duck/Guangdong/220/2004（H5N1）后，心、肝、脾、肺、肾、胰、肠、脑、胸腺和法氏囊均可发生细胞凋亡。其中，凋亡主要发生在胰腺泡上皮细胞、肾小管上皮细胞、肝细胞和肠黏膜上皮细胞；也有少量神经元、神经胶质细胞、心肌细胞、呼吸毛细管上皮细胞，胸腺、脾脏和法氏囊淋巴细胞发生凋亡。

猪扁桃体的解剖学与组织学研究

刘志学;杨倩

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1074-1081. doi:

摘要 ( 1232 )

HTML( )

PDF (3911KB) ( 912 )

相关文章 | 多维度评价

扁桃体位于消化、呼吸道的开口处，对于机体的免疫防御有着重要作用。本试验对15头5月龄猪扁桃体的解剖位置、组织形态和超微结构进行了研究。结果发现：猪的扁桃体由软腭扁桃体、会厌两侧扁桃体、咽鼓管扁桃体和咽扁桃体组成。软腭扁桃体和会厌两侧扁桃体位于口咽通道，黏膜上皮为复层鳞状上皮，上皮凹陷形成许多隐窝，上皮下分布有大量的胶原纤维。扁桃体的实质部分主要由大量的淋巴小结和弥散淋巴组织构成。此外，在弥散淋巴组织中分布有较多的由立方上皮构成的毛细血管后微静脉。咽鼓管扁桃体和咽扁桃体分布于鼻咽通道，咽扁桃体位于鼻咽的顶部，咽鼓管扁桃体则分布于咽鼓管与鼻咽通道交界处的周围，二者相互延伸，甚至相连。咽鼓管扁桃体和咽扁桃体的上皮主要由几层扁平上皮组成，上皮层数较少，部分区域只有单层细胞，上皮细胞间隙较大，其中分布有少量淋巴细胞。紧贴在上皮下面为大量淋巴组织，主要是由淋巴小结以及周围的弥散淋巴组织组成。有些淋巴小结与黏膜上皮相连。本研究结果表明：猪的咽扁桃体和咽鼓管扁桃体的结构非常有利于抗原的捕捉和递呈，可为呼吸道免疫提供充分的理论依据。

维拉帕米对肉鸡腹水综合征患鸡心肌细胞cfos和cjun表达的影响

利凯;;马利芹;徐彤;;王建琳;王慧钰;乔健

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1082-1087. doi:

摘要 ( 713 )

HTML( )

PDF (1949KB) ( 541 )

相关文章 | 多维度评价

右心肥大衰竭是导致腹水综合征（ascites syndrome, AS）患鸡发病的重要因素。作者通过免疫组化和原位杂交技术初步探讨cfos 和cjun在AS肉鸡右心肥大和衰竭过程中的变化及维拉帕米对其表达的影响。结果发现：在22、29、36、43和50日龄时，与对照组肉鸡相比，低温组肉鸡右心室心肌细胞cfos/cjun蛋白和mRNA的平均光密度值显著或极显著（P<005；P<001）升高，其mRNA的阳性面积百分比也极显著升高（P<001）；与低温组肉鸡相比，维拉帕米组肉鸡右心室心肌细胞cfos/cjun蛋白和mRNA的平均光密度值显著或极显著（P<005；P<001）降低，其mRNA的阳性面积百分比也极显著降低（P<001）。结果表明cfos和cjun癌基因在右心肥大和衰竭中起着重要作用。维拉帕米可有效抑制cfos和cjun癌基因的表达，有利于防止右心肥大和功能性衰竭。

猪肠道菌氨基糖苷类药物耐药基因分析

陈琳;刘健华;张俊丰;陈杖榴;曾振灵

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1088-1096. doi:

摘要 ( 752 )

HTML( )

PDF (509KB) ( 624 )

