畜牧兽医学报

民猪Y-box结合蛋白基因的克隆、表达以及冷刺激对其表达方式的影响

张冬杰;刘娣;;汪亮;张旭;别墅;孙洪涛;杨国伟

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1207-1212. doi:

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为了探讨Ybox结合蛋白（YB1）是否参与哺乳动物的冷适应反应，本研究采用RTPCR和Realtime PCR的方法克隆测序了民猪YB1基因的序列，检测了该基因在大肠、腿肌、肺脏、脂肪、心脏、脾脏和肝脏组织的表达情况，比较了该基因在冷刺激13 d后常温组（(10±2）℃）和冷刺激组（(-20±3)℃）个体的骨骼肌组织内的表达变化。结果表明，民猪的YB1基因完整的CDS区长975 bp，编码325个氨基酸，具有1个高度保守的冷休克域，存在多个磷酸化位点，不包含任何跨膜区域，是一种存在于细胞质中的蛋白质。组织表达谱表明YB1基因在所检测的7种组织内均高水平表达。该基因在被冷刺激13 d后，在腿肌内的表达水平出现显著下降（P＜0.05）。冷刺激造成了YB1基因转录发生了变化。

家鸭、媒鸭和野鸭mtDNA D-loop区的遗传变异

李慧芳;朱文奇;杨宁;宋卫涛;王继文;徐文娟;王强;陈宽维

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1213-1219. doi:

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旨在从mtDNA水平探讨我国家鸭的遗传多样性及家鸭与野鸭间的亲缘关系。运用DNA测序方法，测定了不同地域、水域和表型性状的9种家鸭（北京鸭、高邮鸭、巢湖鸭、绍兴鸭、连城白鸭、吉安红毛鸭、文登黑鸭、云南麻鸭、建昌鸭）80个个体、4 种媒鸭（西湖野鸭、钱江野鸭、枞阳媒鸭、媒头鸭）26个个体和斑嘴鸭8个个体，共计114个个体的mtDNA Dloop区 667 bp序列。9种家鸭单倍型多样度和核苷酸多样度分别为0.250 00~0.607 14 和0.000 38~0.001 18； 9种家鸭、媒鸭、绿头鸭和斑嘴鸭之间的遗传距离为0.001~0.015；39种单倍型系统发生树和单倍型网络关系图表明，9种家鸭主要属于A1亚簇（绿头鸭单倍型簇）。我国家鸭遗传多样性中等丰富，母系起源主要是绿头鸭，极少量个体含有斑嘴鸭血统。

Ghrelin对鸡等级前卵泡发育的影响

林金杏;毛赟杰;米玉玲;张才乔

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1220-1226. doi:

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旨在研究Ghrelin对产蛋鸡等级前卵泡发育的调节作用。通过RTPCR方法检测卵泡Ghrelin受体（GHSR）的表达情况，采用组织学和免疫组化方法探讨Ghrelin和促卵泡素（FSH）单独或联合处理对鸡等级前卵泡形态学的变化以及层粘连蛋白（LN）和缝隙连接蛋白43（Cx43）的标记率。结果表明，GHSR在颗粒层和膜层上均有表达，其表达量随着卵泡的发育分别至大白卵泡（LWF）和小黄卵泡（SYF）达到最高，随后逐渐降低。悬浮培养的卵泡经Ghrelin和FSH处理24 h后，LWF和SYF的颗粒层和膜层厚度及颗粒细胞密度均显著增加（P<0.05）。同时，颗粒细胞中LN和Cx43的标记率显著提高（P<0.05），且以Ghrelin与FSH联合处理组最为显著。结果提示，Ghrelin可通过提高LN和Cx43的表达以增强颗粒细胞的连接功能，促进鸡等级前卵泡颗粒细胞的增殖，并可协同FSH调节卵泡的发育。

