p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核达载体构建

畜牧兽医学报 ›› 2011, Vol. 42 ›› Issue (8): 1071-1080.

p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核达载体构建

赵贵民，杨文琳，吴苏君，云彦，雷安民*

（西北农林科技大学动物医学院，陕西省干细胞工程技术研究中心，陕西省农业分子生物学重点实验室，杨凌 712100）

收稿日期:2010-07-01 修回日期:1900-01-01 出版日期:2011-08-30 发布日期:2011-08-30
通讯作者: 雷安民

Received:2010-07-01 Revised:1900-01-01 Online:2011-08-30 Published:2011-08-30

摘要/Abstract

摘要： 本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达，并构建其真核表达载体。首先利用RTPCR和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mRNA和蛋白表达进行检测。然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pVenusP21真核表达载体。经脂质体2000介导重组质粒pVenusP21转染Hela细胞，通过荧光显微镜观察、RTPCR检测，确认重组质粒在Hela细胞内的表达及定位。最后应用体外转录试剂盒将p21venus体外转录为cRNA，并注射牛卵母细胞，荧光显微镜下观察其表达及定位。结果显示，在牛卵体外成熟过程中，各时期均存在p21基因mRNA及蛋白的表达。构建的真核表达载体pVenusP21能够在Hela细胞中正确表达及定位。p21venus cRNA显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位，为研究P21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础。

关键词: 牛卵母细胞, p21基因, 体外转录, 显微注射

赵贵民;杨文琳;吴苏君;云彦;雷安民. p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核达载体构建[J]. 畜牧兽医学报, 2011, 42(8): 1071-1080.

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