相关文章 | 多维度评价

为调查和分析猪肠道菌的氨基糖苷类药物耐药机制，用PCR及序列分析方法检测鉴定2个猪肠道菌中4种16S rRNA甲基化酶耐药基因rmtA、rmtB、rmtC和armA和10种氨基糖苷钝化酶基因，用接合试验研究rmtB基因和10种氨基糖苷钝化酶基因的水平转移机制，用微量稀释法测定携带rmtB基因的分离菌及其接合子对20种抗菌药物的敏感性。结果，从分离的152株猪肠道菌中共检测到49株(323%)rmtB阳性菌，其中48株为大肠埃希氏菌，1株为阴沟肠杆菌，未检出其它16S rRNA甲基化酶编码基因。49株rmtB阳性菌中检测到7种氨基糖苷类钝化酶基因，检出率从高到低依次是aac(3)Ⅱ(878%)、aph(3′)Ⅶ (796%)、aph(3′)Ⅱ(776%)、aadA1 (347%)、aac(6′)Ib (143%)、aac(3)Ⅳ (102%) 和aph(4)Ⅰ(82%)。46株rmtB阳性菌可以通过接合试验将rmtB、aac(3)Ⅱ、aph(3′)Ⅶ、aph(3′)Ⅱ和aadA基因传递给受体菌E.coli C600和E.coli 488 Rifr，接合率从30×10-6～46×10-13不等。所有rmtB阳性菌株及其接合子对卡那霉素、阿米卡星、妥布霉素、西梭米星、萘替米星、庆大霉素6种氨基糖苷类抗生素均高度耐药(MIC≥512 μg·mL-1)。研究结果表明，rmtB基因和氨基糖苷钝化酶基因广泛存在于两猪场，它们共同介导猪源肠道菌对庆大霉素、阿米卡星等氨基糖苷类药物的高度耐药。 rmtB基因与aac(3)Ⅱ、aph(3′)Ⅶ、aph(3′)Ⅱ和aadA基因位于同一接合性质粒上，共同传播氨基糖苷类的耐药性。

替米考星明胶微球在兔体内的靶向性研究

远立国;李成明;鲍杰;朱理想;张秀英

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1097-1100. doi:

摘要 ( 760 )

HTML( )

PDF (351KB) ( 669 )

相关文章 | 多维度评价

作者旨在研究替米考星明胶微球在兔体内的靶向性。采用高效液相色谱法测定肌内注射给药不同时间兔体各脏器组织的药物浓度，利用3p97药动学软件无房室模型计算药时曲线下面积，结果显示替米考星明胶微球肺脏的靶向效率较心脏、肌肉、肝脏和肾脏提高了518±013、311±006、394±006和374±002倍；肺脏、心脏、肌肉、肝脏和肾脏的相对摄取率分别为823±004、159±003、265±004、209±002和220±001；肺脏、心脏、肌肉、肝脏和肾脏的峰浓度比分别为222±004、042±002、046±001、061±002和071±002。表明替米考星明胶微球具有良好的肺靶向性，同时可以减轻替米考星的心脏毒性。

藏鸡血管内皮生长因子基因表达与低氧适应

强巴央宗;谢庄;商鹏;李齐发;翟明霞;张浩

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1101-1105. doi:

摘要 ( 732 )

HTML( )

PDF (967KB) ( 623 )

相关文章 | 多维度评价

比较藏鸡在常氧（O2，21%）和低氧（O2，13%）浓度孵化环境中，胚胎尿囊绒毛膜（CAM）组织VEGF基因mRNA表达变化及其与低地矮小隐性白鸡的差别，分析VEGF表达与低氧适应的关系。结果发现低氧刺激使藏鸡和矮小隐性白鸡CAM组织VEGF表达均上调，矮小隐性白鸡上调程度明显大于藏鸡。结果说明在低氧环境中藏鸡CAM组织VEGF表达表现一定程度的增加，有利于血管形成，表现对低氧环境的适应；而低地鸡胚胎VEGF可能表现异常表达，不利于胚胎发育和存活。

肉牛PRKAG3基因多态性及其与胴体和肉质性状的关联分析

李武峰;杨润军;甘乾福;张路培;许尚忠;李俊雅;高雪

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1106-1111. doi:

摘要 ( 1147 )

HTML( )

PDF (724KB) ( 662 )

相关文章 | 多维度评价

本研究以晋南牛、鲁西牛、西门塔尔、安格斯、海福特、利木赞和夏洛莱7个品种共267头肉牛为试验材料，采用PCRRFLP技术检测PRKAG3基因多态性，找到了PRKAG3基因DNA序列中的 2个突变位点T2643C和T2885C(DQ082736)，同属第4内含子。2个基因多态性位点与肉牛胴体和肉质共9个性状的关联分析表明：PRKAG3基因T2885C变异位点的3个基因型间嫩度性状差异显著（P＜005），CC基因型最小二乘均值显著低于CD和DD基因型最小二乘均值。本研究结果可为肉牛肉质性状标记辅助选择提供依据。