MC4R和PROP1基因多态性及合并基因型与中国美利奴羊生长性状的关联分析

曾献存;陈韩英;贾斌;赵宗胜;惠文巧;张文祥;吴洪宾;王尊宝

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1227-1232. doi:

摘要 ( 450 )

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为了探讨MC4R和PROP1基因作为绵羊生长性状候选基因的可能性,寻找与绵羊生长性状相关的分子标记。本研究采用PCRSSCP方法检测中国美利奴羊和德国美利奴羊MC4R和PROP1基因的多态性，分析了多态位点不同基因型及合并基因型与中国美利奴羊生长性状的关联性。结果表明：MC4R基因MC4R3位点存在G894C突变，MC4R4位点3′侧翼区存在A1223G、G1229A和T1307G 3个突变位点；PROP1基因在外显子3上存在A2660G突变，导致Thr181Ala改变。关联分析表明，在中国美利奴羊群体中，MC4R4位点不同基因型个体体斜长和腰角宽差异显著(P<0.05)，优良基因型为BB; PROP1基因不同基因型个体尻宽和胸围差异显著(P<0.05)，优良基因型为BB；PROP1MC4R4优良基因型聚合体BBBB个体体斜长高于其它合并基因型个体(P<0.05)。结果提示绵羊MC4R和PROP1基因单核苷酸多态性及合并基因型对中国美利奴羊生长性状有一定的影响，可以作为进行绵羊生长性状分子标记辅助选择的候选基因。

玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响

王静;林嘉鹏;石庆华;陈博;汪立芹;赵云程;黄俊成

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1233-1238. doi:

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为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响，分别玻璃化冷冻GV期和IVM期（18、24 h）绵羊卵母细胞，解冻后进行体外培养。GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻解冻后，卵裂率(10.37%、23.17%、33.07%)均极显著低于对照组（82.96%，P<0.01），且冷冻解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻解冻后的IVM期卵母细胞（P<0.01）。本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因：Gdf9（生长分化因子9）、Zar1（合子阻泄因子）、Mater（胚胎必要的母体抗原）、Dnmt1（DNA甲基化转移酶1）在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明，4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞（P<0.01）；经玻璃化冷冻处理后，4个基因的mRNA表达量升高，其中GV期含量最高（P<0.01）。结果提示，绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高，可能会对胚胎发育产生负面影响。

中国荷斯坦牛泌乳曲线拟合研究

毛永江;张亚琴;许兆君;刘姗;张美荣;常玲玲;杨章平

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1239-1248. doi:

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为了解南方大型奶牛场中国荷斯坦牛泌乳曲线及其影响因素，利用5种泌乳曲线模型(Wood模型、Nelder逆多项式模型、WIL模型、混合对数模型和AliSchaeffer模型)和4种时间间隔方式（天、周、旬和泌乳月），对海丰奶牛场20092010年度980头第1～5胎具有完整泌乳期的中国荷斯坦牛296 895次日产奶量记录进行泌乳曲线拟合，并进一步分析不同模型、时间间隔和胎次3个因素对泌乳曲线拟合度及其参数的影响。结果表明，5种模型泌乳曲线拟合度变化范围为0.839 7～0.954 1，不同模型和胎次极显著影响泌乳曲线拟合度（P<0.01），时间间隔对泌乳曲线拟合度无显著影响（P>0.05）。AliSchaeffer模型拟合度最高，Nelder逆多项式模型拟合度最低；不论哪种泌乳曲线模型，第一胎拟合度均显著高于第三胎。不同模型、时间间隔和胎次均极显著影响参数a值（P<0.01），模型极显著影响参数b值（P<0.01），时间间隔显著影响参数b值（P<0.05）。模型和胎次均极显著影响高峰产奶量和产奶高峰日（P<0.01）。综合各方面情况，确定AliSchaeffer模型为适合于海丰奶牛场奶牛的最佳泌乳曲线模型。