鸭瘟病毒VP26基因克隆和分子特性分析

蔡铭升;程安春;汪铭书;朱德康;罗启慧;招丽婵;陈孝跃

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1112-1119. doi:

摘要 ( 777 )

HTML( )

PDF (830KB) ( 509 )

相关文章 | 多维度评价

利用作者实验室已构建的DPV CHv株基因文库重组质粒的DNA测序信息，结合NCBI的ORF Finder和BLAST工具分析得到了编码该病毒VP26蛋白基因（UL35）的ORF，然后采用PCR扩增出了VP26基因并将其克隆到pMD18T载体上，经PCR和酶切鉴定以及进一步的核酸斑点杂交试验证实该基因即为DPV的VP26基因。分子特性分析表明：该基因大小为 354 bp，编码117 aa，包含1个保守结构域，为Herpes_UL35，与小衣壳蛋白家族相关并在Herpes_UL35基因编码蛋白之间高度保守，而且DPV VP26蛋白与GenBank上多种α疱疹病毒同源蛋白的核酸和氨基酸序列具有较高的同源性。系统进化树分析表明，DPV在分类地位上归属于Alphaherpesvirus亚科，而且有可能属于新的属。另外，亚细胞定位分析表明，VP26主要定位于细胞核中。密码子偏爱性分析结果显示，编码VP26相同氨基酸的不同密码子使用频率有较大的差异，DPV VP26与大肠杆菌、酵母和人的密码子使用偏爱性差异分别有18、19和25个。上述研究结果为进一步研究DPV VP26蛋白的功能和作用机理提供分子生物学依据。

基于M基因的新城疫病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对临床样品中新城疫病毒检测的研究

曹军平;胡顺林;吴双;刘慧谋;刘晓文;王晓泉;吴艳涛;刘秀梵

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1120-1125. doi:

摘要 ( 739 )

HTML( )

PDF (1222KB) ( 535 )

相关文章 | 多维度评价

根据新城疫病毒M基因的保守序列，设计合成1对引物和TaqMan 探针,以作者实验室构建并保存的鹅源新城疫病毒ZJ1株M基因阳性重组质粒为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,结合ABI公司的7300型荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测新城疫病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RTPCR方法。该方法在106～101拷贝范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中3拷贝·μL-1 的病毒核酸,与传统的病毒分离方法具有相近的敏感性,二者对500份临床禽泄殖腔棉拭样品检测结果阳性数﹑阴性数符合率分别为900%﹑998%。经临床应用表明：荧光定量 PCR 的建立为早期诊断禽新城疫病毒、定量分析禽新城疫病毒感染程度奠定了基础。

应用兼并引物RT-PCR快速检测及鉴别气载鸡新城疫病毒

李晓霞;邱玉玉;于爱莲;柴同杰;王海荣;王志亮;刘敬博

畜牧兽医学报, 2009, 40(7): 1126-1130. doi:

摘要 ( 724 )

HTML( )

PDF (385KB) ( 518 )

相关文章 | 多维度评价

为了快速检测并鉴别鸡舍内外空气中的新城疫病毒（NDV），应用AGI30气体收集器在一大型商品肉鸡舍舍内外收集气体，同时采集鸡的气管和泄殖腔拭子，采用兼并引物RTPCR检测气体样品和拭子中的NDV，并鉴别NDV的毒力；同时分离、纯化气体样品中的NDV，用常规毒力学试验鉴别分离株的毒力。结果RTPCR检测到舍内2/15的气体样品和4/15的拭子中同时有强毒和弱毒株,3/15气体样品和13/15的拭子只有弱毒；舍外上风向5 m处气体样品检测结果均为阴性，舍外下风向5 m处1/3的样品只有弱毒；其他样品均为阴性；从RTPCR检测为阳性的样品中分离到3株强毒和4株弱毒株；从RTPCR检测为阴性的样品中均未分离到NDV。结果表明兼并引物RTPCR可直接、快速对气体样品进行检测及鉴别诊断。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

当期目录