利用亮甲酚蓝染色法预测牛卵母细胞发育潜能的研究

乔利敏;李向臣;乔富强;姚华;张文秀;关伟军;马月辉

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1249-1255. doi:

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利用亮甲酚蓝(Brilliant cresyl blue，BCB)对牛未成熟卵母细胞进行染色，根据染色结果的不同对牛未成熟卵母细胞进行分组培养，观察不同组间卵母细胞发育潜能与细胞凋亡的差异，探讨以BCB着色判定牛卵质量的可行性。本试验在牛卵母细胞成熟培养前用26 μmol·L-1 BCB染色90 min作为处理组（BCB+和BCB-），以未染色卵母细胞作为对照组；以卵内谷胱甘肽的浓度作为胞质成熟的判定指标，以卵母细胞体外受精后囊胚率作为卵子发育能力的判定指标，同时参照卵母细胞的凋亡检测，综合评定卵子的质量。结果表明：（1）着色组(BCB+)卵母细胞成熟率与对照组和无色组(BCB-)间差异显著（P＜0.05）；（2）成熟卵母细胞中谷胱甘肽的浓度较培养前差异显著（P＜0.05）；（3）经BCB染色，卵母细胞在成熟后，BCB+组的成熟率、凋亡率较对照组、BCB-组差异显著（P<0.05）；（4）体外受精后，BCB+组的囊胚率和囊胚细胞数较对照组和BCB-组差异显著（P＜0.05）。由此可见，牛卵母细胞经BCB的染色选择可以作为判断卵母细胞未来发育潜能的一个标记。

德州驴发情周期中卵泡动力学和激素变化规律的研究

葛利江;徐常林;石瑞青;谭景和;罗明久

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1256-1263. doi:

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本研究旨在揭示德州母驴发情季节的卵巢卵泡波变化特点以了解其卵泡的募集、选择、优势化、闭锁或者排卵，为驴人工授精和超数排卵提供可靠依据。本研究在德州驴发情季节（5～8月份）用直肠超声探查法每日检测5头德州母驴的10个排卵间隔的卵泡发育动态。同时每日采血，用放免法（RIA）检测E2、FSH、LH和IGF1浓度。研究结果发现：（1）驴的排卵间隔平均为(23.22±0.28) d,每个周期中存在2个卵泡波，其中有4个展示主主卵泡波，有6个展示次主卵泡波。（2）第1波和第2波开始出现募集的时间分别在排卵后的第1和第(10.2±1.4)天，募集的卵泡数分别为(5.2±1.2)和(4.0±0.3)个，选择的卵泡数分别是(2.3±0.5)和(2.5±0.4)个。第1和第2卵泡波开始优势化的时间分别在排卵后的第(5.8±0.6)和第(18.1±1.4)天。波峰平均出现时间分别为第(7.67±0.24)和第(23.22±0.28)天。波峰时优势卵泡平均最大直径分别为(26.44±2.37)和(40.7±2.45) mm。第1和第2波最大优势卵泡每日平均生长率分别为( 2.01±0.5)和(3.15±0.6) mm·d-1。（3）黄体（CL）最大直径平均为(37.61±1.58) mm，CL平均持续时间为(17.30±1.62) d。（4）E2浓度从排卵前3 d至排卵后2 d的发情期内均很高，平均维持在(46.47±9.53) pg·mL-1，在排卵前2 d达到峰值(62.84±4.89) pg·mL-1。（5）由于E2的负反馈作用,FSH浓度到优势卵泡最后阶段(即第7天闭锁或第23或24天排卵时)大幅度下降。（6）LH在排卵前几天迅速升高，在排卵后第2天达到峰值(4.69±0.43) mIU·mL-1。（7）IGF1的升降状况与E2基本相同，在排卵前1 d达到峰值(47.9±3.91) ng·mL-1。通过上述卵泡和激素动态学变化，本研究得出下述结论：驴的卵巢卵泡发育是以卵泡波形式进行的，每个发情周期中最常出现的是2个卵泡波；排卵发生于发情结束前2 d；E2 和IGF-1调节驴的发情活动；FSH调节小卵泡的募集；LH增高与排卵有关。

不同比例玉米与沙打旺混贮营养成分及有毒有害物质分析

冯鹏;;孙启忠

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1264-1270. doi:

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本研究通过玉米与沙打旺不同比例混贮，旨在寻求最优混贮比例以提高沙打旺发酵及营养品质，降低沙打旺有毒有害成分。设玉米与沙打旺1∶0、2∶1、1∶1、1∶2、0∶1 共5个混贮处理，每个处理3个重复，测定各处理pH值、挥发性脂肪酸、营养成分、真菌毒素、硝酸盐类、无机有毒元素。结果表明，随沙打旺混贮比例增加，各处理pH值和粗蛋白含量呈递增趋势，NDF和ADF含量呈递减趋势；玉米与沙打旺1∶1混贮处理乳酸含量最高，达到2.867 DM%；玉米与沙打旺混贮可以提高青贮饲料的氨基酸含量，混贮处理蛋氨酸含量分别为0.029 4、0.035 1 和0.025 4 μg·kg-1，均高于沙打旺单贮蛋氨酸含量，赖氨酸含量较玉米单贮分别提高57.2%和45.0% (P＜0.05)；各处理青贮饲料较青贮原料黄曲霉毒素含量增加，玉米赤霉烯酮、亚硝酸盐、硝酸盐含量减少；青贮对铅、砷、铬无机元素含量影响不显著。结果提示，玉米与沙打旺1∶1混贮处理营养成分及氨基酸含量较高，且有毒有害成分含量较低，为理想的混贮处理。

口蹄疫病毒3D蛋白对表位多肽免疫效果调节作用的研究

邵军军;王景锋;常惠芸;柳纪省

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1271-1276. doi:

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为了研究口蹄疫病毒(FMDV)重组蛋白3D对病毒表位抗原的免疫调节功能，笔者克隆了Asia 1型FMDV的3D蛋白基因，并实现了重组蛋白在E. coli的表达及纯化。将纯化的重组蛋白3D与重组抗原按1∶2混合，并与等体积的ISA 206佐剂混合，制备免疫原（每毫升含50 μg3D重组蛋白和100 μg重组抗原）。按每只豚鼠1 mL剂量经后腿肌肉多点接种250~300 g健康豚鼠5只，免疫后28 d用相同剂量的免疫原进行加强免疫；分别于免疫后0、21、28和42 d采血检测血清中和抗体效价，并进行淋巴细胞增殖试验。于加强免疫后14 d用103的50%豚鼠感染量（GPID50）的Asia1型FMDV进行攻击，评价免疫原效力。同时，设立重组抗原/ISA 2061（每毫升含100 μg重组抗原）、Asia 1型灭活疫苗（1 mL）和PBS/ISA 206（1 mL）作为对照。结果表明，3D重组蛋白能显著提高表位重组抗原的中和抗体水平和淋巴细胞的增殖水平（P<0.05），但与灭活疫苗组没有差别（P>0.05）；PBS对照组未检测到中和抗体和淋巴细胞增殖。结果提示，重组蛋白3D可显著提高重组表位抗原的免疫潜能，是一种十分重要的免疫调节蛋白，对开发新型疫苗具有重要的意义。

O型口蹄疫抗体金标试纸盒检测免疫动物抗体效价与攻毒保护关系

祁光宇;任维维;;智晓莹;刘西兰;张军;王宇;梁仲;蒋韬

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1277-1283. doi:

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本研究目的在于用O型口蹄疫金标试纸条研究免疫动物抗体效价与攻毒保护之间的对应关系以及免疫牛抗体消长规律。用金标试纸条检测了口蹄疫O型疫苗质量标准规定的牛、羊和猪免疫和攻毒血清抗体效价及不同免疫程序的牛血清效价。结果显示，当牛、猪和羊免疫血清稀释≥1∶8时，试纸条是阳性结果，表示有99%的被免疫动物属于抗体水平保护范围；被检测血清稀释≤1∶2时，是阴性结果，表示被免疫动物抗体水平属于不保护范围；血清稀释1∶2~1∶8时，是阳性结果，表示有50%的被免疫动物属于抗体水平保护范围。牛在首次免疫8周后加强免疫可以获得良好的保护率和保护时间。通过本试验确定了金标试纸条检测免疫动物抗体效价与攻毒保护之间的关系及牛加强免疫最佳的时间。

猪流感病毒多表位融合蛋白对小鼠的免疫原性分析

师小潇;哈卓;丁长根;潘洁;饶柏忠;刘惠莉

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1284-1288. doi:

摘要 ( 404 )

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作者拟利用表位多肽的抗原性及黏膜佐剂免疫增强作用，设计可通过黏膜途径免疫接种的猪流感病毒通用型疫苗。体外合成H1N1、H3N2亚型猪流感病毒表位抗原基因，C末端串联大肠杆菌热敏性肠毒素LTb基因，构建pET30(a)epLTb 表达载体，利用SDSPAGE、Western blot分析重组融合蛋白表达及生物学特性，小鼠免疫试验分析融合蛋白免疫原性。SDSPAGE检测表达蛋白相对分子质量约38 ku，主要以包涵体形式存在。重组蛋白可与抗Histag抗体和CTB抗体发生特异性反应。ELISA及HI试验检测，经黏膜途径免疫的小鼠产生了针对重组表位模拟抗原蛋白及H1N1、H3N2亚型猪流感病毒的血清抗体及局部黏膜分泌型IgA抗体。利用猪流感病毒表位抗原与LTb基因串连获得的融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性，且在黏膜接种局部产生理想的分泌型IgA抗体，能有效阻断病原由黏膜局部感染，为研制猪流感病毒通用型疫苗奠定了基础。

禽网状内皮增生症病毒gp90蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

石星明;张晶;赵妍;王玫;魏秀英;胡顺磊;全炎铭;闫帅;崔红玉;王云峰

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1289-1294. doi:

摘要 ( 425 )

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为获得分泌抗禽网状内皮增生症病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞，通过表达pET32agp90重组蛋白，以纯化的gp90蛋白为抗原，免疫BALB/c鼠，筛选分泌抗REV McAb的杂交瘤细胞株。经过细胞的融合及筛选，共获得能稳定分泌抗REV gp90的McAb细胞系2株，分别命名为A9E8和B3F8。2株细胞培养上清的效价均在1∶4×102 以上，腹水效价均在1∶8×103以上。亚型鉴定结果表明，2株皆为IgG型，轻链均为κ链；Western blot及间接免疫荧光结果显示，这2株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体均能识别REV全病毒抗原，与其发生特异性反应，并且不与禽类其他病毒发生反应；病毒中和试验结果表明，获得的单克隆抗体均能REV临床分离株发生中和反应，具有较好的中和活性。利用制备的单克隆抗体建立了REV的间接免疫荧光检测方法，临床病料检测结果表明，该方法与病毒分离及PCR的检测结果基本一致，阴、阳性符合率分别为100%和90%。作者制备了针对REV gp90的McAb，为REV的快速诊断及抗原表位分析与鉴定等奠定了基础。

中国部分地区绵羊肺炎支原体的基因多态性分析

许健;储岳峰;赵萍;高鹏程;贺英;剡根强;逯忠新

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1295-1301. doi:

摘要 ( 404 )

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为了解绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae, Mo）在我国部分地区的流行病学特征，采用随机扩增多态性DNA（RAPD）及限制性片段长度多态性（RFLP）方法对26株Mo基因多态性进行了研究，并利用NTsys2.10e软件对获得的多态性图谱进行了聚类分析。结果在相似系数为0.70时，26株Mo可分成6个RAPD群或6个RFLP群；相似系数为0.90时，分成18个RAPD群或18个RFLP群；相似系数为1.00时，分成25个RAPD群或26个RFLP群。结果表明，我国Mo存在高度的基因多态性，这种多态性与地域差异相关，与宿主来源也具有一定的相关性。研究结果为了解我国Mo的分子流行病学特征打下了基础，也为建立有效的Mo诊断方法和疫苗研制提供了参考依据。

多头带绦虫Tm7基因的表达及间接ELISA检测方法的建立

安晓雪;杨光友;王颖旺;牟静;阳爱国;古小彬;杨应东;韦雷飞;文建国;王淑贤;边尧

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1302-1308. doi:

摘要 ( 419 )

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以多头带绦虫Tm7重组蛋白为抗原，建立动物多头蚴病早期诊断方法。本研究从羊脑多头蚴原头节提取总RNA，采用RT-PCR技术首次扩增出Tm7基因的全序列，该基因的开放阅读框为207 bp，编码68个氨基酸。将此基因克隆到pET-32a(+)载体，构建重组表达质粒pET-32a-Tm7，经转化大肠杆菌BL21（DE3）后IPTG诱导表达，用SDS-PAGE和Western blot检测表达产物。以纯化后的表达蛋白作为抗原，建立检测羊脑多头蚴病抗体的重组蛋白间接ELISA方法。研究结果表明，Tm7基因在大肠杆菌中成功表达，表达产物为约27 ku的融合表达蛋白，该蛋白能识别羊脑多头蚴病阳性血清。建立的间接ELISA方法，检测敏感性可达93.3%，特异性达94.1%，研究结果表明Tm7重组蛋白可作为脑多头蚴病的诊断抗原。

鸭β-防御素4 cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析

蔺利娟;韩宗玺;邵昱昊;张可心;刘胜旺;李子瑞;马得莹

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1309-1315. doi:

摘要 ( 408 )

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本研究旨在克隆与表达鸭β防御素4（AvBD4）基因及测定其生物学特性，并检测其在鸭脏器组织中的分布。采用RTPCR方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭AvBD4，其cDNA大小为171 bp，编码56个氨基酸。经同源性分析，鸭AvBD4与鸡AvBD4的氨基酸序列同源性最高，达73.2%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX6p1的EcoRⅠ和SalⅠ双酶切位点上，构建重组表达质粒pGEXduck AvBD4。将重组质粒转化大肠杆菌BL21，于37 ℃进行诱导表达，SDSPAGE电泳表明，重组鸭AvBD4蛋白的相对分子质量约为32 ku，与预期大小一致。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性，结果显示，重组鸭AvBD4蛋白具有广谱的抗菌活性，对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。在高盐离子条件下，重组鸭AvBD4蛋白仍具有抑制金黄色葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌的作用。此外，该重组蛋白的溶血活性极低。运用实时荧光定量PCR法检测到该基因在鸭组织器官中表达局限，仅在盲肠扁桃体、脾脏和法氏囊中表达。

祝玉;苏利娅;王丽平

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1316-1321. doi:

摘要 ( 442 )

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本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白2（MRP2）在健康和感染大肠杆菌的SD大鼠肝脏、十二指肠、空肠、回肠和结肠中的分布特点和mRNA表达水平。选用健康成年SD大鼠20只，随机分成健康对照组和大肠杆菌感染组，采用免疫组织化学和荧光定量PCR的方法检测了MRP2在大鼠肝脏和肠组织中的定位与表达。结果显示：MRP2在健康和感染大鼠不同组织中均有分布，主要见于肝脏的胆管面（肝脏毛细胆管的细胞膜）、肝脏门静脉区和各肠段的肠黏膜层，但蛋白表达水平不同。健康组大鼠MRP2在肝脏毛细胆管的细胞膜分布比门静脉区附近广泛，在肝脏毛细胆管的细胞膜和门静脉区表达均为强阳性；在十二指肠和空肠的表达为强阳性，在回肠和结肠表达为阳性；与健康组相比，MRP2在感染组大鼠的蛋白表达水平均较弱，主要表现为十二指肠和空肠为阳性，回肠和结肠中为弱阳性，肝细胞的胆管面为阳性，肝脏门静脉区附近呈弱阳性。MRP2 的mRNA在健康和大肠杆菌感染大鼠的肝脏和肠组织中均有表达，但表达水平也存在差异。与健康组大鼠相比，MRP2 mRNA表达量在大肠杆菌感染组大鼠肝脏和小肠中显著下调（P<0.05）。SD大鼠感染大肠杆菌后可引起肝脏、小肠组织中MRP2 在mRNA和蛋白水平的表达下调。

敌敌畏和高脂对香猪肝肾及动脉损伤机理分析

李升;徐霖;牛熙;冉雪琴;王嘉福;

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1322-1327. doi:

摘要 ( 445 )

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为了探讨亚中毒剂量有机磷杀虫剂长期作用对猪体造成损害的机理，选择香猪作为实验动物，随机分为对照组、敌敌畏处理组和高脂处理组，饲养12个月后，分析香猪的肝、肾、动脉病理切片和相关酶活性变化。经预试验确定敌敌畏的亚中毒剂量为2.5 mg·(kg·2d)-1。以此剂量长期作用12个月后，敌敌畏能导致香猪严重的肝、肾细胞损伤，并使血清胆碱酯酶活性降低，对氧磷酯酶活性及其mRNA水平极显著下降（P＜0.01），但对大动脉组织结构、血脂水平和体质量的影响不明显。高脂处理组中，香猪的体质量明显增加（P＜0.05），同时血清胆碱酯酶活性、血清总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白水平均上升（P＜0.05），对氧磷酯酶活性及其基因的表达量下降（P＜0.05）。此外，大动脉血管壁内侧形成明显的脂质斑块和血栓；肝细胞受到一定损害，而肾组织受到的影响较小。研究结果提示，敌敌畏和高脂通过不同的途径刺激机体氧化应激反应，抑制对氧磷酯酶的活性；亚毒剂量的敌敌畏长期作用对肝肾造成的严重损害，提示应对猪场环境及饲料中的有机磷农药污染给予高度重视。

雄性关中奶山羊胎儿生殖细胞增殖分化的研究

刘超;朱海鲸;刘维帅;郑伟俊;王静;杨春荣;华进联

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1328-1336. doi:

摘要 ( 370 )

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旨在阐明山羊胚性腺的发生规律，这对于山羊的繁殖育种、丰富胚胎学有关研究内容都具有重要意义。该研究对22枚从39日胎龄胎儿至初生奶山羊性腺进行石蜡组织切片，用组织学和免疫组化、免疫荧光方法对山羊胎儿性腺发育的组织学特点，山羊胎儿性腺发育过程中VASA及细胞增殖核抗原（PCNA）的表达规律进行了系统研究。结果表明：奶山羊性腺在39～47日胎龄时已出现精索和白膜，已发生性别分化，并可分辨出生殖细胞、支持细胞及间质细胞，细胞增殖率较高。在大约50日胎龄前生殖细胞可称作性原细胞，细胞为球形、核质比高。在51～59日胎龄，生殖细胞发生剧烈变化：体积增大、核质比降低。此后逐渐由性原细胞发育为前精原细胞，并且在此期间表达VASA的生殖细胞增多。50～90日胎龄，生殖细胞增殖率最高，生殖细胞所占比例也达到峰值。在90日胎龄后生殖细胞增殖率下降，比例下降，间质细胞大量退化。结果表明，山羊胎儿的生殖细胞在50日胎龄后由性原细胞发育为前精原细胞，生殖细胞在50～90日胎龄的增殖率最高，VASA可作为雄性山羊胎儿前精原细胞的标记。

西南矮马矮小性状基因SHOX的克隆测序和多态性研究

乌尼尔夫;塔娜;孙玉江;芒来

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1337-1340. doi:

摘要 ( 407 )

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本研究首次克隆出西南马矮小性状基因完整第二外显子序列，GenBank登录号为EU556739；通过PCRSSCP方法对8个品种150匹马的该序列做了多态性分析，在P2位点上268 处有1个 G→A 的突变，和431 处有1个 T→G 的突变导致了等位基因 B 变为等位基因 A。该位点除云南文山马(WS)的优势基因型和优势等位基因分别为AB型和B外，其余类群马均为BB型和B。云南丘北马(QB)、云南文山马(WS)、云南大理马(DL)、建昌马(JC)和设特兰马(ST)在P2位点上处于HardyWeinberg平衡状态。

某海兰褐鸡场祖代、父母代及商品代鸡血管瘤型ALV-J的分离与鉴定

倪伟;秦立廷;孙洪磊;曲悦;孙美玉;高玉龙;于宏;王笑梅;刘思当

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1341-1345. doi:

摘要 ( 554 )

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从山东省某海兰褐鸡场祖代、父母代种鸡和商品代蛋鸡中获得疑似血管瘤型禽白血病（Avian leukosis，AL）病料。采用病理剖检、IFA、分子生物学检测，确定为J亚群禽白血病。从祖代、父母代病料中各分离到1株J亚群禽白血病病毒(J subgroup of avian leukosis virus，ALV-J)，从商品代蛋鸡中分离到4株ALV-J。根据原型毒株HPRS103设计1对gp85基因引物，获得gp85基因序列。获得的gp85基因序列与各亚群参考毒株序列核苷酸同源性比对，结果显示：分离自商品代蛋鸡的Commercial03株、Commercial04株、Commercial06株和父母代分离株Parent02株位于同一分支，同源性在97.2%～97.9%，与HPRS103株同源性94.7%～95.2%；Commercial05株与祖代分离株Grandparent01株在同一分支，与HPRS103株同源性为98.3%，4株分离自商品代的ALV-J同源性为95.0%～99.9%。表明商品代蛋鸡中的ALV-J可能来自父母代或祖代种鸡的垂直传播，也可能来自于其他来源的水平传播。从同一鸡场祖代、父母代及商品代鸡中分离得到ALVJ，这在我国还是首次。对后续研究其基因突变、致瘤机制等奠定了良好的基础。

犬血浆中塞拉菌素含量的高效液相色谱-荧光检测方法的建立

汪芳;李冰;周绪正;张继瑜;李剑勇;李金善;牛建荣;魏小娟;杨亚军

畜牧兽医学报, 2011, 42(9): 1346-1350. doi:

摘要 ( 472 )

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本研究以多拉菌素为内标，建立了犬血浆中塞拉菌素的高效液相色谱荧光检测方法。用乙腈作为血浆蛋白沉淀剂，用SampliQ C18型SPE固相萃取柱进行净化，用1甲基咪唑和三氟乙酸酐衍生化处理。色谱条件为ODS1色谱柱（250 mm×4.6 mm），流动相为甲醇∶乙腈∶1% 1庚烷磺酸∶0.4%乙酸=40.0∶57.6∶0.9∶1.5（v/v/v/v），流速1 mL·min-1，进样量20 μL，激发波长355 nm，发射波长465 nm,柱温30 ℃。方法的检测限为0.25 ng·mL-1，线性范围0.5~50.0 ng·mL-1，变异系数为1.47%~3.31%，方法的样品平均回收率为94.0%。结果表明，所建方法准确、灵敏度高和重复性好，可用于犬体内塞拉菌素血药含量的测定。

中国标准连	ISSN 0366-6964
续出版物号	CN 11-1985/S

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